學生細胞生物學課題項目申請書--丹參治療心血管研究(編輯修改稿)
2025-07-02 15:10 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 用通路。 丹參有效成分的 分子 作用通路的功能驗證 對發(fā)現(xiàn)的候選組合靶標進行分析，如果是已知功能基因或蛋白質(zhì)則直接進行組合篩選；如果是新基因或蛋白質(zhì)則首先進行結(jié)構(gòu)和功能研究；然后采用反義核酸、 siRNA 技術(shù)， RTPCR 技術(shù)， Western 印跡技術(shù)等在細胞和動物模型上對丹參有效成分的分子作用通路進行組合功能驗證。 丹參有效成分 最佳 “分子配伍 ”的篩選 進一步用丹參有效單體的不同成分、不同劑量、不同比例的配伍依次在細胞和動物模型上對候選組合靶標進行驗證，在 “化學基因組學 ”研究技術(shù)平臺層面上進行有效成分配伍研究，以期找到療效確切、安全經(jīng)濟的單體及其組合。 （課題分解） ： 設計并制備人心血管相關芯片： 根據(jù)心血管疾病相關文獻，設計并制成低密度的寡核苷酸芯片。從 Cardio 數(shù)據(jù)庫 (Cardiovascular Disease Related Database 8 )中找出大約 400 種心血管疾病相關基因，這些基因的人類 mRNA 序列來自 GenBank。 使用大規(guī)模探針設計軟件Mprobe 來設計寡核苷酸探針，芯片質(zhì)控方法采用陽性對照結(jié)合看家基因和陰性對照，對逆轉(zhuǎn)錄、雜交過程進行監(jiān)測和結(jié)果分析。 建立損傷的細胞模型： 動脈粥樣硬化 (atherosclerosis, AS)的形成涉及許多環(huán)節(jié)，包括脂質(zhì)代謝紊亂，血管內(nèi)皮細胞損傷，平滑肌細胞增殖， 從中層遷移到內(nèi)膜下，單核和巨噬細胞的遷移、增生和分化，泡沫細胞的形成，細胞的壞死和脂質(zhì)沉積等。本項研究擬建立以 TNFα (2ng/ml)、 oxLDL ()損傷的血管內(nèi)皮、平滑肌、心肌及血小板模型。 丹參主要單體對人血管內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞、心肌細胞等藥理作用的篩選： 選擇藥理試驗劑量范圍；凋亡保護試驗；白細胞粘附試驗；凝血纖溶物質(zhì)（ PAI1, tPA）分泌； NO 分泌；內(nèi)皮素 1 分泌；平滑肌細胞增殖實驗。 丹參有效成分保護心血管作用的表達譜及蛋白質(zhì)組學研究： 丹參有 效成分孵育內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞等 612 小時，再以TNFα、 oxLDL 刺激 6 小時，提取細胞的 RNA 及總蛋白進行表達譜及蛋白質(zhì)組學研究，發(fā)現(xiàn)差異表達基因及蛋白，作為丹參有效成分的潛在靶標。 9 丹參有效成分保護心血管作用的機理研究及靶標驗證： 以反義核酸、 siRNA 技術(shù)， QRTPCR、 Western Blot 及通路抑制劑等技術(shù)研究丹參有效成分及其組合保護心血管作用的分子機制及功能驗證。 丹參有效成分保護心血管作用的動物試驗及臨床觀察： 觀察丹參活性組分對實驗性動脈粥樣硬化家兔 的治療作用。雄性新西蘭兔高血脂飼養(yǎng) 12－ 16 周形成實驗性的動脈粥樣硬化，給予高脂飲食同時給予丹參活性成分， 4， 8， 12， 16 周末采血檢測血流變、血脂情況，于 16 周時處死，測定血脂變化 TC、 TG、 LDLC，血清和血管壁中 NO 和 ET－ 1 的含量變化。測定頸動脈受損內(nèi)皮細胞黏附因子 VCAM－ 1 的變化。與陽性對照藥復方丹參方及辛伐他汀比較。 觀察丹參活性組分對實驗性高血脂癥家兔的治療作用。雄性新西蘭兔高血脂飼養(yǎng) 2 周形成實驗性的高血脂癥，然后分組連續(xù)給予高脂飲食和丹參活性成分， 4 周后高脂給量減半，繼續(xù)給予 丹參動脈粥樣硬化活性成分至 6 周，測定給藥后 4 和 6 周時的血脂變化 TC、 TG、LDLC，血清和血管壁中 NO 和 ET－ 1 的含量變化。測定頸動脈受損內(nèi)皮細胞黏附因子 VCAM 的變化。與陽性對照藥復方丹參方及辛伐他汀比較。 觀察丹參活性組分對大鼠缺血再灌注 (Ischemic reperfusion injury， IRI)的影響，對血栓烷Ａ 2 和前列環(huán)素 (TXA2/PGI2)比值的調(diào) 10 節(jié)作用，以及一氧化氫 (NO)、內(nèi)皮素 (ET－ 1)、纖維蛋白原 (Fig)水平，改善血液流變性等作用，改善ＩＲ的病理生理。與陽性藥物復 方丹參方比較。 觀察丹參活性組分對高黏滯血癥家兔和急性高黏滯血癥模型大鼠血管內(nèi)皮分泌功能的影響，采用復合因素（高分子右旋糖酐、腎上腺素、牛血清白蛋白）、長時間 (11d)造成高黏滯血癥慢性模型；采用１次性靜脈注射高分子右旋糖酐，皮下注射腎上腺素造成急性高黏滯血癥模型。分別用丹參活性組分進行治療，觀察血管內(nèi)皮細胞分泌功能的變化及丹參活性組分的干預效果。檢測指標：紅細胞變形能力 , 紅細胞比容、紅細胞聚集指數(shù) , 紅細胞電泳時間；血液流變性；全血比黏度、血漿纖維蛋白原；血小板聚集和黏附性及 TXB 6－ Keto－
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