不同濃度6-ba、ga3對(duì)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆子葉節(jié)遺傳轉(zhuǎn)化率的影響(編輯修改稿)
2025-10-08 14:07 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 3cm 時(shí)，移栽到混合土中， 散射光下覆膜保濕進(jìn)行精心照料培養(yǎng)， 25℃ ，約 35 天后轉(zhuǎn)入正常光下培養(yǎng)； ⑿ 待植株生長(zhǎng)健壯，向植株上涂抹除草劑，觀察，可正常生長(zhǎng)的，方可初步鑒定為所獲目的植株 。 2 結(jié)果與分析 共培養(yǎng)階段不同激素濃度配比 情況 實(shí)驗(yàn)共設(shè)置了 4 組不同的激素濃度梯度： 第一組： ， 100mg/LGA3； 第二組： ,150mg/LGA3；第三組：不加 6BA， 200mg/LGA3； 第四組：不加 6BA，250mg/LGA3。以此來分析共培養(yǎng)階段大豆子 葉節(jié)叢生芽分化的情況。 圖 1 和 mg/L 6BA 對(duì)叢生芽分化的影響 0黑農(nóng)3 7 黑農(nóng)6 4 黑農(nóng)4 4 小粒豆 圖 2 四種不同濃度的 GA3 對(duì)子葉節(jié)生長(zhǎng)的影響 結(jié)果表明， 在共培養(yǎng)階段，添加 或 mg/L 6BA 均可有效促進(jìn)叢生芽的分化，誘導(dǎo)的愈傷組織緊致，生命旺盛，但二者差異并不顯著 （圖 1） 。 而培養(yǎng)基中添加了 250mg/LGA3后，有效促進(jìn)子葉節(jié)的伸長(zhǎng)，提高叢生芽誘導(dǎo)率，叢生芽誘導(dǎo)率均在 50%以上（圖 2）。 叢生芽 誘導(dǎo) 階段激素配比 情況 實(shí)驗(yàn)共設(shè) 置了 4 組不同的激素濃度梯度： 第一組： ， 20mg/L BIA； 第二組：， 40mg/L BIA；第三組： ,不加 BIA；第四組： ，不加 BIA。 以此來分析不同激素濃度對(duì)叢生芽誘導(dǎo)率的影響。 圖 3 四種不同濃度的 6BA 對(duì)叢生芽誘導(dǎo)率的影響 結(jié)果表明， 在叢生芽誘導(dǎo)階段， 6BA 濃度在 ，隨著 6BA 濃度的升高，叢生芽誘導(dǎo)率也隨之升高，最適生長(zhǎng)濃度在 （ 圖 3，圖 4） 。 圖 4 芽誘導(dǎo)階段培養(yǎng)基中激素配比圖片 0黑農(nóng)3 7 黑農(nóng)6 4 黑農(nóng)4 4 小粒豆100mg/L 150mg/L 200mg/L 250mg/L0%10%20%30%40%50%60%70%黑農(nóng)3 7 黑農(nóng)6 4 黑農(nóng)4 4 小粒豆 圖 5 芽誘導(dǎo)時(shí)期產(chǎn)生的愈傷組織 及 其 褐化和玻璃化現(xiàn)象 圖 5 的 A 和 B 為芽誘導(dǎo)階段產(chǎn)生的愈傷組織，此種狀態(tài)為培養(yǎng)較為理想的愈傷組織，培養(yǎng)基濃度適宜，培養(yǎng)溫度以及 濕度 合適，培養(yǎng)基水分適合叢生芽誘導(dǎo)階段的生長(zhǎng)。 但在培養(yǎng)過程中也會(huì)出現(xiàn) 褐化和玻璃化現(xiàn)象（圖 5 的 C 和 D）。產(chǎn)生褐化的原因有很多，可能是培養(yǎng)的外植體老化）、外植體傷口太大、消毒時(shí)間過長(zhǎng)或是消毒液沒有沖洗干凈、培養(yǎng)溫度過高、季節(jié)原因、培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)等；產(chǎn)生玻璃化的實(shí)質(zhì)是植物 細(xì)胞分裂與體積增大的速度超過了干物質(zhì)生產(chǎn)和積累的速度，植物只好用水分來充漲體積，從而表現(xiàn)玻璃化。不同作物種類或品種，玻璃化的發(fā)生頻率各不相同。 另外，叢生芽誘導(dǎo)階段培養(yǎng)基中水分不可過大，否則將會(huì)抑制叢生芽的生長(zhǎng)。 芽伸長(zhǎng)階段激素配比 情況 通過配置不同濃度激素配比的培養(yǎng)基 ， 對(duì)四種大豆進(jìn)行培養(yǎng)，目的是研究不同激素配比對(duì)叢生芽牙伸長(zhǎng)的影響，旨在選用芽伸長(zhǎng)最適濃度的激素配比 。 培養(yǎng)基如下， 第一組：不加IAA， 250mg/L GA3， 100mg/L BIA；第二組： 200mg/L IAA， 100mg/L GA3， 200mg/L BIA。 圖 6 芽伸長(zhǎng)階段 GA3 和 IAA 濃度配比對(duì)芽伸長(zhǎng)的影響 結(jié)果表明， 在芽伸長(zhǎng)階段，在培養(yǎng)基中同時(shí)添加 100mg/L GA3 和 200mg/LIAA 的芽伸長(zhǎng)率比單一添加 250mg/LGA3 略高 （圖 6，圖 7）。 IAA 對(duì)芽伸長(zhǎng)也有一定的促進(jìn)作用，當(dāng)同時(shí)添加適量濃度 GA3 和 IAA 時(shí)，兩種激素相互作用促進(jìn)芽的生長(zhǎng)。而只添加 GA3 時(shí)，隨濃度大，但激素種類單一，對(duì)芽伸長(zhǎng)的影響不夠明顯。 圖 7 芽伸長(zhǎng)情況時(shí)的圖片 0%10%20%30%40%50%60%黑農(nóng)3 7 黑農(nóng)6 4 黑農(nóng)4 4 小粒豆GA3 GA3+IAAA B C D 生根階段 方法比較 實(shí)驗(yàn)采取了 2 種不同的生根方法， 第一 種是直接向培養(yǎng)基中添加 ；第二 種是 用 。以此來分析不同方法對(duì)生根的影響。 結(jié)果表明，在生根階段用 明顯，但一般采用前者，即向培養(yǎng)基中直接添加 。因?yàn)榇朔ㄏ鄬?duì)操作簡(jiǎn)單，且激素濃度在培養(yǎng)基中分布均勻。 不同濃度篩選劑對(duì)大豆生長(zhǎng)各階段的影響 如圖 8 所示，大豆生長(zhǎng)各階段時(shí)加入不同濃度篩選劑對(duì)大豆的生長(zhǎng)狀態(tài)有很大影響，當(dāng)篩選劑濃度過大時(shí)，大 量子葉節(jié)過早發(fā)黃老化，不利于目的子葉節(jié)的收獲。因此在實(shí)驗(yàn)過程中篩選劑的濃度應(yīng)在不同生長(zhǎng)階段選擇適宜濃度。 圖 8 篩選劑濃度對(duì)比 3 討論 共培養(yǎng)階段 6BA、 GA3 濃度對(duì)叢生芽誘導(dǎo)率的影響 在遺傳轉(zhuǎn)化再生體系中，共培養(yǎng)階段培養(yǎng)基中添加激素種類和濃度時(shí)影響叢生芽分化和植株再生的重要因素。 理論上來講， 6BA 和 GA3 濃度越高，叢生芽誘導(dǎo) 率越高，每個(gè)外植體的叢生芽數(shù)目也越多，轉(zhuǎn)化效率也就越高。而叢生芽越多，芽之間的抑制作用也就越強(qiáng)，導(dǎo)致叢生芽不易生長(zhǎng)，也沒用 明顯的主莖。本研究中經(jīng)過農(nóng)桿菌浸染 ，共培養(yǎng)的大豆，在 mg/L 6BA 及 250 mg/LGA3 時(shí)，叢生芽的生長(zhǎng)狀況最好。 叢生芽階段 各因素 對(duì)叢生芽誘導(dǎo)率的影響 在實(shí)驗(yàn)過程叢生芽階段培養(yǎng)時(shí)，愈傷組織易出現(xiàn)褐化，一般采用較嫩幼新生的外植體且適當(dāng)降低培養(yǎng)基的濃度，調(diào)節(jié)培養(yǎng)箱內(nèi)的光照，或適當(dāng)微調(diào)底培養(yǎng)基的 PH。愈傷組織出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象時(shí)，一般會(huì)適當(dāng)調(diào)節(jié)激素 6BA 跟 GA3 的濃度配比，以抑制玻璃化想象的產(chǎn)生。 基因型對(duì)大豆子葉節(jié)叢生芽誘導(dǎo)率的影響 選擇一個(gè)合適的受體基因型，一方面應(yīng)考慮到所選擇的基因 型的農(nóng)藝性狀，另一方面取決于該基因型組培時(shí)的再生能力，最后還要通過實(shí)驗(yàn)檢測(cè)它被農(nóng)桿菌侵染后的再生能力。關(guān)于基因型之間存在的這種差異的原因，有研究認(rèn)為是由細(xì)胞生理狀態(tài)不同造成的，如細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)
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