川麥42不同逆境生長情況研究開題報(bào)告(編輯修改稿)
2025-07-04 08:43 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 反應(yīng)系統(tǒng)總體積為 3 mL。其中 4～ 8號管中磷酸緩沖液和酶液的加入量依樣品中的酶活性進(jìn)行調(diào)整，如果酶活性強(qiáng)時(shí)，可適當(dāng)減少酶液用量。試劑全部加入后混勻，將 1號杯置于暗處，其余各杯均于 25 ℃ 、 4000 lx日光燈下反應(yīng) 20 min，各管受光情況要一致。溫度高時(shí)，時(shí)間縮短；溫度低時(shí)，時(shí)間延長，然后立即遮光停止反應(yīng)。 反應(yīng)中各試劑用量如下表所示 ： 130 mmol/LMet（ mL） 750 μmol/LNBT（ mL） 100 μmol/LEDTA 二鈉（ mL） 20 μmol/L核黃素（ mL） 酶 液(μL) 蒸餾水 (mL) 1 2 3 4 5 6 7 8 0 0 0 5 10 15 20 25 在 560 nm波長下，以 1號杯調(diào)零，測定其余各杯反應(yīng)體系的 光密度 。以 3號杯吸光度的平均值作為還原率的 100％，分別計(jì)算不同酶液量抑制 NBT光還原的相對百分率。以酶液用量為橫坐標(biāo)，以 NBT光化還原的抑制率 (％ )為縱坐標(biāo)繪制二者相關(guān)曲線， NBT光化還原被抑制 50％的酶 5 液量為一個(gè)酶活單位。 SOD總活性 [U/g]=SCKTEWVA )A( CK ? SOD比活性 [U/mg]=蛋白質(zhì)含量 總活性SOD 過氧化物酶體（ POD）的測定 酶液制備 稱取新鮮小麥葉片 g，剪碎，放入預(yù)冷的研缽中，加入適量預(yù)冷的磷酸緩沖液冰浴研磨成勻漿。殘?jiān)儆?5mL磷酸緩沖液提取一次，合并兩次勻漿液，以 4000 r/min低溫離心 15 min，上清液即為粗酶液，定容至 25 mL，酶液貯于低溫下備用。 酶活力測定 ：采用愈創(chuàng)木酚法測定 [15] 取 2支試管，于 1支中加入反應(yīng)混合液 3 mL。和磷酸緩沖液 1 mL，作為對照，另 1支中加入反應(yīng)混合液 3 mL，和上述酶液 1 mL。 (如酶活性過高可稀釋之 )。迅速將兩支試管中溶液混勻后，倒人比色杯，置于分光光度計(jì)樣品室內(nèi)，立即開啟秒表記錄時(shí)間，于 470 nm處測定 光密度 ，每隔 30 s讀數(shù)一次。 過氧化氫酶（ CAT）的測定 酶液制備 稱剪碎混勻的小麥葉片 g置于預(yù)冷的研缽中，加適量磷酸緩沖液及少量石英砂，在冰浴上研磨勻漿，轉(zhuǎn)移至 25 mL容量瓶中，用磷酸緩沖液沖洗研缽 23次 (每次 l2 mL)，合并沖洗液于容量瓶中，定容至 25 mL，搖勻。取提取液 5 mL于離心管中，在 4 ℃ 、 15000 r/min 下離心 15 min，上清液即為酶提取液， 4 ℃下保存?zhèn)溆谩? CAT 活性的測定 ：采用紫外分光光度法 [15] 取 10 mL 具塞試管，加 2 mL 酶提取液于沸水浴中加熱煮致失活，冷卻備用 。 取 10 mL 試管 4 支， 3 支為測定 (3 個(gè)重復(fù) )， 1 支為對照，按下表加入試劑。 1 2 3 4 TrisHCl 酶提取液 蒸餾水 （高溫失活） 將上述 4支試管于 25 ℃水浴中預(yù)熱 3 min 后，逐管加入 mL 100 mmol/L H2O2溶液，每 6 加一管立即在紫外分光光度 計(jì) 上測定 A240(蒸餾水調(diào)零 )，每隔 30 s 讀數(shù)一次，共測 4 min，記錄4 支試管的測定值。 總蛋白含量的測定 可溶性蛋白質(zhì)的提取 取 g小麥幼苗葉片，放入研缽，加 10 mL蒸餾水在冰浴中研成勻漿，再在 4000 r/min離心 10 min，將上清液倒入 10 mL容量瓶，再向殘?jiān)屑?4 mL蒸餾水，懸浮， 4000 r/min離心 10 min并合并上清液，定容至刻度。 蛋白質(zhì)含量的測定：采用考馬斯亮藍(lán) G250 法測定 [16] 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 取 6支試管，編號，按下表加入試劑。 1 2 3 4 5 6 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液 /mL 蒸餾水 /mL 考馬斯亮藍(lán)試 劑 /mL 蛋白質(zhì)含量 /μg 0 5
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