通過單克隆抗體技術(shù)處理加熱過的肌肉蛋白質(zhì)來識別肉的種類以及加熱肉品終點溫度的確定(編輯修改稿)
2024-11-15 00:42 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 可以繼續(xù)的分泌抗體。經(jīng)過仔細的鏡檢和亞克隆后，可以挑選出穩(wěn)定的雜交細胞鏈，它可以分泌出針對某一特定抗原的抗體，而且產(chǎn)生抗體十分頻繁。采用單抗體的方法來對 ? 肉的種類進行免疫分析時 ， 應保證連續(xù)供應統(tǒng)一的免疫試劑 ， 也應減少標準分析程序 。 ： ； :； ： 抗原的選擇 ? 大多數(shù)對于原料肉種類的免疫檢測方法都采用多克隆方法來處理整個血 清或血清蛋白。因為血清蛋白的存在可能是必須的，肌肉組織中殘余的血漿成分會發(fā)生變化，那么便意味著肌肉組織的存在，進而可以得出結(jié)論：用這些多克隆技術(shù)來定量的估計攙雜物的量是不可靠的。肌肉蛋白質(zhì)的存在是顯著的 ,預示了雞肉 ? 組織存在的可能性比血清蛋白存在的可能性要大。對于肉種類的多克隆技術(shù)已用于可溶性粗蛋白的分析中或凈化肌肉 成分，例如肌鈣蛋白和肌紅蛋白。這些 檢測方法的優(yōu)點在于容易獲得提取樣品，更重要的一點在于對傳統(tǒng)檢測方法的改進與發(fā)展。不溶性肌肉蛋白如連接蛋白 也可以用于單抗體的分析方法中，來確認原料禽肉的種類。然而不溶性蛋白的 提取需要特殊的步驟。這些方法毫無疑 問的可以應用于法律事件的檢測中，但 ? 不適用于常規(guī)檢驗分析或產(chǎn)地檢驗。 因為通過加熱處理后，大多的蛋白質(zhì)變性并且成為不可溶的， 所以使用抗體來處置本源蛋白質(zhì)的方法 不可以用于加熱處理過的肉類。 對于加熱的肉類的確認也應用熱穩(wěn)定蛋白。 在解決特定種類熱穩(wěn)定性組成方面已做了 十分大的努力。用 IEF方法， Jones和 Mortiner(1985)說明了 來自腎上腺和肌肉組織的 BE抗原蛋白具有熱穩(wěn)定性。 但是不同類型 BE抗原的特性是顯著不同的， Sherikar使用 SDS聚 ? 丙稀酰胺凝膠電泳的方法檢測了不 同種類的 BE抗原，并且得出結(jié)論在 BE蛋白中肌鈣蛋白 T 屬 于特定種類蛋白部分。 沒有 經(jīng) 過加熱處理 的從 肌肉組織中分離的具有抗熱性 的 糖蛋白應用于多克隆抗體技術(shù)中。這些抗體已應用于夾心 ELISA中用于鑒別加熱和罐裝肉類食物中 。這些方法在商業(yè)檢測中是十分有效的， 并且也應用于 USDA對加熱肉品種類確認的調(diào)查中。大多對于加熱肉品種類的 確認中大都使用多克隆抗體技術(shù)方法 .最近在 我們 實驗室中對單克隆抗體技術(shù)確認加熱肉種類的研究中也取得了 一 定的進 展。用于加熱處理肉類蛋白鑒別的單克隆抗體技術(shù)也可用于原料肉的鑒 別 中，因為在準備檢測樣品時這些原料肉可以十分容易的被加熱處理。 3 單克隆抗體技術(shù)用于加熱處理肌肉蛋白的確認 單克隆抗體介紹 ? 用于熱穩(wěn)定性或抗熱性蛋白的不同抗原已經(jīng)用于發(fā)展抗體技術(shù)來確認加熱肉品的種類。熱穩(wěn)定性這一個詞在字典中被十分清晰的定義，大多情況下，它指經(jīng)過加熱處理的肉類浸提物中保持可溶性 和抗原性的完整蛋白或蛋白碎 片。如果一種特定分析蛋白已知應用于一種特定的種類確認 ,那么在免疫分析技術(shù)中 ? 使用提純蛋白可以增加對于特定種類抗原決定基的免疫反應機會。然而對于雜交瘤的分泌物并不一定完全需要提純蛋白作為抗原，由于在挑選適宜特定種類蛋白主要方面缺少足夠多的知識技術(shù)， ? 所以在單克隆抗體技術(shù)中我們使用加熱處理過的可溶性粗肌肉蛋白作為免疫源。在加熱之后，純的肉類蛋白質(zhì)顯著減少，這樣在提取物中只有熱穩(wěn)定性或熱抗性的部分蛋白質(zhì)仍保持可溶性。對期望的特性應用 MABS（單克隆抗體技術(shù)）檢測 ? 時應選擇雜交克隆分泌物，而且必須要經(jīng)過仔細的鏡檢和亞克隆。對于準備抗原有兩種方法 :1)用蒸餾水或鹽水對粗瘦肉進行攪拌，過濾物可以作為免疫原。 ? 2）瘦肉混于 ，沸水加熱并且離心 .上層液 121℃ 30分鐘高溫滅菌過濾，用 90﹪ 乙醇進行萃取，沉淀，干燥物溶于鹽溶液中備用。來自免疫老鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞融合后可作為雜交產(chǎn)物。在我們的實驗室中， 遵 守由 Kohler 和 Milstern描述的一般程序，那便是在隨后 ? 的步驟中要進行必要的修飾。 ELISA鏡檢是用于經(jīng)過選擇實驗的與抗 原 對應的克隆體，同時用異種的浸提物和 別的食物蛋白通過交叉反應來穩(wěn)定雜交 物。雜交產(chǎn)物具有我們所期望的特性 ， 之后通過限定性稀釋程序?qū)χ寺≈? 少兩次以獲得穩(wěn)定的單克隆細胞鏈。 SDSPAGE和 免疫點技術(shù)用于確 認 每種單克 隆肉類浸提物種抗原的成分。 單克隆抗體的特點 ? 目前為止，五種免疫球蛋白單克隆抗體技術(shù)在實驗中已用于摻雜肉種類的 檢測。單克隆抗體 2F8同五種經(jīng)過加熱的哺乳動物肉發(fā)生 十分強烈的反應 ，但不同任何加熱的禽肉發(fā)生反應。 3E12同禽肉 反應，5D2主要用于雞和火雞的鑒別中。 9C6只特定于雞， 5H9只用于豬肉。 第一 組 四種單克隆抗體技術(shù)用于經(jīng)水或鹽水浸 提過的經(jīng)過加熱處理的肌肉蛋白，它 們 同 ? 特別的加熱肉提取物發(fā)生了強烈的反應，但
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