過度訓(xùn)練心肌細胞凋亡信號傳導(dǎo)途徑中的作用(編輯修改稿)
2024-11-14 21:02 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 又進一步切割不同的底物 ,導(dǎo)致蛋白酶級聯(lián)切割放大 ,最終使細胞走向死亡 。 因此 Caspase3被稱為死亡蛋白酶 。 19 三、立題依據(jù) ? 上述對過度訓(xùn)練導(dǎo)致心肌損傷的研究包括心肌細胞形態(tài)的變化和心肌細胞的凋亡機制 。 說明凋亡既是 OTLAMI的主要損傷特征和細胞學(xué)基礎(chǔ)也是 OTLAMI的重要發(fā)病機制 。 但對 OTLAMI引發(fā)的心肌細胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)主要途徑尚未完全明了 ， 有待進一步研究 。 ? 本實驗預(yù)期通過對 Caspase3在過度訓(xùn)練導(dǎo)致的心肌細胞凋亡信號傳導(dǎo)通路中作用的研究 ， 為過度訓(xùn)練導(dǎo)致心肌損傷的防治提供新的治療靶點 。 20 四、主要研究內(nèi)容 擬采用的技術(shù)路線 研究進度 經(jīng)費預(yù)算 實驗室所具備的條件 21 擬采用的技術(shù)路線 （一） 材料 實驗動物 雄性 Wistar大鼠 32只，體重 200～ 220g，常規(guī)分籠喂養(yǎng)。由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。 玻璃鋼游泳池 按文獻報道的方法自制 150cm60cm80cm玻璃鋼游泳池 。 22 實驗流程 模型制備 安靜對照組 力竭后 6h 力竭即刻 檢測各項指標 力竭后 24h 取材及標本收集 資料整理 統(tǒng)計分析 論文撰寫 紳胞凋亡率 Caspase3 23 （二）實驗方法 實驗分組 安靜對照組CN， n=8 力竭后即刻 ESI n=8 力竭后 6h ES 6 h n=8 力竭后 24h ES 24 h n=8 力竭運動組ES， n=24 24 過度訓(xùn)練動物模型的建立 ? 按文獻 [2] 報道的方法自制150cm 60cm 80cm玻璃鋼游泳池 。 采用大鼠游泳至力竭 ， 建立過度訓(xùn)練模型 （ 安靜環(huán)境下， 單次力竭 ， 不加負重 ， 水深70cm， 水溫 30177。 2℃ ） 。 為減少實驗誤差 ， 各組大鼠于實驗前一天適應(yīng)性游泳 30min， 用吸水紙把水擦干后放回籠子中 ， 正常飲食 。 25 ? 次日再次放于水中游泳直到力竭 ， 并記錄游泳時間 。 為保證大鼠游泳有足夠的活動空間 ， 同時避免觀察不及時而發(fā)生溺水 ， 每次各組取 1只大鼠進行力竭運動 。 26 力竭標準 [2] ①沉入水底超過 10秒鐘； ②游泳動作明顯不協(xié)調(diào)； ③撈出后沒有逃避反應(yīng)，且放在平面上無法完成翻正反射。 27 取材及標本收集 ? 將各組大鼠使用乙醚麻醉 ， 腹正中切開 ,摘取心臟 ， 縱形剖開 ， 一半置入 4176。C 4%多聚甲醛中固定 ， 另一半置于 80176。C凍存待用。 ? 標本于 4％ 多聚甲醛中固定 2h后 ， 常規(guī)梯度濃度酒精脫水 ， 二甲苯透明 ， 常規(guī)石蠟包埋 。 連續(xù)切片 6～ 8張 ， 厚度 4um， 用涂有多聚賴氨酸的載玻片貼片 ， 52℃ 烘烤48h， 備用 。 28 所需藥品及試劑盒 TUNEL試劑盒：德國寶靈曼公司。 碘化吡啶（ PI）： Sigma公司。 PV免疫組化染色試劑盒：北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供 。 Caspase3兔抗鼠多克隆抗體 western blot： 小動物顯微外科手術(shù)器械。 29 （三）觀察指標
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