jl第四章酶ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-04 04:02 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 酶量 ，即用酶的活力表示 。 酶催化一定化學反應(yīng)的能力稱酶活力，酶活力通常以最適條件下酶所催化的化學反應(yīng)的速度來確定。 酶活力測定方法 終點法 : 酶反應(yīng)進行到一定時間后終止其反應(yīng) ，再用化學或物理方法測定產(chǎn)物或反應(yīng)物量的變化 。 動力學法 :連續(xù)測定反應(yīng)過程中產(chǎn)物 \底物或輔酶的變化量 ， 直接測定出酶反應(yīng)的初速度 。 酶活力的表示方法 活力單位 （ active unit） 習慣單位 （ U） : 底物 (或產(chǎn)物 )變化量 / 單位時間 國際單位 （ IU） : 1μmoL變化量 / 分鐘 Katal（ Kat） ： 1moL變化量 / 秒 比活力 = 總活力單位 總蛋白 mg數(shù) = U(或 IU) mg蛋白 量度酶催化能力大小 轉(zhuǎn)換系數(shù) （ Kcat） 底物 （ μ moL） / 秒 每個酶分子 量度酶純度 比活力 （ specific activity） 量度轉(zhuǎn)換效率 化學動力學基礎(chǔ) 反應(yīng)速率 是以單位時間內(nèi)反應(yīng)物或生成物濃度的改變來表示 反應(yīng)分子數(shù) 是在反應(yīng)中真正相互作用的分子的數(shù)目 單分子反應(yīng)： 僅有 1個反應(yīng)的分子參加的反應(yīng) v=dc/dt=kc 雙分子反應(yīng)： 有兩個反應(yīng)物分子參加的反應(yīng) v=dc/dt=kc1c2 反應(yīng)級數(shù) :整個化學反應(yīng)的速率服從哪種分子反應(yīng)速率 方程式，則這個反應(yīng)即為幾級反應(yīng) 一級反應(yīng)，二級反應(yīng)，零級反應(yīng) 酶促反應(yīng)初速度的概念 斜率 =[P]/ t = V（ 初速度 ） [P] t 影響對酶反應(yīng)速度的因素 底物濃度 酶濃度 pH （ 最適 pH的概念） 溫度 （最適溫度的概念） 激活劑 抑制劑 底物濃度對酶反應(yīng)速度的影響 酶反應(yīng)速度與底物濃度的關(guān)系曲線 （ Michaelis—Menten曲線 ） 米氏方程的提出及推導 米氏常數(shù)的意義 米氏常數(shù)的測定 酶反應(yīng)速度與底物濃度的關(guān)系曲線 一級反應(yīng) 混合級反應(yīng) 零級反應(yīng) Vmax 中間絡(luò)合物學說 酶促反應(yīng)的米氏方程及 Km 推導 原則 ： 從酶被底物飽和的現(xiàn)象出發(fā)，按照 “穩(wěn)態(tài)平 衡”假說的設(shè)想進行推導。 ? ?? ?SKSVvm ?? m a x米氏方程 : 米氏常數(shù) : E+S ES E+P k1 k2 k3 k4 Km= k1 k2+k3 米氏方程的推導 ? ?? ? ? ?? ?? ?121 k kkES SESSE t ??? ?令 ： Kmk kk ???121將 （ 4） 代入 （ 3） ，則 ： ? ?? ?SKSVvm ?? m a x[ES]生成速度 ： ? ? ? ?? ?? ?SESEkv t ?? 11 ， [ES]分解速度 ： ? ? ? ?ESkESkv 212 ?? ?即 ： ? ? ? ?? ?? ? ? ? ?ESkESkSESEkt 211 ??? ?則 ： ? ? ? ?? ? ? ?? ?SSESESKm tE??(1) 經(jīng)整理得 ： ? ?? ?? ?SKSEmt??? ?ES由于酶促反應(yīng)速度由 [ES]決定，即 ? ?ESkv2?2kv?? ?ES， 所以 (2) 將 （ 2） 代入 （ 1） 得 ： ? ?? ?? ?SK SEkv m t??2 ? ?? ?? ?SK SEk m t?? 2v(3) ??當酶反應(yīng)體系處于 恒態(tài) 時 ： 21 vv ?當 [Et]=[ES]時 ， mVv? ? ?tm EkV 2?(4) 所以 E+S ES E+P k1 K1 k2 K2 [Et][ES] [S] [ES] 米氏常數(shù)的意義 * 當 v=Vmax/2時 ， Km=[S]（ Km的單位為濃度單位 ） * 是酶在一定條件下的 特征物理常數(shù) ， 通過測定 Km的數(shù)值 ， 可鑒別酶 。 * 可近似表示酶和底物親合力 ， Km愈小 ， E對 S的親合力愈大 ， Km愈大 ， E對 S的親合力愈小 。 *在已知 Km的情況下 ， 應(yīng)用米氏方程可計算任意 [s]時的v， 或任何 v下的 [s]。 （ 用 Km的倍數(shù)表示 ） 練習題：已知某酶的 Km值為 ， 要使此酶所催化的反應(yīng)速度達到最大反應(yīng)速度的 80％ 時底物的濃度應(yīng)為多少 ？ 米氏常數(shù)的測定 基本原則 ： 將米氏方程變化成相當于 y=ax+b的直線方程 ，再用作圖法求出 Km。 例： 雙倒數(shù)作圖法 （ LineweaverBurk法 ） 米氏方程的雙倒數(shù)形式： 1 Km 1 1
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