smp-qc-0031-00生物指示劑標(biāo)準(zhǔn)管理規(guī)程(編輯修改稿)
2024-10-12 12:12 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 控制章： 第 4頁共 8頁 需氧性微生物芽胞（如嗜熱脂肪芽胞桿菌芽胞）用 胰酪胨大豆肉湯 培養(yǎng)基（ TSB）及胰酪胨大豆 瓊脂培養(yǎng)基（ TSA）；厭氧性微生物芽胞（如產(chǎn)芽胞梭菌芽胞） 用硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基及硫乙醇酸鹽瓊脂培養(yǎng)基。 為減少可變因素，對整個 D 值、 Z 值測定應(yīng)使用同一批培養(yǎng)基，用于澆注平皿的 胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（ TSA） 必須是 質(zhì)量檢查合格且在有效期內(nèi) 或 兩天內(nèi)新配制的。試驗前將澆制平皿用瓊脂培養(yǎng)基融化后置于 45～ 50℃ 保溫備用。 可用 9ml 蒸餾水，生理鹽水或氯化鈉磷酸鹽緩沖液為空白稀釋液。同一實驗，應(yīng)盡可能使用同一種稀釋液。芽胞轉(zhuǎn)移到空白稀釋液中開始稀釋必須連續(xù)操作，不能中斷，直至澆好平板并開始培養(yǎng)為止。 有些微生物的表面菌落可能會覆蓋次表面菌落難以辨認(rèn)（如環(huán)狀芽胞桿菌及嗜熱脂肪熱芽胞桿菌）。在這種情況下，建議采用澆注平皿法，待冷卻后再在表面覆蓋一層薄瓊脂。 試驗用芽胞懸浮液的制備 基準(zhǔn)芽胞懸浮液是芽胞的一種儲備液。工作芽胞懸浮液可由儲備液稀釋而得，或直接從被試驗芽胞的平板上收集而得，制備該懸浮液是為了避免過多地使用基準(zhǔn)芽胞懸浮液從而避免縮短其儲存期（這對確保微生物耐熱的穩(wěn)定性是很重要的）。 將工作芽胞懸浮液加入試驗液中制備成稀釋液，即試驗懸浮液，該試驗懸浮液中工作芽胞懸浮液的比例通常不大于 10%，以保證試驗菌懸液濃度應(yīng)能達(dá)到每 含 106～ 108 個芽胞。 [ 是加入每支毛細(xì)管 ∮ （ ～ ） 99mm 內(nèi)的菌液體積 ]。 將試驗懸浮液置于冰浴內(nèi)，以防止芽胞初步萌發(fā)而降低其耐熱性。應(yīng)至少準(zhǔn)備兩個樣品的試驗懸浮液。 標(biāo)定工作芽胞標(biāo)準(zhǔn)液以得到初始濃度。根據(jù)試驗芽胞液的配制過程，從標(biāo)定的初始濃度算出 。 每次試驗時，應(yīng)同時標(biāo)定未加熱的毛細(xì)管。 確定試驗參數(shù) 如果某種芽胞液或同一種 CMCC（或 ATCC）編號的芽 胞液有現(xiàn)成的 D 值資料，以此資料為參考確定所需試驗參數(shù)（初始濃度、間隔時間和稀釋度）。 標(biāo) 題 生物指示劑標(biāo)準(zhǔn)管理規(guī)程 編 碼 SMPQC003100 控制章： 第 5頁共 8頁 如沒有現(xiàn)成資料，需要確立 1 個或 2 個試驗方案以獲得在特定溫度下對試驗菌適用的試驗參數(shù)。 選擇的初始濃度至少能下降 3 個對數(shù)單位，通常 106～ 108較合適借助參考資料來選定本次試驗最合適的加熱間隔時間或數(shù)據(jù)點。 如果沒有現(xiàn)成的資料，那么應(yīng)在較寬的參數(shù)范圍內(nèi)進(jìn)行一些預(yù)試驗，隨著試驗獲得更多的資料后，再來仔細(xì)選點。 設(shè)計的稀釋度，每只平板應(yīng)能得到 菌落 25～ 250cfu。 對未加熱（即原點）毛細(xì)管，應(yīng)使其能得到 100cfu/ml 計數(shù)的稀釋度，稀釋度可取濃度的指數(shù)冪除以 102得到。稀釋因子則是這個數(shù)的倒數(shù)。 同一芽胞液在其他溫度下的加熱時間間隔通常為： 116℃ 2 分； 110℃
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