【文章內(nèi)容簡介】 土樣重量（ g） 土樣添加二氯喹啉酸濃度 (mg/L)實(shí)際測得二氯喹啉酸濃度 (mg/L)回收率（ %） *表中數(shù)據(jù)為兩次重復(fù)測定平均值 稱取 土壤樣品四份，按前處理方法 色譜條件進(jìn)行樣品分析，把硼砂提取液的體積分別設(shè)置為 50、 100mL和 60mL 甲醇。其添加回收率結(jié)果見表 4。從表中可以看出硼砂提取液體積為 50、 100mL 時(shí)添加回收率差別不是很大，但是考慮到節(jié)約試驗(yàn)成本，降低費(fèi)用，因此選擇提取液體積為 30mL 硼砂緩沖液和60mL 甲醇。 表 率試驗(yàn)結(jié)果 *硼砂提取液體積（ mL） 304050100添加回收率 (%) *表中數(shù)據(jù)為兩次重復(fù)測 定平均值 提取時(shí)間的選擇稱取土壤樣品 ，添加二氯喹啉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液 ，對同一添加二氯喹啉酸土樣進(jìn)行震蕩提取 1h、 2h和 5h，每個(gè)處理重復(fù)兩次，其回收率結(jié)果見表 5；結(jié)果表明 1h 和 2h無明顯差別，而提取 5h 時(shí)回收率顯著下降，考慮全國各地土壤酸堿度、粘度及對二氯喹啉酸的吸附率不同和經(jīng)濟(jì)等因素，本標(biāo)準(zhǔn)采用震蕩提取 1h。 表 *提取時(shí)間 (h)土樣重量（ g） 測 試 濃 度 (mg/L) 添 加 回 收 率(%)*表中數(shù)據(jù)為兩次重復(fù)測定平均值 樣品經(jīng)層析柱凈化與未經(jīng)層析柱凈化方法比較 稱取 土壤樣品 4 份，放入 250mL 具塞三角瓶內(nèi)，加入，振蕩提取 60min。用鋪有適量的 Celite545 助濾劑的布氏漏斗抽濾，用 10mL 甲醇沖洗濾渣，將濾液全部轉(zhuǎn)入 250mL 分液漏斗中，加入 10mL5%NaCl 水溶液，用,用 50、 30mL 二氯甲烷萃取 三次，合并二氯甲烷相；二氯甲烷相經(jīng)無水硫酸鈉脫水后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上于 45℃濃縮近干，氮?dú)獯蹈?，其?2 份用 5mL 甲醇定容 ,過 m 微孔濾膜，所得溶液待高效液相色譜測定。另外 2份進(jìn)行柱凈化，用 2mL丙酮定容，移入層析柱內(nèi)凈化。在層析柱內(nèi)依次加入 1cm 無水硫酸鈉，2g 硅膠， 1cm無水硫酸鈉，用 10mL丙酮預(yù)淋洗，棄去，將上述提取已濃縮丙酮定容液移入層析柱內(nèi)，用 40mL丙酮淋洗，收集淋洗液于 45℃下濃縮近干，氮吹至干， 5mL甲醇定容過 m微孔濾膜，待高效液相色譜測定。其色譜圖見圖 14。 min0123456789mAU202468DAD1A,Sig=240,8Ref=320,100(QUINCLORAC20210721104708\) min0123456789mAU202468DAD1A,Sig=240,8Ref=320,100(D:\CHEM32\1\DATA\QUINCALORAC\Q2021072520210725103919\)7.593a： .未經(jīng)層析柱凈化土壤色譜圖 b： .經(jīng)層析柱凈化土壤色譜圖 圖 以看出未經(jīng)層析柱凈化樣品目標(biāo)峰和雜質(zhì)峰能夠完全分離開，且不受雜質(zhì)峰干擾，經(jīng)層析柱凈化和未經(jīng)層析柱凈化差別不是很明顯；從省時(shí)省力，節(jié)約成本等方面考慮，本標(biāo)準(zhǔn)選擇土壤樣品不經(jīng)層析柱凈化。 待測液及標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液存放時(shí)間為了便于批量分析及數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性，驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液及檢測樣品經(jīng)提取后的待分析有效存放時(shí)間。配制 1mg/kg 二氯喹啉酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，分成 12 分，每 3 份為一組（即設(shè)置三次重復(fù)），將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液放置在 4℃條件下分別于 0、 60 和 90d取 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 ,進(jìn)行高效液相色譜檢測，比較其峰面積變化情況。 表 結(jié)果 *存放時(shí)間（ d） 重復(fù) 1 重復(fù) 2 重復(fù) 3 平均值 RSD(%) .*表中數(shù)據(jù)為二氯喹啉酸 1mg/kg標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的色譜峰面積單位 從表 6中可以看出 1mg/kg標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液在 4℃條件下 存放 90d后檢測結(jié)果與立即檢測結(jié)果差別不大；在 4℃條件下 1mg/kg 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液存放有效期可定為 90d,更高濃度的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液至少可存放 3個(gè)月。 稱取 1份土壤樣品，添加 ，按 進(jìn)行樣品前處理，樣品處理好后，分成 12 份，分別裝于 12個(gè)樣品瓶中。每 3 個(gè)樣品瓶分為一組（即設(shè)置三次重復(fù)）：第一組，在樣品處理好后立即進(jìn)行高效液相色譜檢測；第二組、第三組、第四組，將待測液放置在 4℃條件下分別于 2 4 72h,繼而進(jìn)行高效液相色譜檢測。 表 在不同存放時(shí)間下的測定結(jié)果 *存放時(shí)間（ h） 重復(fù) 1 重復(fù) 2 重復(fù) 3 平均值 RSD(%) 0 *表中數(shù)據(jù)為土壤樣品色譜峰面積單位 從表 7 中可以看出樣品制備完成后在 4℃條件下存放 72h 后檢測結(jié)果與立即檢測結(jié)果差別不大；說明可以在 4℃條件下存放 72h 后進(jìn)行高效液相色譜檢測。 空白對照試驗(yàn)不加入標(biāo)準(zhǔn)品，按 前處理方法和 色譜條件對空白土壤樣品進(jìn)行測定。由圖 15 和圖 16 可見，空白圖譜基線穩(wěn)定，在二氯喹啉酸出峰處無其他干擾峰。因此，在 的二氯喹啉酸含量的計(jì)算公式中，無需進(jìn)行空白扣除。 min012345678mAU25201510505DAD1A,Sig=240,4Ref=360,100(D:\HYF\COMPARISONRESIDUE\20210921\2021083120210921100600\0) 圖 15 水 樣 空 白 試 驗(yàn) 色 譜 圖min012345678mAU050100150202150300350DAD1A,Sig=240,4Ref=360,100(D:\HYF\COMPARISONRESIDUE\20210921\2021083120210921100600\)圖 16 土樣空白試驗(yàn)色譜圖 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性、最小檢出量和最低檢測濃度采用外 標(biāo)法定量，以進(jìn)樣濃度（ mg/L）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)。在所設(shè)定的儀器條件下，二氯喹啉酸最小進(jìn)樣量峰高為噪聲 3 倍時(shí)，最小檢出量為 1011 g。土壤樣品取 ， 最后定容至 5mL，進(jìn)樣量 10 l，計(jì)算土壤樣品最低檢測濃度為：。灌溉水樣品取 50mL，最后定容至 2mL，進(jìn)樣量 10 l，計(jì)算灌溉水樣品最低檢測濃度為： ；結(jié)果見表 8。 結(jié)果表明，方法的線性良好，相關(guān)系數(shù)均大于 。方法的 最小檢出量為 1011g，土壤和灌溉水樣檢測限分別為： 和 ，其靈敏度良好。 表 、相關(guān)系數(shù)、最低檢測濃度和最小檢出量樣品線性方程相關(guān)系數(shù)最小檢出量 (g)最低檢測濃度 (mg/kg) 二氯喹啉酸 Y= 1011 土壤 y= = 進(jìn)樣濃度（ mg/kg）峰面積（ ）圖 17 二氯喹啉酸標(biāo)準(zhǔn)曲線圖 重復(fù)性試驗(yàn) 按 樣品前處理方法和 色譜條件對土壤和灌溉水添加樣品進(jìn)行 5 次平行測定，得到方法精密度，以 RSD 表示，結(jié)果見表 9 與表10。二氯喹啉酸灌溉水樣品的精密度小于 %，二氯喹啉酸土壤樣品的精密度小于 %，方法的重復(fù)性良好。 表 （ mL） 添加二氯喹啉酸量（ mg/L） 檢測二氯喹啉酸含量（ mg/L） 平 均 值(%) 表 (g)添加二氯喹啉酸量（ mg/L） 檢測二氯喹啉酸含量（ mg/kg） （ %） 回收率試驗(yàn) 不同土壤類型添加回收實(shí)驗(yàn)在四種不同類型土壤中添加中濃度水平（即 ）二氯喹啉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述前處理方法 ()和色譜條件 ()進(jìn)行檢測，每個(gè)處理設(shè)置重復(fù)兩次；結(jié)果見表 11。 表 *土壤類型油大紅 土（云南大理） 青市麻砂泥田土（湖南寧鄉(xiāng)縣） 麻黃泥土（廣東梅縣） 牛肝土田（廣東南雄） RED(%)回收率 (%) 平均回收率 (%) *注：表中數(shù)據(jù)位兩次重復(fù)平均值 從表 11 中可以看出二氯喹啉酸在四種土壤類型中的添加回收率在 %%之間 ,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為 %。表明在四種土壤類型中添加 回收率差別不大，均符合農(nóng)藥殘留標(biāo)準(zhǔn)。故可以選擇一種土壤類型進(jìn)行土壤高、中、低濃度的添加回收率試驗(yàn)。 不同添加水平回收率試驗(yàn)取土壤樣品和灌溉水樣品，以其五次平行測定的平均值作為計(jì)算其二氯喹啉酸原始含量的依據(jù)，添加高、中、低三個(gè)濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行回收試驗(yàn)。由表 12 可見，二氯喹啉酸的回收率在 %~% 之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在%%之間 。符合農(nóng)藥殘留添加回收率標(biāo)準(zhǔn)。二氯喹啉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液、土壤空白、水樣空白以及土壤添加和水樣添加色譜圖見圖 1822。 表 平回收率 (%)平均回收率 (%)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD(%)(mg/kg 或 mg/L)土壤、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 水樣 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 min0123456789mAU202468DAD1A,Sig=240,8Ref=320,100(QUINCLORAC20210721104708\) 準(zhǔn)溶液色譜圖 min0123456789mAU202468DAD1A,Sig=240,8Ref=320,100(QUINCALORAC\QUINCALORAC202172220210722132626\)圖 空白色譜圖 min0123456789mAU151050510DAD1A,Sig=240,8Ref=320,100(QUINCLORAC20210721104708\)圖 min0123456789mAU202468DAD1A,Sig=240,8Ref=320,100(QUINCLORAC20210721104708\) 圖 （ ）色譜圖 min0123456789mAU202468DAD1A,Sig=240,8Ref=320,100(QUINCLORAC20210721104708\) 圖 22. 水樣 添 加 中 濃 度（ ）色譜圖 比對試驗(yàn) 按照本項(xiàng)目建立的方法，項(xiàng)目組于 2021 年 8 月至 10 月分別在 5個(gè)具有測試資質(zhì)的煙草測試分析中心進(jìn)行平行比對試驗(yàn)。委托測試單位有：深圳中煙工業(yè)有限責(zé)任公司（實(shí)驗(yàn)室Ⅰ）、廣東中煙工業(yè)有限責(zé)任公司（實(shí)驗(yàn)室Ⅱ）、川渝中煙工業(yè)有限責(zé)任公司（實(shí)驗(yàn)室Ⅲ）上海中煙工業(yè)有限責(zé)任公司（實(shí)驗(yàn)室Ⅳ）和湖南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司（實(shí)驗(yàn)室Ⅴ）。 2021年 10月完成了比對試驗(yàn)。 選取的試驗(yàn)樣品是各比對試驗(yàn)室當(dāng)?shù)責(zé)?稻輪作田內(nèi)的土壤和灌溉水樣品，土壤和灌溉水樣品的添加量均為 (或 mg/L)，并設(shè)有空白對照。按照 本標(biāo)準(zhǔn)設(shè)定的前處理方法和儀器條件對土壤和灌溉水進(jìn)行添加回收率試驗(yàn)其結(jié)果見表 14，比對試驗(yàn)在各實(shí)驗(yàn)室使用的高效液相色譜（ HPLC）和紫外檢測器（ UVD）型號見表 13。 表 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ使用的高效液相色譜和檢測器型號實(shí)驗(yàn)室 HPLC 型號 UVD 型號儀器生產(chǎn)商Ⅰ 1200G1315CAgilentⅡ1200G1314AAgilent Ⅲ PEFlexar15PEFlexar15PerkinElmer Ⅳ1100G1314AAgilentⅤ 1100G1314AAgilent 表 Ⅰ～Ⅴ比對試驗(yàn)結(jié)果 * 二氯喹啉酸含量（ mg/kg或 mg/L） 回收率 (%)實(shí)驗(yàn)室ⅠⅡⅢⅣⅤⅠⅡⅢⅣⅤ平均值 RSD(%)土樣177。 177。 177。 177。 177。 177。 177。 177。 177。 177。 水樣177。 177。 177。 177。 177。 177。 177。 177。 177。 177。 *表中數(shù)據(jù)為 3 次重復(fù)的平均值 X177。 ，土樣中二氯喹啉酸的添加量為，水樣中二氯喹啉酸的添加量為 。 采用本標(biāo)準(zhǔn)建立的方法進(jìn)行土壤及灌溉水二氯喹啉酸除草劑殘留量的測定，在上述五家實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了對比試驗(yàn)，土壤添加平均回收率為 %，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為 %；灌溉水平均添加回收率為 %，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為 %。結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)方法符合農(nóng)藥殘留檢測分析的要求，適用于土壤及 灌溉水中二氯喹啉酸的殘留檢測。 結(jié)論項(xiàng)目組對《土壤及灌溉水二氯喹啉酸除草劑殘留量的測定高效液相色譜法》進(jìn)行了驗(yàn)證，并對高效液相色譜法測定煙區(qū)灌溉水、土壤樣品中二氯喹啉酸含量的線性、檢測限、回收率進(jìn)行了考察，精確度，重復(fù)性等均達(dá)到了標(biāo)準(zhǔn)方法的各項(xiàng)指標(biāo)。該標(biāo)準(zhǔn)方法能夠準(zhǔn)確地測試農(nóng)田和煙區(qū)灌溉水、土壤中二氯喹啉酸殘留量。 建立的高效液相色譜測定土壤及灌溉水中二氯喹啉酸除草劑殘留量的標(biāo)準(zhǔn)方法具有快速、準(zhǔn)確，易操作的特點(diǎn)，特別適用于煙區(qū)灌溉水、土壤樣品中二氯喹啉酸殘留量的檢測與分析。 參 考文獻(xiàn)