沙門(mén)菌檢驗(yàn)技術(shù)和方法(編輯修改稿)
2025-09-25 11:46 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 BS）：含有煌綠、亞硫酸鉍能抑制大腸桿菌、變形桿菌和革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng)，但對(duì)傷寒、副傷寒等沙門(mén)菌的生長(zhǎng)無(wú)影響。傷寒桿菌及其他沙門(mén)菌能利用葡萄糖將亞硫酸鉍還原成硫酸鉍，形成黑色菌落周?chē)@有黑色和棕色的環(huán)，對(duì)光觀察可見(jiàn)有金屬光澤。該培養(yǎng)基制備過(guò)程不宜過(guò)分加熱，以免降低其選擇性，應(yīng)在臨用時(shí)配制，超過(guò) 48h不宜使用。 ? 沙門(mén)菌的菌落形態(tài)：產(chǎn) H2S的菌落為黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色。菌落周?chē)囵B(yǎng)基可呈黑色或棕色，有些不產(chǎn) H2S的菌落，形成灰綠的菌落，周?chē)囵B(yǎng)基不變。 注：此培養(yǎng)基在制作過(guò)程中過(guò)分加熱可使培養(yǎng)基的選擇性降低，與 TTB或 SC合用可獲得更高的檢出率。 沙門(mén)菌的分離培養(yǎng)基 ? HE瓊脂：在保證細(xì)菌所需營(yíng)養(yǎng)的基礎(chǔ)上，加入了一些抑制劑，如：膽鹽、檸檬酸鹽、去氧膽酸鈉等，可抑制某些腸道致病菌和革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng)，但對(duì)革蘭氏陰性的腸道致病菌則無(wú)抑制作用。 ? 沙門(mén)菌在 HE瓊脂上的菌落形態(tài)：藍(lán)綠色或藍(lán)色，多數(shù)菌株產(chǎn) H2S，中心呈黑色或幾乎全黑色。 沙門(mén)菌的分離培養(yǎng)基 ? XLD瓊脂：培養(yǎng)基中含有去氧膽酸鈉作指示劑，在該濃度下的去氧膽酸鈉也同時(shí)作為大腸埃希氏菌的抑制劑 ，而不影響沙門(mén)菌屬和志賀菌屬的生長(zhǎng)。 ? XLD培養(yǎng)基分離沙門(mén)菌和志賀菌的敏感性超過(guò)了傳統(tǒng)的培養(yǎng)基，如： EMB、 SS、 BS。因這些培養(yǎng)基尚有抑制志賀菌屬生長(zhǎng)的潛在因素，故本培養(yǎng)基是分離鑒定沙門(mén)菌及志賀菌屬的可靠培養(yǎng)基。在國(guó)外廣泛使用。 分離培養(yǎng)中的注意要點(diǎn) ? 非典型的沙門(mén)氏菌菌落形態(tài)：不存在典型的或可疑的沙門(mén)氏菌菌落時(shí)，按如下步驟檢驗(yàn)非典型的沙門(mén)氏菌菌落。 ? HE和 XLD瓊脂：非典型的沙門(mén)氏菌在 HE和XLD瓊脂上呈黃色菌落，帶或不帶黑色中心。 HE和 XLD平板經(jīng) 24177。 2小時(shí)培養(yǎng)后，沒(méi)有典型的沙門(mén)氏菌菌落，則挑取 2個(gè)或更多個(gè)非典型的沙門(mén)氏菌菌落。 ? BS瓊脂：某些非典型菌株產(chǎn)生綠色菌落，其周?chē)囵B(yǎng)基稍微或不呈暗色。如果 BS平板培養(yǎng) 24177。 2小時(shí)后，沒(méi)有出現(xiàn)典型菌落，則不挑取任何菌落，讓平板繼續(xù)培養(yǎng) 24177。 2小時(shí)。如果經(jīng) 48177。 2小時(shí)培養(yǎng)后，仍沒(méi)有典型或可疑的菌落出現(xiàn)，則挑取 2個(gè)或更多個(gè)非典型的菌落。 沙門(mén)菌顯色培養(yǎng)基 ? 沙門(mén)菌顯色培養(yǎng)基主要用于快速篩選、分離沙門(mén)菌。其基本原理：利用沙門(mén)菌特異性酶與顯色基團(tuán)的特有反應(yīng)，使色原游離出來(lái)，沙門(mén)菌在培養(yǎng)基上呈紫色或紫紅色。而大腸桿菌等其他腸道桿菌呈藍(lán)綠色。 色原 特定結(jié)合物 色原＋特定結(jié)合物 沙門(mén)菌辛酸脂酶 無(wú)色 顯色 游離 可疑菌落的生化鑒定 ? 自選擇性瓊脂平板（至少 2種選擇性平板）上直接挑取 2個(gè)以上可疑菌落，分別接種三糖鐵瓊脂 (TSI)。 ? TSI的主要成分：蛋白胨、乳糖、蔗糖、葡萄糖、硫酸亞鐵銨、硫代硫酸鈉、酚紅、瓊脂。 ? 在 TSI瓊脂中有 2個(gè)指示劑體系： ? 酚紅 :在堿性環(huán)境中呈紅色；在酸性環(huán)境中呈黃色。 ? 硫酸亞鐵銨：是硫化氫的指示劑，可與硫化氫反應(yīng)生成硫化鐵呈黑色。硫代硫酸鈉可防止硫化氫氧化形成 SS基而影響反應(yīng)。 沙門(mén)菌在 TSI瓊脂上的反應(yīng) 斜面 底層 產(chǎn)氣 H2S 可能的菌屬和種 – + +/– + 沙門(mén)菌屬、弗勞地氏檸檬酸桿菌、變形桿菌屬、緩慢愛(ài)德華氏菌 + + +/– + 沙門(mén)菌、弗勞地氏檸檬酸桿菌、普通變形桿菌 – + – – 傷寒沙門(mén)菌、雞沙門(mén)菌、志賀菌屬、大腸埃希氏菌、蜂窩哈夫尼亞菌、摩根氏菌、普羅菲登斯菌屬 – + + – 沙門(mén)菌屬、大腸埃希氏菌、蜂窩哈夫尼亞菌、摩根氏菌、普羅菲登斯菌屬 + – + – +/– – – – 非沙門(mén)菌 賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn) ? 賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基：蛋白胨、酵母浸膏、葡萄糖、溴麝香草酚藍(lán)（紫）。 ? 原理：細(xì)菌使氨基酸脫羧，產(chǎn)生胺類(lèi)，使培養(yǎng)基變堿，顏色不改變。 ? 沙門(mén)菌的反應(yīng)：陽(yáng)性。 ? 意義：檸檬酸桿菌、志賀菌 均為陰 性；埃希氏菌不定。 注：本試驗(yàn)的陽(yáng)性反應(yīng)為培養(yǎng)基不改變顏色 ,而培養(yǎng)基變黃色者為陰性反應(yīng)。本試驗(yàn)一定要設(shè)空白對(duì)照。培養(yǎng)基需用液體石蠟封 蓋，阻止空氣的氧化作用。 靛基質(zhì)試驗(yàn) ? 靛基質(zhì)試驗(yàn)的培養(yǎng)基：蛋白胨水。 ? 原理：細(xì)菌分解蛋白胨中色氨酸，生成靛基質(zhì)，與對(duì)二氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而呈紅色。 ? 沙門(mén)菌的反應(yīng)：可以陽(yáng)性或陰性反應(yīng)。 尿素酶試驗(yàn) ? 尿素培養(yǎng)基：蛋白胨、葡萄糖、酚紅、氯化鈉、磷酸二氫鉀、尿素， 。 ? 原理：含尿素酶細(xì)菌能分解尿素，產(chǎn)生大量的氨，使培養(yǎng)基呈堿性，指示劑變紅。 ? 沙門(mén)菌的反應(yīng)：陰性。 氰化鉀試驗(yàn) ? 氰化鉀試驗(yàn)培養(yǎng)基：蛋白胨、磷酸鹽緩沖對(duì)、氯化鈉、氰化鉀。 ? 原理：氰化鉀是劇毒藥物，可抑制某些細(xì)菌的呼吸酶系統(tǒng)，使這些酶失去活性，細(xì)菌的生長(zhǎng)因此受到抑制。而某些細(xì)菌可對(duì)氰化鉀產(chǎn)生抗性，能在氰化鉀培養(yǎng)中生長(zhǎng)。本試驗(yàn)常用于沙門(mén)菌與檸檬酸桿菌的鑒定。 ? 沙門(mén)菌生長(zhǎng)情況：陰性（不生長(zhǎng)）。 ? 注：本試驗(yàn)必需設(shè)置對(duì)照管（不加氰化鉀），若對(duì)照管細(xì)菌生長(zhǎng)良好，試驗(yàn)管細(xì)菌不生長(zhǎng)，可判定為陰性。若對(duì)照管與試驗(yàn)管均無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，則應(yīng)重復(fù)試驗(yàn)。試驗(yàn)失敗的主要原因是封口不嚴(yán)，氰化鉀逐漸分解，生成氫氰酸氣體逸出，以致藥物濃度降低細(xì)菌生長(zhǎng)，呈假陽(yáng)性反應(yīng)。 沙門(mén)菌生化鑒定培養(yǎng)基 β半乳糖苷酶 (ONPG)試驗(yàn) ? β半乳糖苷 (ONPG)培養(yǎng)基：蛋白胨、ONPG。 ? 原理：大腸桿菌含有 β半乳糖苷酶，能分解 ONPG，使培養(yǎng)基呈黃色。 ? 沙門(mén)菌的反應(yīng)：陰性。 注：本試驗(yàn)主要用于不產(chǎn) H2S的沙門(mén)菌與大腸桿菌的判定 沙門(mén)菌生化鑒定的主要試驗(yàn)項(xiàng)目 ? 糖發(fā)酵試驗(yàn)：三糖鐵瓊脂 (葡萄糖、乳糖、蔗糖 )、甘露醇、山梨醇、衛(wèi)茅醇、水楊苷、ONPG。 ? 氨基酸和蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)：靛基質(zhì)、賴(lài)氨酸脫羧酶、尿素酶。 ? 碳源和氮源利用試驗(yàn)：丙二酸鹽。 ? 其他生化試驗(yàn)：氰化鉀。 沙門(mén)菌在 API 20E的典型反應(yīng) 第 1位數(shù) 第 2位數(shù) 第 3位數(shù) 第 4位數(shù) 第 5位數(shù) 第 6位數(shù) 第 7位數(shù) 結(jié)果判
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