western_blot詳解及問題分析(編輯修改稿)
2025-06-20 01:00 本頁面
【文章內容簡介】 的機械強度和透明 度。是良好的電泳介質。 Western Blot 聚丙烯酰胺凝膠的聚合方式： ? 單體：丙烯酰胺（ Acr）； ? 交聯劑：甲叉雙丙烯酰胺（ Bis）； ? 催化劑：過硫酸胺或核黃素（ AP）； ? 加速劑：四甲基乙二胺（ TEMED）； ? 產物：三維網狀結構凝膠 ? 聚丙烯酰胺凝膠聚合機理是通過提供氧游離基 (free radicals)的催化，使體系發(fā)生氧化還原作用 (catalystredox systems)來完成的。催化體系主要有化學催化（ AP— TEMED）和光化學催化（核黃素 —— TMTED）體系。 Western Blot 凝膠濃度與蛋白分離范圍 凝膠濃度（％） 線性分離范圍（ KD) 15 1243 10 1668 3694 57212 SDSPAGE濃縮膠 (5% Acrylamide)及分離膠配方表： Western Blot 不連續(xù)電泳： 作用 緩沖液 PH 凝膠濃度 濃縮膠 使蛋白樣品濃縮 Cl 低， 25% 分離膠 使蛋白樣品分離 Cl 高，根據蛋白大小 電泳緩沖液： Tris甘氨酸系統 。 Western Blot 灌制分離膠 隔絕空氣 ddH2O %SDS:8% 異丁醇： 8% Western Blot 灌制積層膠 插入梳子 Western Blot Staking gel Separating gel Western Blot 轉膜 ? 要將電泳后分離的蛋白質從凝膠中轉移到固相載體（例如 NC膜）上，通常有兩種方法：毛細管印跡法和電泳印跡法 。 ? 常用的電泳轉移方法有 濕轉和半干轉 。兩者的原理完全相同，只是用于固定膠 /膜疊層和施加電場的機械裝置不同。 Western Blot 轉移膜的選擇 ? 最常用于 Western Blot的轉移膜主要是硝酸纖維素（ Nitrocellulose， NC）膜和聚偏二氟乙烯 （ Polyvinylidene Fluoride, PVDF）膜，此外也有用尼龍膜、 DEAE纖維素膜做蛋白印跡。尼龍膜和 NC膜的特點相似 ,主要用于核酸雜交。 ? 各種膜的詳細特點介紹： ? Western Blot 濕轉系統
黨政相關相關推薦
鄂ICP備17016276號-1