通過單克隆抗體技術(shù)處理加熱過的肌肉蛋白質(zhì)來識(shí)別肉的種類以及加熱肉品終點(diǎn)溫度的確定-文庫吧
2024-10-04 00:42 本頁面
【正文】 小。 等 吸附技術(shù)基于蛋白質(zhì)不同的等電點(diǎn)可以把 蛋白質(zhì)依據(jù)不同種類而分開， 這種技術(shù)被廣泛用于確認(rèn) ? 魚肉的種類，也可以用于區(qū)分不同種類的原料肉。但是，當(dāng)混合肉中存在多種肉或蛋白添加劑時(shí) ,很難解釋其檢測結(jié)果。色譜法如氣相色譜 ,液體色譜和高精度色譜已經(jīng)被廣泛用于肉種類的確認(rèn)，這種方法是基于對肉樣中脂肪酸成分，組氨基酸或蛋白質(zhì)形狀的檢驗(yàn)來實(shí)現(xiàn)的。這些方法可以區(qū)分不同個(gè)體肉的種類，但是由于色譜類型復(fù)雜度的增加，這些方法在檢測復(fù)合肉品中摻雜肉的種類時(shí)會(huì) 失效。 ? 隨著分子生物學(xué)技術(shù)的高速發(fā)展，包括 DNA雜交技術(shù)，聚合酶鏈 反應(yīng)和碎片分析技術(shù)已對法醫(yī)學(xué)產(chǎn)生了 革命性的變革，對于食品科學(xué)也是如此。 DNA 雜交技術(shù)已被用于多中肉類品種的 確認(rèn) ,下一步準(zhǔn)備也進(jìn)行基因組 DNA或克 隆 DNA同目標(biāo)DNA的雜交，同時(shí)用顏色或自行 x射線照相技術(shù)進(jìn)行檢測工作。 這些方法在用于煮制肉類品種 確認(rèn) 方面是獨(dú)特的并且十分有用 , 但是在確認(rèn)聯(lián)系密切肉類 時(shí)效果不好下一步準(zhǔn)備顯示牛， 綿羊，山羊 ： ； :； ： ? 基因組 DNA水平上 的相互交叉反應(yīng)。通過混合未標(biāo)記 DNA修飾 DNA 雜交可以減少交叉反應(yīng)， 從而可以從交叉雜交種類中區(qū)分綿羊和山羊，大約有 10﹪ 的區(qū) 別限度。綿羊和山羊 肉類的區(qū)分是使用直接連續(xù)技術(shù)來對比 核苷酸的次序而實(shí)現(xiàn)的， 同時(shí)也分析了限制核苷酸內(nèi)切酶聚合酶鏈反應(yīng)的產(chǎn)物， 由于費(fèi)用高和操作的復(fù)雜性，這些基于 DNA 水平的技術(shù)未被常規(guī)分析方法所采納。 免疫學(xué)方法 ? 免疫學(xué)方法是基于特定抗體－抗原反應(yīng)，它適用于分析復(fù)雜混合物中的成分，同時(shí)此成分有最低的檢測量。從本世紀(jì)開始，免疫技術(shù)已被用于動(dòng)物肉類品種的確認(rèn)。免疫技術(shù)的先進(jìn)之處在于它可以在很大程度是提高檢測的敏感性和結(jié)果的準(zhǔn)確性。沉淀環(huán)實(shí)驗(yàn)是免疫分析方法的一個(gè)簡單形式，它的原理是在實(shí)驗(yàn)管中抗血清和肉的抗原相匯處可產(chǎn)生可 ? 見的環(huán)。血凝抑制實(shí)驗(yàn)是基于阻止抗原血 清 和 它的同類抗原之間積極的反應(yīng)，而此同種類抗原被同種外來羊的紅血細(xì)胞所包裹。瓊脂膠體免疫擴(kuò)散，雙層免疫擴(kuò)散技術(shù)起源于 Ouchyeriony(1948)的描述，同時(shí)也涉及抗血清和抗原在半固體瓊脂 ? 膠體中的擴(kuò)散。經(jīng)過隔夜培養(yǎng)后在抗體和它對應(yīng)的抗原相匯處形成一個(gè)可見的不透光的帶。 USDAFSIS肉類檢查員對這種技術(shù)做了一定的修繕，使用標(biāo)定的試劑紙片和提前準(zhǔn)備的瓊脂平板使此種 ? 技術(shù)在檢測原料肉的種類時(shí)更加便利 .由于瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)靈敏性易變化，培養(yǎng)的時(shí)間長，并且非肉的成分干擾大，所以限制了它在完整鮮肉分析中的應(yīng)用。免疫分析經(jīng)常用在臨床處置中，但是一項(xiàng)研究指出 ,用 I 標(biāo)記免疫試劑檢 測出牛肉中存在 5﹪ 的 其他成分。 由于 放射免疫分析技術(shù)要用有害的放射材料，并且要用閃爍計(jì)數(shù)器，所以限制了它在日常 ? 檢驗(yàn)和檢測肉種類中的應(yīng)用。 ? ELISA由于下面的優(yōu)點(diǎn)而在肉種類 ? 的確認(rèn)中得到了十分廣泛的應(yīng)用：不用太貴的科學(xué)儀器，易于操作，免疫試劑用量小，可應(yīng)用于大數(shù)量，寬領(lǐng)域的檢測。經(jīng)常應(yīng)用的有三種 類型 : 間接ELISA競爭， ELISA,夾心 ELISA。間 接ELISA,先把抗原吸入一個(gè)微量平板上，之后相反動(dòng)物的抗體與抗原結(jié)合吸附在固體層上，通過二者與隨后加入的反免疫球蛋白的結(jié)合，通過外來添加酶而形成的顏色 .它可以檢測到抗原與抗體的結(jié)合物 。 競爭 ELISA 技術(shù)是基于提取樣品中有限的抗 ? 體，而自由抗原和與固體相 結(jié)合的抗原與抗體競爭相結(jié)合。固體相 抗原結(jié)合的特定種類抗原的限制數(shù)同液 體相中的抗原數(shù)成正比。夾 心 ELISA使 用 固體相上 的抗體作為結(jié)合抗體。另一 種抗體用作檢測抗體。所以，這便形成 了一個(gè)夾心，抗原位于中間，抗體在抗原 分子的兩側(cè)。在表 1中對不同類型 ELISA用 各種肉的抗原對原料肉的確認(rèn)進(jìn)行了總結(jié)。最近，單抗體技術(shù)也應(yīng)用在 ELISA中來對原料肉進(jìn)行確認(rèn)， ELISA也用于煮制肉品種類的確認(rèn)中。 抗體的來源 ? 在使用酶免疫測定來確認(rèn)肉的種類成功的發(fā)展的過程中，最重要的是特定種類的抗體，不同種動(dòng)物需要不同的免疫試劑。傳統(tǒng)的來講，在 ELISA中應(yīng)用的 單抗體來自免疫動(dòng)物的血清。多克隆抗體技術(shù)在自然界中是外源的，亞群和特定種類抗原或相反種類抗原相結(jié)合。因此可以十分容易的觀測到血清和相關(guān)種類抗原的交叉反應(yīng)。在檢測程度標(biāo)準(zhǔn)化的發(fā)展過程中，一組抗體親和力和結(jié)合 ： ； :； ： ? 特性的變化也引起了人們的關(guān)注。同多克隆抗體技術(shù)相反，單克隆抗體技術(shù)的來源－單細(xì)胞鏈在自然界中 是同源的。它們來自融化得抗體分泌物 Blymphocytes,而這種分泌物又來自患有骨髓瘤的免疫老鼠。融化的產(chǎn)物叫雜交細(xì)胞，可以在培養(yǎng)基中生長，并且
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