dna分子標(biāo)記的種類(編輯修改稿)
2025-06-15 12:50 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳，根據(jù)分離片段的大小決定基因型并計(jì)算等位基因頻率。 SSR具有以下一些優(yōu)點(diǎn)：（ l）一般檢測(cè)到的是一個(gè)單一的多等位基因位點(diǎn)；⑵微衛(wèi)星呈共顯性遺傳，故可鑒別雜合子和純合子；⑶所需 DNA量少。顯然，在采用 SSR技術(shù)分析微衛(wèi)星 DNA多態(tài)性時(shí)必須知道重復(fù)序列兩端的DNA序列的信息。如不能直接從 DNA數(shù)據(jù)庫查尋則首先必須對(duì)其進(jìn)行測(cè)序。 （ STS） 特定序列位點(diǎn) (sequence— tagged site，縮寫 STS)是對(duì)由其特定引物序列所界定的一類標(biāo)記的統(tǒng)稱。利用特異 PCR技術(shù)的最大優(yōu)點(diǎn)是它產(chǎn)生的信息非?？煽浚幌?RAPD、AFLP和利用隨機(jī)探針產(chǎn)生的 RFLP存在某種模糊性 (如難以鑒別片段的來源 ) 這類分子標(biāo)記主要包括以下幾種分子標(biāo)記。 STMS ? STMS(Sequence tagged microsateUites)通常又稱為SSR，也可稱為 SSRP(Simple Sequence Repeat Polymorphisrms） 。引物根據(jù)與微衛(wèi)星重復(fù)序列兩翼的特定短序列設(shè)計(jì)，用來擴(kuò)增重復(fù)序列本身。由于重復(fù)的長(zhǎng)度變化極大，所以這是檢測(cè)多態(tài)性的一種有效方法。其特點(diǎn)包括：一般檢測(cè)到的是一個(gè)單一的多等位基因位點(diǎn)；共顯性遺傳，故可鑒別雜合子和純合子；得到的結(jié)果復(fù)性很高 STMS的發(fā)展和相近的分子標(biāo)記種類 ? (1)把與 SSR互補(bǔ)的寡核苷酸作為多位點(diǎn) RFLP技術(shù)中的探針； ? (2)把與 SSR互樸的寡核苷酸作為 PCR引物 (可單獨(dú)作引物或與隨機(jī)引物配合使用 )，擴(kuò)增的是基因組 DNA 的特定片段，即 MP— PCR和 RAMPs： ? (3)用標(biāo)記的 SSR探針與 RAPD擴(kuò)增片段雜交．即RAMPO或稱為 RAHM 或 RAMS； ? (4)用 5 ‘或 3 ‘端加錨的 SSR 作引物 (如 GG[CA] )，即ISSR。 DAMD (directed amplification of minisatellite region DNA) 直接用小衛(wèi)星的核心序列作引物進(jìn)行擴(kuò)增。 ISTR (inverse sequence— tagged repeat 這種技術(shù)與 SPAR 技術(shù)也相近，也所用的引物是在 copia序列 [反向重復(fù)序列 ]的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)的，擴(kuò)增的是 copia序列之間的 DNA序列。 IFLP (intron fragmemt length polymorphism) ? 檢測(cè)的對(duì)象是內(nèi)含子的長(zhǎng)度差異。 RAMPO (random amplified microsatellite polymorphism ) RAMPO的基本步驟是：先用一個(gè)單一的隨機(jī)引物 (即 RAPD引物 )對(duì)基因組 DNA擴(kuò)增，用電泳將擴(kuò)增片段分開，然后，把凝膠轉(zhuǎn)移到尼龍膜上，使之與一個(gè)帶有放射性標(biāo)記 (或其它標(biāo)記 )的與 SSR互補(bǔ)的寡核苷酸探針 (如 [CA]8和 [GA]8 )雜交，放射自顯影后可得到新的多態(tài)性類。 序列特異性擴(kuò)增區(qū) (Sequence—characterized amplified regions SCAR) SCAR 標(biāo)記是在 RAPD技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。其基本步驟是：先作 RAPD分析，然后把目標(biāo) RAP D片段 (如與某目的基因連鎖的 R 片段 )進(jìn)行克隆和測(cè)序，根據(jù)原 RAPD片段兩末端的序列設(shè)計(jì)特定引物 (一般比 RAPD 引物長(zhǎng)，通常 24個(gè)堿基 )，再進(jìn)行PCR特異擴(kuò)增，這樣就可把與原 RAPD片段相對(duì)應(yīng)的單一位點(diǎn)鑒定出來。這樣的位點(diǎn)就稱為 SCAR。SCAR比 RAPD和其它利用隨機(jī)引物的方法在基因定位和作圖中的應(yīng)用更好，因?yàn)樗懈叩目芍貜?fù)性 (原因是使用的引物長(zhǎng) )，標(biāo)記是共顯性遺傳的。SCAR標(biāo)記方便、快捷、可靠，可以快速檢測(cè)大量個(gè)體，結(jié)果穩(wěn)定性好，重現(xiàn)性高。 單引物擴(kuò)增反應(yīng) (single primer amplification reaction SPAR ) SPAR技術(shù)與 RAPD技術(shù)相似的是也只用一個(gè)引物，但 SPAR分析中所用的引物不是隨機(jī)的，而是在 SS
醫(yī)療健康相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1