人用單克隆抗體質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則-文庫吧
2025-06-28 21:10 本頁面
【正文】 0。 1．外觀 液體制劑應(yīng)為接近無色微帶乳光的澄清液體，不應(yīng)含有異物、渾濁或搖不散的沉淀。 2．pH值 電位法測定 3．蛋白質(zhì)含量的測定 用Lowry法或其它適宜的方法測定。 4．純度測定 （1）電泳法 用還原和非還原條件SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法。掃描后免疫球蛋白含量應(yīng)達(dá)到95%以上，二聚體≤10%。 （2）HPLC法 純度應(yīng)≥95%。 （3）多聚體測定 用FPLC或HPLC法，用適宜的分子篩層析，多聚體應(yīng)≤10%。 5．DNA含量測定 用DNA分子雜交法。每一劑量殘余鼠骨髓DNA含量不高于100pg。 6．水分 產(chǎn)品如為凍干制品，應(yīng)進(jìn)行殘余水分測定，其含量應(yīng)≤3%。 （二）生物學(xué)檢定 1．活性及效價(jià)測定 用適宜方法進(jìn)行。 2．鼠源病毒檢定 同上鼠源病毒檢查。 3．無菌試驗(yàn) 同上無菌試驗(yàn)。 4．支原體檢定 同上支原體檢定。 5．安全試驗(yàn) 用小白鼠和豚鼠進(jìn)行試驗(yàn)。 6．熱原質(zhì)試驗(yàn) 按照現(xiàn)行版《中國藥典》生物制品熱原質(zhì)試驗(yàn)規(guī)程進(jìn)行。采用家兔法時(shí)，家兔注射劑量=（人用劑量/50）*20*家兔體重（kg）。也可用鱟試劑法，1mg/mL蛋白濃度不應(yīng)檢測出有凝集活性。 7．異常毒性實(shí)驗(yàn) （三）非免疫球蛋白雜質(zhì)分析 包括來源于細(xì)胞基質(zhì)、培養(yǎng)基和下游工藝的相關(guān)雜質(zhì)，采用適當(dāng)?shù)募夹g(shù)和方法進(jìn)行分析檢測。 六、經(jīng)修飾的單克隆抗體 為了提高單克隆抗體在治療和體內(nèi)診斷中的作用，常用單抗與毒素、藥物、放射性核素或其它物質(zhì)偶連形成免疫結(jié)合物，或在同一段多胎鏈包含非免疫球蛋白和免疫球蛋白序列的嵌合重組蛋白來獲得。研究者除對前面提到的有關(guān)未偶連單克隆抗體（未修飾單克隆抗體）的要求外，還應(yīng)提供下列內(nèi)容： （一）免疫結(jié)合物的構(gòu)建 應(yīng)提供構(gòu)建免疫結(jié)合物所用試劑和過程的詳細(xì)資料，包括： 1．描述與單克隆抗體連接的成分如：毒素、藥物、酶及細(xì)胞因子，包括：所有成分的來源、結(jié)構(gòu)、制法、純度及特征。 2．制備免疫結(jié)合物所用化學(xué)試劑的描述，如連接劑和螯合劑。這些資料應(yīng)該包括試劑來源、制備方法，以及合成或純化時(shí)殘留雜質(zhì)的測定等內(nèi)容。還應(yīng)提供合成反應(yīng)途徑的圖解，以及與免疫結(jié)合物中所用化學(xué)試劑毒性相關(guān)資料。 3．在確定成品的標(biāo)準(zhǔn)時(shí)應(yīng)首先確定該原料與抗體的平均結(jié)合率及每個(gè)抗體被結(jié)合部分的數(shù)量，并揭示免疫球蛋白置換數(shù)量、效力和穩(wěn)定性間的關(guān)系。 4．用重組DNA技術(shù)制備的制品（如來源于轉(zhuǎn)染細(xì)胞系或微生物培養(yǎng)基，嵌合的、易形的，互補(bǔ)決定區(qū)［CDR］接合的及單鏈Fv抗體，以及重組免疫結(jié)合物）應(yīng)提供構(gòu)建和置備過程的全部資料。重組免疫結(jié)合物的穩(wěn)定性應(yīng)認(rèn)真研究。因聚合物形成構(gòu)形改變或變性而減弱了特異免疫反應(yīng)性（如通過重組Fvs形成雙抗）可能導(dǎo)致藥代動力學(xué)的改變和/或與非靶組織結(jié)合。 （二）免疫結(jié)合物的純度 1．應(yīng)采取特殊措施保證抗體盡可能無外源免疫球蛋白或非免疫球蛋白污染，因這些污染物質(zhì)在構(gòu)建免疫結(jié)合物過程中，能與核素、毒素或藥物發(fā)生反應(yīng)。 2．應(yīng)規(guī)定最終產(chǎn)品中游離抗體或游離組分的限量?；钚灾虚g體應(yīng)被滅活或去除。 （三）免疫結(jié)合物的免疫反應(yīng)性，效力及穩(wěn)定性 毒素或藥物偶聯(lián)至抗體上會改變其中任一成分的活性。 1．應(yīng)采用適當(dāng)?shù)姆椒?；評估偶聯(lián)前后的免疫反應(yīng)性。 2．免疫結(jié)合物非免疫球蛋白成分的活性應(yīng)在適當(dāng)?shù)臅r(shí)候用效力試驗(yàn)來進(jìn)行評估（例如，毒素、細(xì)胞因子或酶等），用于造影的放射性免疫結(jié)合物除外。 3．免疫結(jié)合物構(gòu)建后，應(yīng)確定免疫反應(yīng)性變化的百分率限值，并作為產(chǎn)品規(guī)格的組成部分。 4．應(yīng)通過在合并的人血清中37℃無菌條件下孵育，來檢測免疫結(jié)合物在體外的穩(wěn)定性。假如所用抗凝劑不會影響免疫結(jié)合物的穩(wěn)定性，血漿可以用來代替血清。經(jīng)過規(guī)定間隔時(shí)間分析樣品中完整免疫結(jié)合物及分解產(chǎn)物的濃度。應(yīng)詳細(xì)說明評估產(chǎn)品的穩(wěn)定性的條件及所用陰、陽對照。 （四）與放射性核素偶聯(lián)單克隆抗體的特殊問題 放免結(jié)合物應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)化的、嚴(yán)格控制并經(jīng)過驗(yàn)證的方法制備。應(yīng)建立檢測游離同位素、結(jié)合單克隆抗體、標(biāo)記的非免疫球蛋白物質(zhì)的放射性百分率的方法。 1．放射性標(biāo)記單克隆抗體的初始研究用新藥申報(bào)包含連續(xù)3次放射標(biāo)記試生產(chǎn)的分析結(jié)果，應(yīng)證明所制備的產(chǎn)品未改變免疫特異性、無菌、無熱原質(zhì)。放射性標(biāo)記試生產(chǎn)應(yīng)由在研究中對單克隆抗體進(jìn)行放射性標(biāo)記及使用試劑的同一組人員進(jìn)行。 2．
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