【文章內(nèi)容簡介】 搖勻后放入 樣品 +40ml 磷酸緩沖液 30℃ 恒溫水浴槽中，每 5min 搖勻一次，反應 30min，在 5min 內(nèi)測定 pH 值。 5. 計算：尿素酶活化度（ pH 值上升值） =試樣的 pH 測定值 空白的 pH 值 方法二 尿素酶快速測定法 —— 酚紅法（參考法） 1. 稱取 經(jīng)磨細的豆粕樣品放置試管中，注入 2%尿素 1ml，開始計時，加入指示劑苯酚 2 滴，再加入 8ml 蒸餾水，（ 2030s）開始震搖試管約 10s，直至全脂豆粕浮在液體層，每搖動 10s 約等待 3s，再觀察溶液層顏色，如果出現(xiàn)粉紅色，計下時間，與尿素酶活性表對照，如果顏色不變，則再搖 10s 約等待 3s，然后再觀察溶液層顏色，重復操作，如一直不變，再重頭開始。（做實驗以前，要先做空白實驗，如果呈粉紅色則指示劑已經(jīng)不能用，重新配置指示劑。震搖停止后觀察溶液的顏色時要等 3s，不可太快或太慢，否則會看錯 ，晚間不能做該實驗。 時間（ min） 豆粕尿素酶活性 01 以上 12 23 56 67 79 12 無色 0 方法三：尿素酶活性快速測定法 —— 酚紅法（粗略法） 1. 原理：尿素酶 + 尿素 氨氣（用酚紅作指示劑） （ 1） N 氫氧化鈉 ：稱 氫氧化鈉溶于 100ml 水中。 （ 2） 硫酸：將 濃硫酸加入 1000ml 水中稀釋。 （ 3） 尿素 — 酚紅溶液： 酚紅溶于 35ml 水中 + 氫氧化鈉 14 混合 硫酸滴定 琥珀色 21g 尿素溶于 300ml 水中 2. 方法：將一匙粉碎過的黃豆粕放入小玻皿中，將已調(diào)好的尿素 —— 酚紅溶液加入小玻皿中的豆粕上，直至完全錦濕，停留 5min，觀察豆粕的紅色反應。 少量 紅點 微量活躍（△ pH=） 約 25%紅點 中度活躍（△ pH=） 約 50%紅點 活躍（△ pH=） 約 75%紅點 非常活躍（△ pH≧ ） 5min 沒紅點出現(xiàn)，停留 25min 任無 豆粕過熟 實驗十 氯化膽堿含量的測定 一 . 70%氯化膽堿水溶液中氯化膽堿含量的測定 ：乙酸汞 + 氯化膽堿 氯化汞 + 乙酸鹽 高氯酸 滴定 （ 1） 冰乙酸：優(yōu)級純 （ 2） 乙酸汞試液： 50g/L，取 5g 乙酸汞研細，加 100ml 溫熱的冰乙酸溶解 （ 3） 結晶紫指示劑： 2g/L，取 結晶紫，加 100ml 冰乙酸 （ 4） 高氯酸標準溶液（ ） 樣品 + 20ml 冰乙酸 +2ml 乙酸酐 +10ml 乙酸汞試液 + 2 滴結晶紫指示液 搖勻，用高氯酸標準溶液滴定至溶液呈純藍色，同時進行空白測定。 氯化膽堿 % = 100 式中： c0—— 高 氯酸標準溶液的濃度 V—— 滴定試樣時消耗的高氯酸溶液體積 V0—— 滴定空白時消耗的高氯酸溶液體積 M—— 試樣的質量 二 次平行測定結果絕對差值不大于 %，取其平均值 二 . 50%氯化膽堿粉劑中氯化膽堿含量的測定： 原理，試樣制備不同，其余與一同 1. 原理： 將樣品中的氯化膽堿用甲醇萃取出來，蒸發(fā)掉溶劑后，再用非水滴定法測定其中的氯化膽堿含量。 2. 試樣的制備 稱取在 105℃下干燥 3h的樣品 ，置于 250ml錐形瓶中，加 40ml甲醇，充分搖動 30min后過濾，再用約 20ml 甲醇洗滌沉淀 4 次，將濾液和洗液合并，在水浴上蒸發(fā)至干，備用。 CO （ VV0） m 1000 15 3. 測定： 試樣加微熱冰乙酸 20ml 后，按一 .3 程序操作測定。 允許平行差值不大于 %，取其 平均值。 三 . 50%氯化膽堿粉劑中氯化膽堿含量的快速測定 105℃下干燥 3h 的樣品 置于 250ml 的錐形瓶中， +40ml 冰乙酸 ，在電爐上加熱保持微沸 10min， + 2ml 乙酸酐 +2 滴結晶紫指示劑，在用高氯酸標準溶液滴定至溶液呈純藍色。 實驗十一 油脂酸價的測定 1. 原理： 用中性乙醚 乙醇混合溶液溶解油脂及其脂肪酸，再用堿標準溶液滴定。 2. 試劑準備 （ 1） 中性乙醚 乙醇混合溶液：乙醚與乙醇 2： 1 混合，臨用前以酚酞為指示劑，用 氫氧化鈉標準溶液滴定至中性。 （ 2） 的氫氧化鉀標準溶液 3. 測定 35g 樣品 + 中性乙醚 乙醇混合液 50ml + 3 滴酚酞指示劑 氫氧化鉀滴定 淡紅色 4. 數(shù)據(jù)處理 酸價 = —— 氫氧化鉀的摩爾質量 實驗十二 油脂過氧化值的測定 ： 油脂中的過氧化物 + 碘化鉀 碘用硫代硫酸鈉滴定 （ 1） 氯仿 冰乙酸混合溶液：氯仿 40ml 加冰乙酸 60ml，混勻 （ 2） 飽和碘化鉀溶液：取碘化鉀 5g，加水 10ml （ 3） （ 4） %淀粉指示劑 23g 試樣，注入 250ml 碘量瓶中，加入 30ml 氯仿 冰乙酸混合溶液，振搖使試樣溶解，加1ml飽和碘化鉀溶液，加塞后搖勻，在暗處放置 3min，取出加水 100ml，搖勻后立即用 的硫代硫酸鈉標準溶液滴定至淡黃色，加 %淀粉指示劑 1ml，滴定至藍色消失為止，再做空白實驗。 過氧化值 %（以碘 %表示） = —— 與 1mlmol/l 硫代硫酸鈉標準溶液相當?shù)牡獾目藬?shù) 氫氧化鉀溶液濃度消耗氫氧化鉀體積 試樣的質量 （耗硫代硫酸鈉體積 空白耗其體積）其濃度 試樣的質量 16 實驗十三 魚粉摻假檢測及真蛋白質的測定 一 .魚粉中摻尿素的測定 1. 原理 尿素 尿素酶 氨態(tài)氮 甲酚紅 紅色與尿素含量成正比 2. 定性測定 試劑： %甲酚紅指示劑， 甲酚紅溶于 100ml95%乙醇中 方法一： 5g 魚粉加入二支試管中，其中 1 支加入少許黃豆粉，各加蒸餾水 5ml，振搖后置 6070℃水浴中放 30min，取出后滴加 6滴 %甲酚紅指示劑，如果加黃豆粉的試管出現(xiàn)深紫紅色，說明摻有尿素，無尿素呈黃色或棕黃色 方法二 ： 取魚粉 2g 于燒杯中，加水 20ml，攪 拌后放置幾分鐘后過濾，取樣品濾液 2ml 于白色蒸發(fā)皿中，加 3 滴 %甲酚紅指示劑，再加 6 滴黃豆液（ 5g 黃豆粉加水 100ml 浸泡 1h，取其濾液），靜置 5min，若有尿素存在即呈深紫色且散開象蜘蛛網(wǎng)樣。無尿素呈黃色。 3. 定量測定 （ 1）試劑 1) 對二甲氨基甲醛（ DMAB）溶液：溶解 于 100ml 無水乙醇中加 10ml 濃鹽酸搖勻。 2) 尿素標準溶液：儲備液，稱取 尿素，用水稀釋至 100ml ：量取 10ml 儲備溶液稀釋至 100ml ：量取 10ml 儲備液 稀釋至 50ml，再取此稀釋液 10ml 稀釋至 100ml 3) 乙酸鋅溶液：溶解 （ AC） 2﹒ 2H2O 于水中，加入 3ml 冰乙酸，并稀釋到 100ml 4) 亞鐵氰化鉀溶液：稱取 （ CN） 用水稀釋到 100ml 5) 磷酸鹽緩沖液（ pH=7）：將 無水磷酸二氫鉀和 無水磷酸氫二鉀分別溶于100ml 水中，合并次二溶液，并稀釋至 1000ml 6) 活性炭 （ 2）測定方法 a) 樣品制備：樣品粉碎到 20 目以下，稱取 樣品于 150ml 燒杯中，加入 1g 活性炭并準確移取 90ml 水，搖勻，放置 10min，再分別加入 5ml 乙酸鋅溶液和 5ml 亞鐵氰化鉀溶液，攪勻并放置 30min，用濾紙過濾，濾液待用。同時做空白實驗。 b) 標準曲線繪制 測 1%以上尿素含量的樣品，用 ，用 1cm 比色池；含量在 1%以下的樣品，用 ，用 2cm 比色池。 分別取尿素標準液 5ml于 9個 25ml具塞比色管中，加水約 18ml，分別加入 DMAB 液 5ml，用水稀釋到刻度，搖勻，放置 10min。然后以 0ml標準管為參比，在 420nm 波長下，測 定吸光度。以吸光度為縱坐標，尿素濃度為橫坐標作圖，圖形應該為一條直線，否則重做。 17 C） 樣品測定 準確移取一定量樣品濾液（樣品尿素含量在 1%以下取 15ml， 1%以上取 5ml）于 25ml 比色管中，以下操作同 b）。由所測吸光度查標準曲線。 樣品尿素含量在 1%以下時：尿素（ %） =2/3 （ C – C0） /m 樣品尿素含量在 1%以上時：尿素（ %） =2（ C – C0） /m 式中： —— 分別是測定樣品和試劑空白所查得的尿素含量， mg m—— 測定樣品重， g 二 .魚粉中摻入植物質、胺鹽和 鞣革粉的化學檢驗 （１） 適用范圍：適用于生產(chǎn)、加工、經(jīng)銷、調(diào)撥的飼料級魚粉中摻入植物質、胺鹽和鞣革粉的直接化學鑒別檢驗． （２） 試劑 1) 碘 2) 碘化鉀 3) 間苯三酚 4) 二苯基卡巴腙 5) 碘化汞 化學純 6) 氫氧化鈉 7) 乙醇 8) 硫酸 9) ６ mol/l 氫氧化鈉溶液 10) ２ mol/l 硫酸溶液 11) 碘－碘化鉀溶液：取碘化鉀６ g 溶于１００ ml 水中，再加入２ g 碘溶解搖勻． 12) 間苯三酚溶液：取間苯三酚２ g 加９０％乙醇到１００ ml 使溶解，搖勻 13) 二苯基卡巴腙溶液：取二苯基卡巴腙０ .２ g，加９０％乙醇１００ ml 使溶解，搖勻 14) 奈斯勒試劑：取碘化汞２３ g，碘化鉀１ .６ g 于１００ ml 的６ ml／ l 氫氧化鈉溶液中，混合均勻．傾取上清液放置到棕色瓶中保存． 15) 生豆粉：取新鮮干燥的大豆粉或刀豆粉碎后，過４０目，加蓋保存． 16) 尿素酶溶液：稱取尿素酶０ .２ g 溶于 50ml 水中 ,冰箱保存 . 17) 甲酚紅指示劑 :稱取 甲酚紅溶于 10ml 乙醇中 ,溶解后再加乙醇到100ml. ( 3 ) 魚粉中摻入植物質的檢驗 1) 原理 :植物質中含有木質素和淀粉 .木質素 +間苯三酚在強酸條件下反應 ,產(chǎn)生紅色的化合物 ,淀粉與碘化鉀反應可產(chǎn)生藍色化合物 . 2) 方法 : 12g 魚粉于 50ml 燒杯中 ,加入 10ml 水加熱 5min,冷卻 ,滴 入 2 滴碘 碘化鉀溶液 ,觀察顏色變化 ,如果溶液顏色立即變?yōu)樗{色表明試樣中有淀粉存在。 另取魚粉 1g 置于表面皿中，用間苯三酚溶液浸濕，放置 510min，滴加濃鹽酸 23滴，觀察顏色，如果試樣呈深紅色，則表明試樣中含有木質素。 （ 4）魚粉中摻入銨鹽的檢驗 1) 原理：銨鹽一般都含有氨態(tài)氮，奈斯勒試劑能與含氨態(tài)氮物質產(chǎn)生黃褐色沉淀，尿素在堿性條件下，由于尿素酶的催化作用，可生成氨態(tài)氮。 2) 檢驗方法：取魚粉試樣 12g 于試管中，加 10ml 水振搖 2min，靜置 20min，取上 18 清液 2ml 到蒸發(fā)皿中，加入 1mol/l 氫氧化鈉 溶液 1ml 置水浴上蒸干，再加水數(shù)滴和生豆粉約 10mg，靜置 23min，加奈斯勒試劑 2 滴。如試樣有黃褐色沉淀產(chǎn)生則表明有尿素存在。 魚粉中摻有銨態(tài)氮物質的檢驗方法：取魚粉 12g，加水 10ml，振搖 2min，靜置 20min，取上清液 2ml 加 1mol/l 氫氧化鈉 1ml，加奈斯勒試劑 2 滴。如試樣有黃褐色沉淀表明有 NH4+存在。 （ 5） 魚粉中摻入 鞣革粉的檢驗 1） 原理：用鉻鞣制的皮革中 均含有鉻，將魚粉灰化，鞣鉻中有一部分鉻轉化為 6價鉻，在強酸性條件下， 6 價鉻可與二苯基卡巴腙反應生成鉻 二硫代卡巴腙的紫紅色水溶性化合 物。 2） 方法：取魚粉試樣 13g 于坩堝中置于電爐上炭化到煙散盡，于 550660℃高溫爐中灰化 30min，直到卻變?yōu)榛野咨尤?2mol/l 硫酸溶液 10ml 攪拌，加二苯基卡巴腙溶液數(shù)滴，觀察顏色變化，如紫紅色表明魚粉中摻有鞣革粉。 （ 6） 真蛋白的測定 方法一：鹽析法 1) 試劑： I. 硫酸銅溶液： 10%，稱取 硫酸銅加水溶解，并稀釋到 500ml。 II. 氫氧化鈉溶液： %，稱取 氫氧化鈉，加水溶解，并稀釋到 500ml。 ： 。 2） 測定 1g 樣品 + 50ml 蒸餾水于 250ml 燒杯中，于電爐上加熱煮沸，加入 20ml10%硫酸銅溶液，再在攪拌下緩緩加入 %氫氧化鈉溶液，搖勻，從電爐上取下，室溫下放置 2h。沉淀物用中速定性濾紙傾瀉法過濾。并用少量 70℃以上熱水多次洗滌燒杯和沉淀物，直至濾液無硫酸根離子（用 5%BaCl2 溶液