【文章內容簡介】 三萜類化合物的研究中采用丙酮浸 沈陽藥科大學本科畢業(yè)論文 第一章 緒論 5 提、多次層析得到了雷公藤紅素單體。 夏焱 [11]等研究了從雷公藤中提取雷公藤紅素的工藝。雷公藤藥材粉末，用 10倍量的甲醇索氏提取。提取液濃縮后加入 3倍量的硅藻土拌樣，烘干后，用氯仿超聲提取 3次，濾液合并。硅膠干法裝柱，少許氯仿溶解樣品，上樣。用氯仿洗脫除雜后，用氯仿 :甲醇 (95︰ 5)洗脫，流分合并濃縮，得雷公藤紅素。 Shihua W[12]等考察了逆流色譜 (Countercurrent Chromatography, CCC)分離純化工藝。將雷公藤的提取物上硅膠柱，石油醚 乙酸乙酯洗脫，流分再經(jīng)逆流色譜進一步純化得雷公藤紅素純品。 論文研究的意義 及目的 據(jù)文獻報道，雷公藤紅素的抑瘤作用為 65％～ 93％ ，超過美國科學家在 20 世紀 70 年代初發(fā)現(xiàn)了來自太平洋紫杉樹皮中的紫 杉醇。在雷公藤紅素單獨服用及與其它化療藥配伍使用中，尚未見不良反應的報道。據(jù)業(yè)內人士預測：雷公藤紅素一旦獲準上市，它將成為繼紫杉醇之后又一 個 高效低毒的抗腫瘤植物藥[13,14 ,15]。 隨著雷公藤紅素抗癌機理被證明，雷公藤紅素作為蛋白酶體抑制劑成為抗癌新藥的熱點 ，該化合物也將備受關注 ，具有廣闊的市場前景。 而 雷公藤紅素的 相關報道中提取純化工藝報道甚少，因此探究雷公藤紅素提取 純化 優(yōu)化 工藝既成了一種必要，更 有助于推動雷公藤紅素研究的進展，為其進入臨床應用提供可能。 目前對雷公藤紅素的報道主要集中在中藥雷公藤的研究 上，本文選擇了衛(wèi)矛屬的另一種藥材南蛇藤作為研究對象。對 其 甲醇 超聲波 提取物 浸膏 中雷公藤紅素的薄層色譜條件及硅膠柱吸附層析進行了探索 ，以期 能 提出 、其分離 純化的可行性工藝，為 雷公藤紅素的 進一步 研究 和生產(chǎn) 提供參考 依據(jù) 。 沈陽藥科大學本科畢業(yè)論文 第二章 雷公藤紅素定性定量分析方法 6 第二章 雷公藤紅素定性定量分析方法 薄層色譜 (Thin Layer Chromatography, TLC)定性分析方法 儀器與材料 儀器： ZF2型三用紫外儀 上海安亭電子儀器廠 藥品試劑：薄層層析用硅膠 GF254 青島海洋化工有限公司 氯仿，甲醇（分析 純 ） 山東禹王實業(yè)有限公司 對照品：雷公藤紅素 (≥ 98%) 中國生物制品檢定所 樣品：南蛇藤提取物及硅膠柱上洗脫下的 流 分 對照品溶液的制備 取 雷公藤紅素 對照品適量， 乙酸乙酯 溶解 ，備用 。 供試品溶液的制備 取南蛇藤提取物浸膏適量，乙酸乙酯溶解，備用。 硅膠柱層析洗脫的流分備用。 TLC 條件 薄層板：薄層層析用硅膠 GF254 展開系統(tǒng)： 氯仿︰甲醇＝ 7︰ 1 展開方式 ： 展開槽中加入適量的展開劑，平衡 10min 后上行展開 沈陽藥科大學本科畢業(yè)論文 第二章 雷公藤紅素定性定量分析方法 7 檢 測： 當雷公藤紅素點樣量大時，薄層板 在日光下 觀測 有黃色條帶 ；在紫外檢測器 365nm和 254nm 下觀測 為暗色斑點，同時也可以觀察到其它雜質成分的熒光點和暗點。 高效液相色譜 (High Performance Liquid Chromatography, HPLC)定量方法 儀器與材料 儀器 :L2130 型高效液相色譜儀 日本日立公司 L2400 型紫外檢測器 日本日立公司 N3000 色譜工作站 浙江大學智能信息研究所 TU1810 型紫外可見分光光度 北京普析通用儀器公司 型電子天平 () Acculab AR2130 型電子天平 (1mg) Ohaus KQ3200E 型超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司 試劑 ： 甲醇 （色譜純） 山東禹王實業(yè)有限公司 對照品 ： 雷公 藤 紅素 (≥ 98%) 中國生物制品檢定所 HPLC 色譜條件 [16] 色譜柱 ： Kromasil C18柱 (200mm , 5μm) 流動相 ： 甲醇 ︰ 1%醋酸 （ v/v） ＝ 87︰ 13 檢測波長 ： 425nm 流速 ： 柱溫 ： 25℃ 沈陽藥科大學本科畢業(yè)論文 第二章 雷公藤紅素定性定量分析方法 8 雷公藤紅素對照品的紫外掃描圖譜 稱取雷公藤紅素對照品適量，甲醇溶解，在 200～ 600nm波長 范圍內掃描，見下圖 21。雷公藤紅素在 425nm附近有最大吸收峰，故選擇 425nm為 檢測波長。 圖 21 雷公藤紅素紫外－可見光掃描 UV spectrum of tripterine 標準曲線的繪制 精密稱取雷公藤紅素對照品 ，甲醇溶解，定量轉移至 100mL容量瓶中并定容，搖勻，備用，作為初始溶液。 表 21 雷公藤紅素標準品濃度－峰面積數(shù)據(jù) Data of standard curve of Tripterine 濃度 (μg/mL) 1 2 5 10 20 25 50 沈陽藥科大學本科畢業(yè)論文 第二章 雷公藤紅素定性定量分析方法 9 峰面積 平均 26953 26079 26366 26466 44456 44967 45163 44862 134728 139399 135565 136564 316948 313676 313812 314812 649101 648984 645513 647866 825692 821935 822312 823313 1650310 1645210 1632760 1642760 分別精密量取配制的對照品初始溶液 、 1mL至 25mL容量瓶中 并定容 ，分別精密量 取 5mL至 10mL容量瓶中 并定容 ，搖勻。將配制的這些不同濃度梯度的溶液及初始溶液過 。分別 20μL進樣， HPLC分析得相應的峰面積，以峰面積 (A)對質量濃度 (C)進行線性回歸，得雷公藤紅素的線性回歸方程 ： A=33274C－ 17614， r=，雷公藤紅素對照品溶液濃度在 1～ 50μg/mL范圍內線性關系良好。濃度和峰面積數(shù)據(jù) 見 表 1，標準曲線見圖 22。 y = 33274x 17614R2 = +00+05+05+05+05+06+06+06+06+060 10 20 30 4