【正文】 相對增長率 Nt—— 處理 t時刻的細(xì)胞密度 (個 / mL) N0 —— 起始密度 (個 / mL)， t—— 培養(yǎng)時間 ρ—— 生長阻礙率 四環(huán)素對藍(lán)藻的急性毒性研究 15 實驗方法 使用血球計數(shù)板，計數(shù)一定濃度下，藻細(xì)胞個數(shù)。我們的課題四環(huán)素對藍(lán)藻的急性毒性研究在理論上是能夠得到支持的。本實驗所有實驗器皿均須滅菌操作。7H2O g/L 94 鉬酸鈉 Na2MoO4H2O、 C12H22FeN3O1C10H14N2O8Na2 課題研究 的 意義 和目的 無論是抗生素還是銅綠微囊藻水華 引起的水體污染 都是當(dāng)今水生態(tài)環(huán)境面臨的重要問題，而兩者 普遍存在于水體中，共存的可能性很大。大型湖泊、河流中藍(lán)藻釋放的藻毒素可被大量水體稀釋，但大規(guī)模藍(lán)藻水華溶解時，就會使毒素達(dá)到較高濃度，造成潛在危害。 銅綠微囊藻概述 銅綠微囊藻是常見的水華藍(lán)藻，屬原核生物界、真細(xì)菌、藍(lán)藻門、藍(lán)藻綱、色球藻目、微囊藻科、微囊藻屬。供口服。L1）和 mg多項研究表明，四環(huán)素類抗生素可能通過抑制葉綠體合酶的活性，從而對植物生長產(chǎn)生抑制作用，影響植物發(fā)芽率和根的生長，這與四環(huán)素對微藻的毒性研究結(jié)果相似。 四環(huán)素類藥物對微藻的毒性主要體現(xiàn)在抑制微藻蛋白質(zhì)合成和葉綠體的生成最終造成對微藻生長的抑制。k1。到 20xx 年，全國 畜禽糞便的排放量將達(dá) 45 億噸。 一般來說，抗生素包括人用和獸用兩類。 Wasberg, M., Electrochemical detection of microcystins, cyanobacterial peptide hepatotoxins, following highperformance liquid. 六、進(jìn)度安排：（設(shè)計或論文各階段的要求，時間安排） 1～ 4 周： 文獻(xiàn)綜述撰寫，英文翻譯。 Boynton, A. L., Characterization of natural toxins with inhibitory activity against serine thereonine protein phosphatases. Toxicon 1994, 32 (3), 339350. 8. Bogtalli, S.。 FN SPON Routledge: New York, 1999. 2. Galey, F. D.。 化合物的染毒及抗生素殘留分析。 抗生素液相檢測方法基本建立。 Watanabe, M. F.。 Watanabe, M. F.。 關(guān)鍵詞： 四環(huán)素、銅綠微囊藻、急性毒性、抑制、降解 Acute toxicity of tetracycline on Microcystis aeruginosa Abstract: Tetracycline antibiotics are widely used in the world. This is one of the largest types of antibiotics, which can remain in the environment and bring potential environmental risks. In this study, the ecotoxicity of tetracyclines on cyanobacteria Microcystis aeruginosa was studied. Growth inhibition of this kind of algae exposure to tetracycline was measured. pH values, protein content, were also studied to determine the acute toxicity of tetracycline on M. aeruginosa. The results showed that at low concentration 1 mg/L tetracycline can stimulate the growth of M. aeruginosa, and in prolonged exposure to high concentrations of tetracycline, M. aeruginosa growth was suppressed. This paper also detected the degradation of tetracycline in M. aeruginosa culture medium by high performance liquid chromatography (HPLC). The results showed that the reaction is a firstorder kiics reaction, Ln (tetracycline concentration) and the reaction time showed linear relationship. And discussed the future research directions, aimed to provide valuable reference for the ecological risk assessment of the antibiotics. KeyWords: Tetracycline。同時，農(nóng)業(yè)濫用抗生素正在導(dǎo)致超級病毒的傳播，非傳染性疾病和免疫性疾病大大增加了，人類的免疫系統(tǒng)正在衰退，而抗生素的濫用也是造成新型疾病增加的原因之一。 在密集型養(yǎng)魚場，最終有 70%~80%藥物流入環(huán)境之中 ［ 5］ 。雖然，人們對藥物及個人防護(hù)品污染物（ PPCPs）等新型污 染物造成的生態(tài)環(huán)境問題給予了越來越多的關(guān)注，而作為 PPCPs 這一大類污染物中的四環(huán)素類藥物的環(huán)境污染方面的研究還相對較少 ［ 10～ 13］ ，尤其是其污染機(jī)理及生態(tài)毒性的研究還處于研究的起始階段。 此外，四環(huán)素類藥物能夠抑制銅綠微囊藻和綠藻的蛋白質(zhì)合成。 Wollenberger 等根據(jù)水蚤急性毒性試驗的標(biāo)準(zhǔn)協(xié)議（ ISO， 1989b）測定了包括四環(huán)素類抗生素在內(nèi)的 9 種抗生素對水蚤的急性毒性，并根據(jù) 48 h 急性毒性試驗 EC50值進(jìn)行排序。C （分解）。多年來由于四環(huán)素類的廣泛應(yīng)用，臨床常見病原菌包括葡萄球菌等革蘭陽性菌及腸桿菌屬等革蘭陰性桿菌對四環(huán)素多數(shù)耐藥，并且，同類品種之間存在交叉耐藥。 藻類水華 在許多富營養(yǎng)化水體中，由于藍(lán)藻的增殖，常常會形成大量的水華，這不但影響水質(zhì)，且在某些時期具毒性。廣東省典型供水水庫和淡水湖泊微囊藻毒素分布廣泛，毒素組成以 MCRR 為主，水庫微囊藻毒素含量在 0～ μg/L。所以，通過測定藻類的數(shù)量就可以評價有毒有害污染物對藻類生長的影響及對整個水生生態(tài)系統(tǒng)的綜合環(huán)境效應(yīng)。 表 21 配置 BG11培養(yǎng)液 編號 成分 化學(xué)式 單位含量 含量 1 硝酸鈉 NaNO3 g/L 2 磷酸氫二鉀 K2HPO4 四環(huán)素對藍(lán)藻的急性毒性研究 12 高壓蒸氣 滅菌 滅菌是指用物理或化學(xué)的方法殺滅全部微生物，包括致病和非致病微生物以及 芽孢 ，使之達(dá)到無菌保障水平。?C，光照在 20xx～ 4000 Lx 連續(xù)靜止培養(yǎng)。中間的平臺較寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半，每個半邊上面各有一個計數(shù)區(qū)，一個計數(shù)區(qū)分成 25 個大方格（大方格之間用雙線分開），而每個大方格又分成 16 個小方格 共計 由 400 個小方格組成。 考馬斯亮藍(lán)染色法測定蛋白質(zhì)含量 實驗原理 考馬斯亮藍(lán) G250 是一種甲基取代的三苯基甲烷，分子中磺酸基的藍(lán)色染料，在 465 nm 處有最大吸收值。測定吸光度時，先從 100 mL 三角燒瓶中取出 30 mL，移至燒杯，在細(xì)胞破碎儀下破碎 10 分鐘（破碎 3 秒，停 3 秒），隨后取經(jīng)破碎的藻液于離心機(jī)下離心（ 3000r/m），取離心后上清液 1 mL 于 10 mL 試管中加入 5 mL 考馬斯亮藍(lán)，震蕩均勻，并靜置 20 分鐘，隨后在 595 nm 下測定吸光度。實驗時，按濃度從小到大依次進(jìn)樣，分別求出儀器的檢測限和四環(huán)素液相的標(biāo)準(zhǔn)曲線。 四環(huán)素對藍(lán)藻的急性毒性研究 20 4. 結(jié)果與討論 銅綠微囊藻細(xì)胞數(shù)與吸光度的關(guān)系 使用紫外可見分光光度計測得藻液吸光度，并使用血球計數(shù)板和光學(xué)顯微鏡計量相對應(yīng)吸光度下銅綠微囊藻細(xì)胞的個數(shù)，匯總兩次實驗數(shù)據(jù)， 并 篩選 。這種互作用力通常是 分析物 及 分析管柱 之間的一種非共價性質(zhì)。由于蛋白質(zhì) —— 考馬斯亮藍(lán)復(fù)合物在 595 nm 處的光吸收遠(yuǎn)高于考馬斯亮藍(lán)在 465 nm 處的光吸收，因此，可大大地提高蛋白質(zhì)的測定靈敏度。蓋上蓋玻片后，計數(shù)區(qū)的高度為 mm，所以每個計數(shù)區(qū)的體積為 mm3，每個小方格的體積為 1/4000 mm3。 白天黑夜 時間 比為 12h:12h。 高壓蒸氣滅菌法是利用適當(dāng)溫度和壓力的飽和水蒸氣加熱殺滅微生物的一種方法。7H2O g/L 4 二水合氯化鈣 CaCl2 四環(huán)素對藍(lán)藻的急性毒性研究 9 2. 實驗條件及預(yù)實驗 實驗條件 實驗儀器 BXM30R 立式壓力蒸汽滅菌鍋（上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠） JY962N 超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司） RJTGL16B 高速離心機(jī)（無錫瑞江分析儀器有限公司） FA1004 電子天平（上海?？惦娮觾x器廠） PHS3CpH 計（上海佑科儀器儀表有限公司） 超聲儀（上海寧商超聲儀器有限公司） TU1810 紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司） SPXGB150 光照培養(yǎng)箱（上海博泰實驗設(shè)備有限公司） BCD108S（康佳冷藏冷凍箱） 電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司） Dragonlab TopPette 移液槍 1000 μL、 200 μL LabTech 高效液相色譜儀 UV600 紫外可見檢測器（北京萊伯泰科儀器有限公司） 針頭過濾器（郭店桃園醫(yī)療化工儀器廠，海寧市） 實驗材料 10 mL、 25 mL 容量瓶各 1 個 50 mL、 100 mL 三角燒瓶 各 15 個 250 mL、 500 mL 三角燒瓶各 2 個 10 mL 試管 20 支 100 mL 燒杯 4 個 、 250 mL、 500 ml 燒杯各一個 50 mL、 100 mL、 250 mL 量筒各 1 個 4 L 培養(yǎng)液儲備瓶 1 個 石英比色皿 2 對 100 μL微量進(jìn)樣針 1 支 200 μL、 1000 μL移液槍頭若干 mL、 mL 離心管若干 一次性無菌注射器若干 稱量紙、擦鏡紙若干 四環(huán)素對藍(lán)藻的急性毒性研究 10 圖 21 實驗室部分儀器設(shè)備 四環(huán)素對藍(lán)藻的急性毒性研究 11 實驗藥品 純水、 無水乙醇（分析純）、甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純）。 四環(huán)素對藍(lán)藻的急性毒性研究 8 飲用水的微囊藻毒素污染 除天然水體及水庫源水中普遍檢測出 MC 外，飲用水也存在 MC 污染。野生動物、家畜及家禽飲用了含有毒藻及藻毒的水后，會引起中毒甚至死亡，人飲用后也會出現(xiàn)中毒現(xiàn)象，因此當(dāng)作為飲用水源的湖泊、水庫和河流中出現(xiàn)藍(lán)藻水華時，則應(yīng) 四環(huán)素對藍(lán)藻的急性毒性研究 7 引起注意。 藍(lán)藻 、銅綠微囊藻 藍(lán)藻概述 藍(lán)藻和具原核的細(xì)菌等一起，單立為原核生物界。 密度： g/cm3； 沸點： 176。結(jié)果表明，土霉素的 48h EC50超過 1000 mgL1［ 19］ ，土霉素能抑制等鞭金藻葉綠素含量的生成，并且藥量越大抑制作用越強(qiáng)；對類胡蘿卜素的生成起促進(jìn)作用，藥量越大則類胡蘿卜素含量越多。 四環(huán)素類抗生素的生態(tài)毒性 四環(huán)素類抗生素對微生物的生態(tài)毒性 由于四環(huán)素類抗生素主要用來抑制菌類物質(zhì)的生長發(fā)育，因此近年來研究者們對于四環(huán)素對細(xì)菌、真菌和微藻等的生態(tài)毒性做了廣泛研究。有報道顯示：土霉素在綿羊糞便中殘留 21%，金霉素在小公牛糞便中殘留 17%~75%［ 6］ 。因此，對于含有抗 生素的醫(yī)院污水或城市生活污水，無論是否經(jīng)過處理，只要實施排放，均可以導(dǎo)致對地表水、地下水以及農(nóng)田土壤環(huán)境的污染。 Acute toxicity。 Dahlem, A. M.。 Furusawa, M.。 掌握數(shù)據(jù)分析基本方法。 了解藻類的一般實驗室培養(yǎng)方法。 五、查閱文獻(xiàn)要求及主要的參考文獻(xiàn) 1. Chorus, I.。 Codispoti, B. A.。 Kincaid, B.。除從微生物培養(yǎng)液提取外，有些抗生素已能通過人工合成或半合成得到。然而，研究表明，抗生素藥物只有 15%可被吸收利用，大約 85%未被代謝而被直接排放至環(huán)境中。d1土霉素的量對 50 頭農(nóng)場喂養(yǎng)的西門塔爾牛進(jìn)行 5 d 口服實驗，此后對其糞肥中土霉素含量進(jìn)行測定。kg1［ 14］ 。試驗結(jié)果表明，大多數(shù)所測定的抗菌藥對銅