【文章內(nèi)容簡介】 逸出 。 由于玻璃可能破碎而釋放感染性物質(zhì)并傷害操作者 ， 建議使用塑料容器 ， 尤其是聚四氟乙烯 (po1ytetranuoroe thylene， PTFE)容器 。 ? 4． 使用勻漿器 、 搖床和超聲處理器時 ， 應(yīng)該用一個結(jié)實透明的塑料箱覆蓋設(shè)備 ， 并在用完后消毒 。 可能的話 ， 這些儀器可在生物安全柜內(nèi)覆蓋塑料罩進行操作 。 ? 5． 操作結(jié)束后 ， 應(yīng)在生物安全柜內(nèi)打開容器 。 ? 6． 應(yīng)對使用超聲處理器的人員提供聽力保護 。 來自 生物安全實驗室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 組織研磨器的使用 ? 1． 使用玻璃研磨器時應(yīng)戴手套 ， 并用一塊具有吸收性的軟物包住研磨器 。 塑料 (聚四氟乙烯 )研磨器更加安全 。 ? 2． 操作和打開組織研磨器時應(yīng)當在生物安全柜內(nèi)進行 。 來自 生物安全實驗室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 冰箱與冷柜的維護和使用 ? 1． 冰箱 、 低溫冷柜和干冰柜應(yīng)當定期除霜和清潔 ，應(yīng)清理出所有在儲存過程中破碎的安瓿和試管等物品 。 清理時應(yīng)戴厚橡膠手套并進行面部防護 ， 清理后要對內(nèi)表面進行消毒 。 ? 2． 儲存在冰箱內(nèi)的所有容器應(yīng)當清楚地標明內(nèi)裝物品的學(xué)名 、 儲存日期和儲存者的姓名 。 未標明的或廢舊物品應(yīng)當高壓滅菌并丟棄 。 ? 3． 應(yīng)當保存一份凍存物品的清單 。 ? 4．除非采用有效防爆措施，否則冰箱內(nèi)不能放置易燃溶液并冰箱門上應(yīng)明確標示。 來自 生物安全實驗室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 裝有凍干感染性物質(zhì)安瓿的開啟 ? 當打開裝有凍干物的安瓿時必須小心 ， 因為其內(nèi)部可能處于負壓 ， 瞬間進入的空氣可能使一些物質(zhì)擴散進入空氣 。 安瓿應(yīng)該在生物安全柜內(nèi)打開 ，建議按下列步驟打開安瓿： ? 1． 首先清除安瓿外表面的污染 。 ? 2． 如果管內(nèi)有棉花或纖維塞 ， 可以在管上靠近棉花或纖維塞的中部銼一痕跡 。 ? 3． 用一團酒精浸泡的棉花將安瓿包起來以保護雙手 ，然后手持安瓿從標記的銼痕處打開 。 ? 4． 將頂部小心移去并按污染物處理 。 ? 5． 如果塞子仍然在安瓿上 ， 用消毒鑷子除去 。 ? 6．緩慢向安瓿中加入液體來重懸凍干物，避免出現(xiàn)泡沫。 來自 生物安全實驗室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 裝有感染性物質(zhì)安瓿的儲存 ? 裝有感染性物質(zhì)的安瓿不能浸入液氮中 ， 因為這樣會造成有裂痕或密封不嚴的安瓿在取出時破碎或爆炸 。 如果需要低溫保存 ， 安瓿應(yīng)當儲存在液氮上面的氣相中 。 此外 ， 感染性物質(zhì)應(yīng)儲存在低溫冰柜或干冰中 。 當從冷凍儲存器中取出安瓿時 ， 實驗室工作人員應(yīng)當進行眼睛和手的防護 。 以這種方式儲存的安瓿在取出時應(yīng)對外表面進行消毒 。 來自 生物安全實驗室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 樣品的收集 、 標記和運輸 ? 1． 始終遵循常規(guī)預(yù)防措施；所有操作均要戴手套 ? 2． 應(yīng)當由受過培訓(xùn)的人員來采集病人或動物的血樣 。 ? 3． 在靜脈抽血時 ， 應(yīng)當使用一次性的安全的抽真空設(shè)備取代傳統(tǒng)的針頭和注射器 ， 因為這樣可以使血液直接采集到帶塞的運輸管和／或培養(yǎng)管中 。 用完后自動廢棄針頭 。 ? 4．裝有樣品的試管應(yīng)置于適當容器中運至實驗室，在實驗室內(nèi)部轉(zhuǎn)運也應(yīng)這樣說明書應(yīng)當分開放置在防水袋或信封內(nèi)。 來自 生物安全實驗室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 玻璃器皿和 “ 銳器 ” ? 1． 盡可能用塑料制品代替玻璃制品 。 只能用實驗室級別 (硼硅酸鹽 )的玻璃 ， 任何破碎或有裂痕的玻璃制品均應(yīng)丟棄 。 ? 2． 不能將皮下注射針作為移液管使用 。 可以使用鈍頭導(dǎo)管 。 來自 生物安全實驗室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 用于顯微觀察的薄膜和涂片 ? 用于顯微觀察的血液 、 唾液和糞便樣品在固定和染色時 ， 并不必殺死涂片上的所有微生物和病毒 。應(yīng)當用鑷子拿取這些東西 ， 恰當儲存 ， 并經(jīng)清除污染和／或高壓滅菌后再丟棄 。 ? 自動化儀器 (超聲處理器 、 渦旋混合器 ) ? 1． 為了避免液滴和氣溶膠的擴散 ， 這些儀器應(yīng)采用封閉型的 。 ? 2． 排出物應(yīng)當收集在封閉的容器內(nèi)進一步高壓滅菌和／或廢棄 。 ? 3，在每一步完成后應(yīng)根據(jù)操作指南對儀器進行消毒。 來自 生物安全實驗室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 組織 ? 1． 組織樣品應(yīng)當采用福爾馬林固定 。 小塊樣品 ， 如針頭活檢樣品 ， 能夠在幾個小時內(nèi)固定和消毒 ， 但是較大樣品則可能需要幾天時間 。 ? 2．應(yīng)當避免冰凍切片。如果必須進行冰凍切片，應(yīng)當罩住冰凍機，操作者要戴安全防護罩 (面具 )。清除污染時，儀器的溫度要升至 20~C。 來自 生物安全實驗室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 生物安全實驗室消毒與滅活 ? 消毒和滅菌的基本常識對于實驗室生物安全是至關(guān)重要的。生物安全中關(guān)于清除污染的特殊要求要根據(jù)實驗工作的類型和所操作感染性物質(zhì)的特性來決定。因此，有必要利用已知的普通信息來確立更具體的和標準化的程序，以滿足某些特殊實驗室中各種不同生物危害水平的需求。 來自 生物安全實驗室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 清除局部環(huán)境的污染 ? 需要聯(lián)合應(yīng)用液體和氣體消毒劑來清除實驗室空間 、 用具和設(shè)備的污染 。 清除表面污染時可以使用次氯酸鈉 (Na0C1)溶液；含有 1％ 有效氯的溶液適于普通的環(huán)境衛(wèi)生設(shè)備 ， 但是當處理高危環(huán)境時 ， 建議使用高濃度 (5g／ L)溶液 。 用于清除環(huán)境污染時 ， 含有 3％ 過氧化氫的溶液也可以作為漂白劑的代用品 ?？梢酝ㄟ^加熱多聚甲醛或煮沸福爾馬林所產(chǎn)生的甲醛蒸氣熏蒸來清除房間和儀器的污染 。 產(chǎn)生甲醛蒸氣 。 前 ， 房間的所有開口 (如門窗等 )都應(yīng)用密封帶或類似物加以密封 。 熏蒸應(yīng)當在室溫不低于 21℃ 且相對濕度 70 ％ 的條件下進行清除污染時氣體需要與物體表面至少接觸 8小時 。 熏蒸后 ， 該區(qū)域必須徹底通風后才能允許人員進入 。 在通風之前需要進入房間時 ， 必須戴適當?shù)姆蓝久婢?。 可 以采用氣態(tài)的碳酸氫銨來中和甲醛 。 已有報道 ， 可采用過氧化氫溶液的氣霧熏蒸污染的空間 ， 但對此還需要進一步的研究 。 ? 注：甲醛是一種危險和有刺激性的氣體，并懷疑有致癌性。應(yīng)使用具有供氣系統(tǒng)的全面罩式防毒面具。操作時應(yīng)當采用“ 雙人 ” 制。 來自 生物安全實驗室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 生物安全柜污染的清除 ? 清除 I級和 Ⅱ 級生物安全柜的污染時 ， 應(yīng)當將適量的多聚甲醛 (空氣中的終濃度達到 0． 8％ )放在電熱板或電熱盤上 (在生物安全柜外進行控制 )。 然后在生物安全柜內(nèi)放置第二個放有比多聚甲醛多 10 ％的碳酸氫銨的加熱板或盤 。 第二個盤上覆蓋一個能夠從遠處將其移走的蓋子 (如連接一個能夠從生物安全柜外拉動的繩子 )， 從而盡量減少對甲醛氣體的提前中和 。 如果相對濕度低于 70 ％ ， 在使用強力膠帶[如 “ 管道密封膠帶 ” (ducttape)]密封前部封閉板前 ， 還要在安全柜內(nèi)部放置一個開口的盛有熱水的容器 。 如果前部沒有封閉板 ， 則可以用重型塑料布(heavy gaugeplastic， heeting)粘貼覆蓋在前部以保證氣體不會泄漏進入房間 。 來自 生物安全實驗室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 打開多聚甲醛盤的加熱開關(guān)， 1小時后或多聚甲醛完全蒸發(fā)后關(guān)閉。讓生物安全柜靜置過夜。移去第二個盤子的蓋后打開加熱開關(guān)，讓碳酸氫銨揮發(fā)。然后，關(guān)閉開關(guān)并啟動安全柜讓碳酸氫銨氣體循環(huán) 1小時。移去前封閉板 (或塑料布 )后就可以使用生物安全柜了。 來自 生物安全實驗室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 洗手／清除手部污染 ? 接觸生物危害性材料時 ， 必須戴合適的手套 。 但是這并不能代替實驗室人員需要經(jīng)常地 、 徹底地洗手 。接觸過生物危害性材料和動物后 、 使用過衛(wèi)生間后 、離開實驗室前以及吃東西前都必須洗手 。 來自 生物安全實驗室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 大多數(shù)情況下 ， 用普通的肥皂和水徹底沖洗對于清除手部污染就足夠了 。 但在高度危險的情況下 ， 建議使用殺菌肥皂 。 手要完全抹上肥皂 ， 搓洗至少 10秒鐘 ， 用干凈水沖洗后再用干凈的紙巾或毛巾擦干(如果有條件 ， 也推薦使用暖風干手器 )。 ? 推薦使用腳控或肘控的水龍頭 。 如果沒有安裝 ， 應(yīng)使用紙巾或毛巾關(guān)上水龍頭以防止再度污染洗凈的手 。 如上所述 ， 如果沒有條件徹底洗手或洗手不方便 ， ? 應(yīng)該用酒精擦手來清除雙手的輕度污染 來自 生物安全實驗室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 加熱滅菌