【正文】 in，靜置 20min，取上 18 清液 2ml 到蒸發(fā)皿中，加入 1mol/l 氫氧化鈉 溶液 1ml 置水浴上蒸干，再加水?dāng)?shù)滴和生豆粉約 10mg，靜置 23min，加奈斯勒試劑 2 滴。 另取魚粉 1g 置于表面皿中，用間苯三酚溶液浸濕，放置 510min，滴加濃鹽酸 23滴，觀察顏色，如果試樣呈深紅色，則表明試樣中含有木質(zhì)素。由所測吸光度查標(biāo)準(zhǔn)曲線。以吸光度為縱坐標(biāo)，尿素濃度為橫坐標(biāo)作圖，圖形應(yīng)該為一條直線，否則重做。 分別取尿素標(biāo)準(zhǔn)液 5ml于 9個 25ml具塞比色管中，加水約 18ml，分別加入 DMAB 液 5ml，用水稀釋到刻度，搖勻，放置 10min。同時做空白實驗。 3. 定量測定 （ 1）試劑 1) 對二甲氨基甲醛（ DMAB）溶液：溶解 于 100ml 無水乙醇中加 10ml 濃鹽酸搖勻。 過氧化值 %（以碘 %表示） = —— 與 1mlmol/l 硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)?shù)牡獾目藬?shù) 氫氧化鉀溶液濃度消耗氫氧化鉀體積 試樣的質(zhì)量 （耗硫代硫酸鈉體積 空白耗其體積）其濃度 試樣的質(zhì)量 16 實驗十三 魚粉摻假檢測及真蛋白質(zhì)的測定 一 .魚粉中摻尿素的測定 1. 原理 尿素 尿素酶 氨態(tài)氮 甲酚紅 紅色與尿素含量成正比 2. 定性測定 試劑： %甲酚紅指示劑， 甲酚紅溶于 100ml95%乙醇中 方法一： 5g 魚粉加入二支試管中，其中 1 支加入少許黃豆粉，各加蒸餾水 5ml，振搖后置 6070℃水浴中放 30min，取出后滴加 6滴 %甲酚紅指示劑，如果加黃豆粉的試管出現(xiàn)深紫紅色，說明摻有尿素，無尿素呈黃色或棕黃色 方法二 ： 取魚粉 2g 于燒杯中，加水 20ml，攪 拌后放置幾分鐘后過濾，取樣品濾液 2ml 于白色蒸發(fā)皿中，加 3 滴 %甲酚紅指示劑，再加 6 滴黃豆液（ 5g 黃豆粉加水 100ml 浸泡 1h，取其濾液），靜置 5min，若有尿素存在即呈深紫色且散開象蜘蛛網(wǎng)樣。 2. 試劑準(zhǔn)備 （ 1） 中性乙醚 乙醇混合溶液：乙醚與乙醇 2： 1 混合，臨用前以酚酞為指示劑，用 氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至中性。 三 . 50%氯化膽堿粉劑中氯化膽堿含量的快速測定 105℃下干燥 3h 的樣品 置于 250ml 的錐形瓶中， +40ml 冰乙酸 ，在電爐上加熱保持微沸 10min， + 2ml 乙酸酐 +2 滴結(jié)晶紫指示劑，在用高氯酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液呈純藍(lán)色。 CO （ VV0） m 1000 15 3. 測定： 試樣加微熱冰乙酸 20ml 后，按一 .3 程序操作測定。 氯化膽堿 % = 100 式中： c0—— 高 氯酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度 V—— 滴定試樣時消耗的高氯酸溶液體積 V0—— 滴定空白時消耗的高氯酸溶液體積 M—— 試樣的質(zhì)量 二 次平行測定結(jié)果絕對差值不大于 %，取其平均值 二 . 50%氯化膽堿粉劑中氯化膽堿含量的測定： 原理，試樣制備不同，其余與一同 1. 原理： 將樣品中的氯化膽堿用甲醇萃取出來，蒸發(fā)掉溶劑后，再用非水滴定法測定其中的氯化膽堿含量。 （ 3） 尿素 — 酚紅溶液： 酚紅溶于 35ml 水中 + 氫氧化鈉 14 混合 硫酸滴定 琥珀色 21g 尿素溶于 300ml 水中 2. 方法：將一匙粉碎過的黃豆粕放入小玻皿中，將已調(diào)好的尿素 —— 酚紅溶液加入小玻皿中的豆粕上，直至完全錦濕，停留 5min，觀察豆粕的紅色反應(yīng)。 時間（ min） 豆粕尿素酶活性 01 以上 12 23 56 67 79 12 無色 0 方法三：尿素酶活性快速測定法 —— 酚紅法（粗略法） 1. 原理：尿素酶 + 尿素 氨氣（用酚紅作指示劑） （ 1） N 氫氧化鈉 ：稱 氫氧化鈉溶于 100ml 水中。（做實驗以前，要先做空白實驗，如果呈粉紅色則指示劑已經(jīng)不能用，重新配置指示劑。 2. 儀器 （ 1） 可調(diào)節(jié)溫度的恒溫水浴鍋 （ 2） pH 計 （ 3） 50ml 碘瓶 3. 試劑 （ 1） 磷酸二氫鉀 （ 2） 磷酸氫二鉀 （ 3） 尿素 [CO（ NH2） 2] （ 4） 甲苯 （ 5） 磷酸緩沖液： 磷酸二氫鉀 100ml 水中 13 混合 1000ml，調(diào) pH 為 磷酸氫二鉀 100ml 水中 （ 6） 尿素緩沖液：取分析純尿素 15g，溶于 500ml 磷酸緩沖液，再加 5ml甲苯防腐劑（防止霉菌發(fā)酵） ，調(diào) pH 值為 4. 步驟 樣品 +40ml 尿素緩沖液 試樣粉碎到 以下 搖勻后放入 樣品 +40ml 磷酸緩沖液 30℃ 恒溫水浴槽中，每 5min 搖勻一次，反應(yīng) 30min，在 5min 內(nèi)測定 pH 值。再將 50ml 上清液轉(zhuǎn)入離心管，以 2700 轉(zhuǎn) /分轉(zhuǎn)速離心 10min，取 1020ml上清液進(jìn)行消化，凱氏定氮。 （ 3） 制備氫氧化鉀試劑：取 氫氧化鉀于容量瓶中，溶解于水，稀釋至1000ml，注意補(bǔ)充氫氧化鉀的純度。 2. 試劑 （ 1） 2%氫氧化鉀試劑， ， pH 為 。 （ 10） 將坩堝及內(nèi)容物先在電爐上炭化，然后移入 600℃茂福爐中灼燒，至恒重（約30min）。再用 25ml 乙醇沖洗坩堝中的水。 （ 7） 在抽濾瓶上安裝一個鋪有石棉的致密薄層古氏坩堝。 （ 5） 用 200ml 煮沸的 氫氧化鈉溶液，將濾布上的殘全部沖入原錐形瓶中，在錐形瓶中加表玻璃皿。 （ 4） 30min 后立即移開錐形瓶，隨后用鋪有濾布的抽濾漏斗抽濾。用蠟筆在液面處畫一刻度線，在錐形瓶口加表玻璃蓋或連接回流冷凝瓶。 （ 4） 正辛醇 （ 1） 取 2g 樣品用乙醚提去脂肪后，全部移入 500ml 錐形瓶中。烘干。） （ 2） 氫氧化鈉：分析純， 177。 （ 1） 硫酸：分析純， 177。含磷量小于 %，允許相對偏差小于 10%，含磷量在 %之上，允許偏差不超過 3%。 （ 3） 試樣的測定 準(zhǔn)確移取試樣分解液 ml 于 50ml 容量瓶中，加釩鉬酸銨 10ml，定容，比色測定吸光度，用標(biāo)準(zhǔn)曲線查得試樣分解液的含磷量。 （ 2） 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 準(zhǔn)確移取 0﹑ ﹑ ﹑ ﹑ ﹑ 磷標(biāo)準(zhǔn)溶液于 50ml 的容量瓶中，各加釩鉬酸銨 10ml，定容，放 10min，以 0ml 溶液為參比，用 10mm 比色池， 420nm波長下，測吸光度。 （ 5） 磷標(biāo)準(zhǔn)溶液 ：將磷酸二氫鉀在 105℃干燥 1h，在干燥器中冷卻 30min，稱取 溶于水，定量轉(zhuǎn)入 1000ml 容量瓶中，加硝酸 3ml，定容，即為 50ug/ml的磷標(biāo)準(zhǔn)液。 EDTA 滴定溶液對鈣的滴定度為 鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度 鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液體積 /EDTA 標(biāo)準(zhǔn)溶液的用量 實驗七 飼料中總磷量的測定 游離磷 + 釩鉬酸銨 酸性溶液中 磷鉬黃（黃色）， 420nm 波長下比色測定。 （ 2） T=：稱取 200ml燒杯中加 200ml 水，加熱溶解 冷卻后用水轉(zhuǎn)移到 1000ml 容量瓶中，稀釋至刻度。 （ 2） 測定 510ml試樣分解液 + +氫氧化鉀溶液 無色 黑色背景下 EDTA 滴定 綠色熒光消失 （ 1） 計算 Ca% = 100 （ 2） 重復(fù)性 做二個平行樣，對鈣量在 5%以上，允許相對偏差在 3%，鈣量 51%，允許相對偏差 5%，淀粉溶液 10ml 水 50ml 乙二胺 1ml 三乙醇胺 2ml 1 滴孔雀石綠 5ml 氫氧化鉀溶液 鹽酸羥胺 鈣黃素少許 EDTA 標(biāo)液對鈣的滴定度 消耗 EDTA 體積 試樣質(zhì)量 移取分解液體 積 /分解液總體積 10 鈣量 1%以下，允許相對偏差 10%。 3. 測定 （ 1） 試樣分解 干法：測定灰分后的試樣 +鹽酸溶液 10ml+濃硝酸數(shù)滴 ，小心煮沸，冷卻，轉(zhuǎn)入100ml 容量瓶中，冷卻，定容，搖勻。 2. 試劑準(zhǔn)備 （ 1） 鹽酸羥銨 （ 2） 鹽酸： 1+1（ v1+v2） （ 3） 濃硝酸 （ 4） 高氯酸 （ 5） 氫氧化鉀溶液： 200g/l （ 6） 三乙醇胺水溶液： 1+1（ v1+v2） （ 7） 乙二胺水溶液： 1+1（ v1+v2） （ 8） 淀粉溶液： 10g/l，稱取 1g 可溶性淀粉放入 200ml 燒杯中，加 5ml 水潤濕，加 95ml 沸水?dāng)嚢瑁蠓?，冷卻備用 （ 9） 孔雀石綠水溶液： 1g/L （ 10） 鈣黃綠素 甲基百里香酚藍(lán) 指示劑： 鈣黃綠素與 甲基百里香酚藍(lán)， 5g 氯化鉀研細(xì)，貯于磨口瓶中備用 （ 11） 鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液： （ 12） 乙二胺四乙酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液（ EDTA）， T=（滴定度），表示 1ml標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)于 0。 （ 4） 冷卻完畢，待爐溫降至 200℃，移入干燥器內(nèi)冷卻 1h，稱重，再將坩堝放入茂福爐中燒 15min，再冷卻，恒重至相差 克。 （ 2） 在坩堝中稱取風(fēng)干樣 2 克。 （ 2）本法測定中是根據(jù)氯離子來計算氯化鈉含量的，但由于配合飼料或單一飼料（如魚粉或合成賴氨酸等）中，都帶入氯離子，所以此估測值僅做參考值。二溶液的體積比為 2) 標(biāo)定 氯化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 10ml 100ml 容量瓶 硝酸 4ml 震蕩使沉淀凝結(jié)，定容過濾于三角瓶中 取定 硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液 25ml 容液 50ml+硫酸鐵指示劑 2ml 硫氰酸銨溶液滴定 紅棕色 硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度 = 式中： m—— 氯化鈉質(zhì)量 g v1—— 硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液體積 ml v2—— 硫氰酸銨溶液體積 ml F —— 硝酸銀與硫氰酸銨溶液的體積比 —— 與 1ml 硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液（ 1mol/l）相當(dāng)?shù)穆然c質(zhì)量 （ 1） 實驗室用樣品粉碎機(jī) （ 2） 分樣篩 孔徑 （ 40 目） （ 3） 分析天平 （ 4） 刻度移液管 10， 2ml （ 5） 滴定管 酸式， 25ml （ 6） 容量瓶 100， 1000ml （ 7） 燒杯 250ml （ 8） 濾紙 快速，直徑 15cm；滿速，直徑 稱取 3g 左右樣品 + 硫酸鐵溶液 50ml + 氨水溶液 100ml 取 50ml 濾液 濃硝酸 10ml 100ml 容量瓶 取 50ml 澄 硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液 25ml 硝酸銀溶液體積 硫氰酸銨體積 m 20/1000 10/100 （ v1FV2 100/50） 攪拌，放置 10min 干快速濾紙過濾 攪拌，放置 10min 干過濾入 150ml 錐形瓶中沉化 8 清液 淡橘紅色 據(jù)處理 （ 1）計算 氯元素百分含量 = 100 式中 m—— 樣品質(zhì)量 v1—— 硝酸銀溶液體積 ml v2—— 滴定消耗的硫氰酸銨溶液體積 F—— 硝酸銀與硫氰酸銨溶液體積比 C—— 硝酸銀溶液的濃度 —— 與 1ml 硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液 1mol/l 相當(dāng)?shù)穆仍刭|(zhì)量 g （ 2）重復(fù)性 每個樣品取 2 個平行樣進(jìn)行測定，以算術(shù)平均值為分析結(jié)果。 （ 8） 硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液 （ ）：稱取 硝酸銀溶于 1000ml 水中，貯于棕色瓶中。 （ 4） 氨溶液 1+19 水溶液 （ 5） 硫氰酸銨 ()溶液：稱取硫氰酸銨 ，溶于 1000ml 水中。 5g 左右樣品 取上層清液 20ml+ 硝酸銀滴定 溶液呈磚紅色 4．結(jié)果 處理 NaCl% = 100 式中： V—— 硝酸銀溶液