過度訓(xùn)練心肌細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)途徑中的作用(編輯修改稿)
2024-11-14 21:02 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 又進(jìn)一步切割不同的底物 ,導(dǎo)致蛋白酶級(jí)聯(lián)切割放大 ,最終使細(xì)胞走向死亡 。 因此 Caspase3被稱為死亡蛋白酶 。 19 三、立題依據(jù) ? 上述對(duì)過度訓(xùn)練導(dǎo)致心肌損傷的研究包括心肌細(xì)胞形態(tài)的變化和心肌細(xì)胞的凋亡機(jī)制 。 說明凋亡既是 OTLAMI的主要損傷特征和細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)也是 OTLAMI的重要發(fā)病機(jī)制 。 但對(duì) OTLAMI引發(fā)的心肌細(xì)胞凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)主要途徑尚未完全明了 ， 有待進(jìn)一步研究 。 ? 本實(shí)驗(yàn)預(yù)期通過對(duì) Caspase3在過度訓(xùn)練導(dǎo)致的心肌細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)通路中作用的研究 ， 為過度訓(xùn)練導(dǎo)致心肌損傷的防治提供新的治療靶點(diǎn) 。 20 四、主要研究內(nèi)容 擬采用的技術(shù)路線 研究進(jìn)度 經(jīng)費(fèi)預(yù)算 實(shí)驗(yàn)室所具備的條件 21 擬采用的技術(shù)路線 （一） 材料 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性 Wistar大鼠 32只，體重 200～ 220g，常規(guī)分籠喂養(yǎng)。由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。 玻璃鋼游泳池 按文獻(xiàn)報(bào)道的方法自制 150cm60cm80cm玻璃鋼游泳池 。 22 實(shí)驗(yàn)流程 模型制備 安靜對(duì)照組 力竭后 6h 力竭即刻 檢測各項(xiàng)指標(biāo) 力竭后 24h 取材及標(biāo)本收集 資料整理 統(tǒng)計(jì)分析 論文撰寫 紳胞凋亡率 Caspase3 23 （二）實(shí)驗(yàn)方法 實(shí)驗(yàn)分組 安靜對(duì)照組CN， n=8 力竭后即刻 ESI n=8 力竭后 6h ES 6 h n=8 力竭后 24h ES 24 h n=8 力竭運(yùn)動(dòng)組ES， n=24 24 過度訓(xùn)練動(dòng)物模型的建立 ? 按文獻(xiàn) [2] 報(bào)道的方法自制150cm 60cm 80cm玻璃鋼游泳池 。 采用大鼠游泳至力竭 ， 建立過度訓(xùn)練模型 （ 安靜環(huán)境下， 單次力竭 ， 不加負(fù)重 ， 水深70cm， 水溫 30177。 2℃ ） 。 為減少實(shí)驗(yàn)誤差 ， 各組大鼠于實(shí)驗(yàn)前一天適應(yīng)性游泳 30min， 用吸水紙把水擦干后放回籠子中 ， 正常飲食 。 25 ? 次日再次放于水中游泳直到力竭 ， 并記錄游泳時(shí)間 。 為保證大鼠游泳有足夠的活動(dòng)空間 ， 同時(shí)避免觀察不及時(shí)而發(fā)生溺水 ， 每次各組取 1只大鼠進(jìn)行力竭運(yùn)動(dòng) 。 26 力竭標(biāo)準(zhǔn) [2] ①沉入水底超過 10秒鐘； ②游泳動(dòng)作明顯不協(xié)調(diào)； ③撈出后沒有逃避反應(yīng)，且放在平面上無法完成翻正反射。 27 取材及標(biāo)本收集 ? 將各組大鼠使用乙醚麻醉 ， 腹正中切開 ,摘取心臟 ， 縱形剖開 ， 一半置入 4176。C 4%多聚甲醛中固定 ， 另一半置于 80176。C凍存待用。 ? 標(biāo)本于 4％ 多聚甲醛中固定 2h后 ， 常規(guī)梯度濃度酒精脫水 ， 二甲苯透明 ， 常規(guī)石蠟包埋 。 連續(xù)切片 6～ 8張 ， 厚度 4um， 用涂有多聚賴氨酸的載玻片貼片 ， 52℃ 烘烤48h， 備用 。 28 所需藥品及試劑盒 TUNEL試劑盒：德國寶靈曼公司。 碘化吡啶（ PI）： Sigma公司。 PV免疫組化染色試劑盒：北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供 。 Caspase3兔抗鼠多克隆抗體 western blot： 小動(dòng)物顯微外科手術(shù)器械。 29 （三）觀察指標(biāo)
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