【文章內(nèi)容簡介】 試劑名稱 顏色特征 Mandelin 試劑 莨菪堿及阿托晶顯紅色 （ 1%釩酸銨的濃硫酸溶液） 土的寧顯藍(lán)紫色，奎寧顯淺橙色 Macquis 試劑 嗎啡顯紫紅色 （含少量甲醛的濃硫酸） 可待因顯藍(lán)色 嗎啡顯藍(lán)色漸轉(zhuǎn)棕色，小糪堿顯棕綠色 （ 1%鉬酸納或鉬酸銨的濃硫酸溶液） 利血平顯黃色漸轉(zhuǎn)藍(lán)色，烏頭堿顯黃棕色 一些顯色劑，如溴麝香草酚 藍(lán)、溴麝香草酚綠等，在一定 pH條件下能與一些生物堿生成有色復(fù)合物，這種復(fù)合物能被三氯甲烷定量提取出來，可用于生物堿的含量測定。 多項(xiàng)選擇題 與碘 — 碘化鉀在酸性水溶液中能生成紅棕色沉淀的有（ ） [答疑編號 5630020203] 【正確答案】 AE 可使嗎啡初顯紫色漸轉(zhuǎn)棕色的試劑是 ,5二硝基苯甲酸 ﹪釩酸銨的濃硫酸溶液 ﹪鉬酸鈉的濃硫酸溶液 [答疑編號 5630020204] 【正確答案】 D 第三節(jié) 生物堿的提取與分離 一、總生物堿的提取 揮發(fā)性生物堿如麻黃堿可用水蒸氣蒸餾法提取。 可升華的生物堿如咖啡堿可用升華法提取。 提取方法 溶劑 方法 純化 水或酸水 提取法 %～ 1%的硫酸、鹽酸或醋酸、 酒石酸溶液 浸漬、 滲漉、 回流、 連續(xù)回流 （ 1）陽離子樹脂交換法 （ 2）萃取法 醇類溶劑 提取法 甲醇、乙醇 酸水 堿化 萃取法處理去除脂溶性雜質(zhì) 親脂性有機(jī)溶劑提取法 三氯甲烷 、苯、乙醚以及二氯甲烷等 同上 附：陽離子交換樹脂法 將總堿的酸水提取液通過強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂柱，使酸水中生物堿陽離子交換在樹脂上，而非生物堿化合物則流出柱外，用中性水或乙醇進(jìn)一步洗除柱中的雜質(zhì)。 將交換后的樹脂晾干，用氨水堿化至 pH值為 l0左右，使生物堿從樹脂中游離出來，再用三氯甲烷或乙醚等有機(jī)溶劑回流提取，回收溶劑即可得到總生物堿。也可用含氨水的乙醇洗脫液直接洗脫，中和洗脫液，回收乙醇即得總生物堿。 二、生物堿的分離 （一）生物堿的初步分離 將總生物堿按堿性強(qiáng)弱、酚性有無 及是否水溶性初步分成 5個(gè)部分，一般分離流程如下： 生物堿的初步分離流程圖 圖續(xù) 1 圖續(xù) 2 （二）生物堿單體的分離 方法：酸水 堿化 萃取法 注意： ① 強(qiáng)堿在弱酸性條 件下能形成生物堿鹽，易溶于水；弱堿則需在較強(qiáng)酸性條件下形成生物堿鹽而溶于水。 ② 成鹽后，弱堿鹽在弱堿條件下即可轉(zhuǎn)變成游離生物堿，易溶于親脂性有機(jī)溶劑；強(qiáng)堿鹽則需在較強(qiáng)堿性條件下轉(zhuǎn)變成游離生物堿，溶于親脂性有機(jī)溶劑。 總堿中各生物堿的堿性不同，可用 pH梯度萃取法進(jìn)行分離。 具體方法有兩種： ① 總生物堿溶于親脂性有機(jī)溶劑， pH由高至低依次萃取，生物堿可按堿性由強(qiáng)至弱先后成鹽依次被萃取出而分離 ② 總生物堿溶于酸水，逐步加堿使 pH值由低至高分離。 對于堿性有差別的兩種生物堿，可采用調(diào) pH后 簡單萃取法分離。如從洋金花的乙醇浸出液中分離莨菪堿和東莨菪堿，利用二者堿性差別進(jìn)行分離。 莨菪堿（ ） 東莨菪堿（ ） 游離生物堿：如苦參中苦參堿和氧化苦參堿的分離。 （氧化苦參堿的極性大于苦參堿，難溶于乙醚） 漢防己中漢防己甲素和漢防己乙素的分離。 （漢防己甲素的極性小于漢防己乙素，可溶于冷苯） 生物堿鹽：如麻黃中分離麻黃堿、偽麻黃堿。 （在草酸中溶解度不同，麻黃堿溶解度小于偽麻黃堿） 官能團(tuán)進(jìn)行分離（兩性） 含羧基的生物堿能與碳酸氫鈉生成羧酸鹽而溶于水，可與其他堿分離； 酚性生物堿的酚羥基具有弱酸性，可與氫氧化鈉溶液生成鹽溶于水，而與其他非酚性生物堿分離。如在阿片生物堿中，嗎啡具酚羥基而可待因無酚羥基，可用 5%氫氧化鈉分離。 內(nèi)酯或內(nèi)酰胺結(jié)構(gòu)的生物堿可在堿性水液中加熱開環(huán)生成溶于水的羧酸鹽而與其他生物堿分離，在酸性下又環(huán)合成原生物堿而沉淀，如喜樹堿。 （ 1）吸附柱色譜 常用氧化鋁或硅膠作為吸附劑，有時(shí)也用纖維素、聚酰胺等。以苯、氯仿、乙醚 等親脂性有機(jī)溶劑或以其為主的混合溶劑系統(tǒng)作洗脫劑。 （ 2）分配柱色譜 對某些結(jié)構(gòu)特別相近的生物堿，可采用分配色譜法。 如三尖杉中的抗癌生物堿三尖杉酯堿和高三尖杉酯堿的分離，兩者結(jié)構(gòu)僅差一個(gè)亞甲基。具體方法是以硅膠為支持劑，以 ， ，首先洗脫的是高三尖杉酯堿，中間部分是二者的混合物，最后部分是三尖杉酯堿。 R1：三尖杉酯堿 R2：高三尖杉酯堿 （ HPLC） 優(yōu)點(diǎn)： 分離效能好、靈敏度高、分析速度快 。 色譜柱類型：硅膠吸附色譜柱， C18反相色譜柱。 此外，制備型薄層色譜、干柱色譜、中壓或低壓柱色譜等也常用于分離生物堿。 分離原理 要點(diǎn) 利用堿性差異分離 pH梯度萃取 利用溶解度差異分離 苦參（乙醚）、防己（冷苯）、麻黃（草酸） 利用特殊官 能團(tuán)分離 羧基、酚羥基、內(nèi)酯與內(nèi)酰胺 利用色譜法分離 吸附色譜、分配色譜 高效液相色譜法 最佳選擇題 分離漢防己甲素和漢防己乙素的原理（ ） [答疑編號 5630020205] 【正確答案】 D（漢防己甲素的極性小于漢防己乙素，可溶于冷苯） 三、水溶性生物堿（季銨堿）的分離 （一）沉淀法 實(shí)驗(yàn)室常用雷氏銨鹽試劑純化季銨堿。 （二）溶劑法 利用水溶性生物堿能夠溶于極性較大而又能與水分層的有機(jī)溶劑（如正丁醇、異戊醇或氯仿 甲醇的混合溶劑等）的性質(zhì)，用這類溶劑與含這類生物堿的堿水液反復(fù)萃取，使水溶性生物堿與強(qiáng)親水性的雜質(zhì)得以分離。 四、生物堿的色譜檢識 常用 方法：薄層色譜法、紙色譜法、高效液相色譜法和氣相色譜法 （一）薄層色譜法 （ 1）吸附劑 吸附劑常用硅膠和氧化鋁。 硅膠適用注意：硅膠為酸性吸附劑，易造成拖尾或復(fù)斑，影響分離效果?？稍谕夸伖枘z薄層時(shí)加稀堿（ ～ ）或緩沖溶液，制成堿性薄板；或使色譜過程在堿性條件下進(jìn)行，即在展開劑中加入少量堿性試劑，如二乙胺、氨水等。 氧化鋁本身顯弱堿性，不經(jīng)處理便可用于分離和檢識生物堿，一般較常用，特別適合分離親脂性較強(qiáng)的生物堿。 （ 2）展開劑 展 開劑系統(tǒng)多以親脂性溶劑為主，一般以三氯甲烷為基本溶劑。 若 Rf值太小，加入適量甲醇、丙酮等極性較大的溶劑； 若 Rf值太大，加入適量苯、環(huán)己烷等極性較小的溶劑。 在展開劑中加入少量堿性試劑，如二乙胺、氨水等，可改善分離效果。 特別適用于分離有些結(jié)構(gòu)十分相近的生物堿。 （ 1）支持劑與固定相： 通常選用硅膠或纖維素粉作支持劑，以甲酰胺或水為固定相。 甲酰胺適合分離弱極性或中等極性的生物堿；水適合分離水溶性生物堿。 （ 2）展開劑： 分離脂溶性生物堿，應(yīng)以親脂 性有機(jī)溶劑作展開劑，如三氯甲烷 苯（ 1： 1）等； 分離水溶性生物堿，則應(yīng)以親水性的溶劑作展開劑，如 BAW系統(tǒng)（正丁醇 乙酸 水 =4： 1： 5，上層）。 在配制流動相時(shí)，需用固定相飽和。 ① 有色生物堿可直接觀察斑點(diǎn)； ② 具有熒光的生物堿在紫外光下顯示熒光斑點(diǎn)； ③ 大多生物堿的薄層色譜可用改良碘化鉍鉀試劑顯色，顯橘紅色斑點(diǎn)。（如碘化鉍鉀不顯色，可選用其他特殊顯色劑） （二）紙色譜 生物堿的紙色譜多為正相分配色譜。 ① 水：可用濾紙本身含有的 6%～ 7%水分，也可用水浸潤濾紙； ② 甲酰胺：將甲酰胺溶于丙酮，再將濾紙置于其中浸濕片刻，取出，揮去丙酮即可； ③ 酸性緩沖液（也稱多緩沖紙色譜）：將不同 pH值的酸性緩沖液自起始線由高到低間隔 2cm 左右的距離涂布若干個(gè)緩沖液帶，晾干即可使用。 以水作固定相的紙色譜，宜用親水性溶劑系統(tǒng)作展開劑，如 BAW系統(tǒng)（正丁醇 乙酸 水 =4： 1： 5，上層）； 以甲酰胺和酸性緩沖液作固定相的紙色譜，多以苯、三氯甲烷、乙酸乙酯等親脂性有機(jī)溶劑為主組成的溶劑系統(tǒng)作展開劑。 展開劑在使用前也需用固定相液 飽和。 紙色譜所用的顯色劑與薄層色譜法基本相同，但含硫酸的顯色劑不宜使用。 （三）高效液相色譜 生物堿的高效液相分析可采用分配色譜法、吸附色譜法、離子交換色譜法等。其中以分配色譜法中的反相色譜法應(yīng)用較多。 根據(jù)生物堿的性質(zhì)和不同的色譜方法可選擇相應(yīng)的固定相。 由于生物堿具堿性，使用的流動相以偏堿性為好。 如用 HPLC法分離分析罌粟殼中的嗎啡、可待因和罌粟堿時(shí)，采用 Waters μ Bondapak C18色譜柱，流動相為 %乙酸銨 1%三乙胺 甲醇（ 49： 1： 50） ,檢測波長 230