【正文】 相對(duì)增長(zhǎng)率 Nt—— 處理 t時(shí)刻的細(xì)胞密度 (個(gè) / mL) N0 —— 起始密度 (個(gè) / mL)， t—— 培養(yǎng)時(shí)間 ρ—— 生長(zhǎng)阻礙率 四環(huán)素對(duì)藍(lán)藻的急性毒性研究 15 實(shí)驗(yàn)方法 使用血球計(jì)數(shù)板，計(jì)數(shù)一定濃度下，藻細(xì)胞個(gè)數(shù)。我們的課題四環(huán)素對(duì)藍(lán)藻的急性毒性研究在理論上是能夠得到支持的。本實(shí)驗(yàn)所有實(shí)驗(yàn)器皿均須滅菌操作。7H2O g/L 94 鉬酸鈉 Na2MoO4H2O、 C12H22FeN3O1C10H14N2O8Na2 課題研究 的 意義 和目的 無(wú)論是抗生素還是銅綠微囊藻水華 引起的水體污染 都是當(dāng)今水生態(tài)環(huán)境面臨的重要問(wèn)題，而兩者 普遍存在于水體中，共存的可能性很大。大型湖泊、河流中藍(lán)藻釋放的藻毒素可被大量水體稀釋，但大規(guī)模藍(lán)藻水華溶解時(shí)，就會(huì)使毒素達(dá)到較高濃度，造成潛在危害。 銅綠微囊藻概述 銅綠微囊藻是常見(jiàn)的水華藍(lán)藻，屬原核生物界、真細(xì)菌、藍(lán)藻門(mén)、藍(lán)藻綱、色球藻目、微囊藻科、微囊藻屬。供口服。L1）和 mg多項(xiàng)研究表明，四環(huán)素類抗生素可能通過(guò)抑制葉綠體合酶的活性，從而對(duì)植物生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制作用，影響植物發(fā)芽率和根的生長(zhǎng)，這與四環(huán)素對(duì)微藻的毒性研究結(jié)果相似。 四環(huán)素類藥物對(duì)微藻的毒性主要體現(xiàn)在抑制微藻蛋白質(zhì)合成和葉綠體的生成最終造成對(duì)微藻生長(zhǎng)的抑制。k1。到 20xx 年，全國(guó) 畜禽糞便的排放量將達(dá) 45 億噸。 一般來(lái)說(shuō)，抗生素包括人用和獸用兩類。 Wasberg, M., Electrochemical detection of microcystins, cyanobacterial peptide hepatotoxins, following highperformance liquid. 六、進(jìn)度安排：（設(shè)計(jì)或論文各階段的要求，時(shí)間安排） 1～ 4 周： 文獻(xiàn)綜述撰寫(xiě)，英文翻譯。 Boynton, A. L., Characterization of natural toxins with inhibitory activity against serine thereonine protein phosphatases. Toxicon 1994, 32 (3), 339350. 8. Bogtalli, S.。 FN SPON Routledge: New York, 1999. 2. Galey, F. D.。 化合物的染毒及抗生素殘留分析。 抗生素液相檢測(cè)方法基本建立。 Watanabe, M. F.。 Watanabe, M. F.。 關(guān)鍵詞： 四環(huán)素、銅綠微囊藻、急性毒性、抑制、降解 Acute toxicity of tetracycline on Microcystis aeruginosa Abstract: Tetracycline antibiotics are widely used in the world. This is one of the largest types of antibiotics, which can remain in the environment and bring potential environmental risks. In this study, the ecotoxicity of tetracyclines on cyanobacteria Microcystis aeruginosa was studied. Growth inhibition of this kind of algae exposure to tetracycline was measured. pH values, protein content, were also studied to determine the acute toxicity of tetracycline on M. aeruginosa. The results showed that at low concentration 1 mg/L tetracycline can stimulate the growth of M. aeruginosa, and in prolonged exposure to high concentrations of tetracycline, M. aeruginosa growth was suppressed. This paper also detected the degradation of tetracycline in M. aeruginosa culture medium by high performance liquid chromatography (HPLC). The results showed that the reaction is a firstorder kiics reaction, Ln (tetracycline concentration) and the reaction time showed linear relationship. And discussed the future research directions, aimed to provide valuable reference for the ecological risk assessment of the antibiotics. KeyWords: Tetracycline。同時(shí)，農(nóng)業(yè)濫用抗生素正在導(dǎo)致超級(jí)病毒的傳播，非傳染性疾病和免疫性疾病大大增加了，人類的免疫系統(tǒng)正在衰退，而抗生素的濫用也是造成新型疾病增加的原因之一。 在密集型養(yǎng)魚(yú)場(chǎng)，最終有 70%~80%藥物流入環(huán)境之中 ［ 5］ 。雖然，人們對(duì)藥物及個(gè)人防護(hù)品污染物（ PPCPs）等新型污 染物造成的生態(tài)環(huán)境問(wèn)題給予了越來(lái)越多的關(guān)注，而作為 PPCPs 這一大類污染物中的四環(huán)素類藥物的環(huán)境污染方面的研究還相對(duì)較少 ［ 10～ 13］ ，尤其是其污染機(jī)理及生態(tài)毒性的研究還處于研究的起始階段。 此外，四環(huán)素類藥物能夠抑制銅綠微囊藻和綠藻的蛋白質(zhì)合成。 Wollenberger 等根據(jù)水蚤急性毒性試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)協(xié)議（ ISO， 1989b）測(cè)定了包括四環(huán)素類抗生素在內(nèi)的 9 種抗生素對(duì)水蚤的急性毒性，并根據(jù) 48 h 急性毒性試驗(yàn) EC50值進(jìn)行排序。C （分解）。多年來(lái)由于四環(huán)素類的廣泛應(yīng)用，臨床常見(jiàn)病原菌包括葡萄球菌等革蘭陽(yáng)性菌及腸桿菌屬等革蘭陰性桿菌對(duì)四環(huán)素多數(shù)耐藥，并且，同類品種之間存在交叉耐藥。 藻類水華 在許多富營(yíng)養(yǎng)化水體中，由于藍(lán)藻的增殖，常常會(huì)形成大量的水華，這不但影響水質(zhì)，且在某些時(shí)期具毒性。廣東省典型供水水庫(kù)和淡水湖泊微囊藻毒素分布廣泛，毒素組成以 MCRR 為主，水庫(kù)微囊藻毒素含量在 0～ μg/L。所以，通過(guò)測(cè)定藻類的數(shù)量就可以評(píng)價(jià)有毒有害污染物對(duì)藻類生長(zhǎng)的影響及對(duì)整個(gè)水生生態(tài)系統(tǒng)的綜合環(huán)境效應(yīng)。 表 21 配置 BG11培養(yǎng)液 編號(hào) 成分 化學(xué)式 單位含量 含量 1 硝酸鈉 NaNO3 g/L 2 磷酸氫二鉀 K2HPO4 四環(huán)素對(duì)藍(lán)藻的急性毒性研究 12 高壓蒸氣 滅菌 滅菌是指用物理或化學(xué)的方法殺滅全部微生物，包括致病和非致病微生物以及 芽孢 ，使之達(dá)到無(wú)菌保障水平。?C，光照在 20xx～ 4000 Lx 連續(xù)靜止培養(yǎng)。中間的平臺(tái)較寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半，每個(gè)半邊上面各有一個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)，一個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)分成 25 個(gè)大方格（大方格之間用雙線分開(kāi)），而每個(gè)大方格又分成 16 個(gè)小方格 共計(jì) 由 400 個(gè)小方格組成。 考馬斯亮藍(lán)染色法測(cè)定蛋白質(zhì)含量 實(shí)驗(yàn)原理 考馬斯亮藍(lán) G250 是一種甲基取代的三苯基甲烷，分子中磺酸基的藍(lán)色染料，在 465 nm 處有最大吸收值。測(cè)定吸光度時(shí)，先從 100 mL 三角燒瓶中取出 30 mL，移至燒杯，在細(xì)胞破碎儀下破碎 10 分鐘（破碎 3 秒，停 3 秒），隨后取經(jīng)破碎的藻液于離心機(jī)下離心（ 3000r/m），取離心后上清液 1 mL 于 10 mL 試管中加入 5 mL 考馬斯亮藍(lán)，震蕩均勻，并靜置 20 分鐘，隨后在 595 nm 下測(cè)定吸光度。實(shí)驗(yàn)時(shí)，按濃度從小到大依次進(jìn)樣，分別求出儀器的檢測(cè)限和四環(huán)素液相的標(biāo)準(zhǔn)曲線。 四環(huán)素對(duì)藍(lán)藻的急性毒性研究 20 4. 結(jié)果與討論 銅綠微囊藻細(xì)胞數(shù)與吸光度的關(guān)系 使用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)得藻液吸光度，并使用血球計(jì)數(shù)板和光學(xué)顯微鏡計(jì)量相對(duì)應(yīng)吸光度下銅綠微囊藻細(xì)胞的個(gè)數(shù)，匯總兩次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)， 并 篩選 。這種互作用力通常是 分析物 及 分析管柱 之間的一種非共價(jià)性質(zhì)。由于蛋白質(zhì) —— 考馬斯亮藍(lán)復(fù)合物在 595 nm 處的光吸收遠(yuǎn)高于考馬斯亮藍(lán)在 465 nm 處的光吸收，因此，可大大地提高蛋白質(zhì)的測(cè)定靈敏度。蓋上蓋玻片后，計(jì)數(shù)區(qū)的高度為 mm，所以每個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)的體積為 mm3，每個(gè)小方格的體積為 1/4000 mm3。 白天黑夜 時(shí)間 比為 12h:12h。 高壓蒸氣滅菌法是利用適當(dāng)溫度和壓力的飽和水蒸氣加熱殺滅微生物的一種方法。7H2O g/L 4 二水合氯化鈣 CaCl2 四環(huán)素對(duì)藍(lán)藻的急性毒性研究 9 2. 實(shí)驗(yàn)條件及預(yù)實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)條件 實(shí)驗(yàn)儀器 BXM30R 立式壓力蒸汽滅菌鍋（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠） JY962N 超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司） RJTGL16B 高速離心機(jī)（無(wú)錫瑞江分析儀器有限公司） FA1004 電子天平（上海?？惦娮觾x器廠） PHS3CpH 計(jì)（上海佑科儀器儀表有限公司） 超聲儀（上海寧商超聲儀器有限公司） TU1810 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司） SPXGB150 光照培養(yǎng)箱（上海博泰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司） BCD108S（康佳冷藏冷凍箱） 電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司） Dragonlab TopPette 移液槍 1000 μL、 200 μL LabTech 高效液相色譜儀 UV600 紫外可見(jiàn)檢測(cè)器（北京萊伯泰科儀器有限公司） 針頭過(guò)濾器（郭店桃園醫(yī)療化工儀器廠，海寧市） 實(shí)驗(yàn)材料 10 mL、 25 mL 容量瓶各 1 個(gè) 50 mL、 100 mL 三角燒瓶 各 15 個(gè) 250 mL、 500 mL 三角燒瓶各 2 個(gè) 10 mL 試管 20 支 100 mL 燒杯 4 個(gè) 、 250 mL、 500 ml 燒杯各一個(gè) 50 mL、 100 mL、 250 mL 量筒各 1 個(gè) 4 L 培養(yǎng)液儲(chǔ)備瓶 1 個(gè) 石英比色皿 2 對(duì) 100 μL微量進(jìn)樣針 1 支 200 μL、 1000 μL移液槍頭若干 mL、 mL 離心管若干 一次性無(wú)菌注射器若干 稱量紙、擦鏡紙若干 四環(huán)素對(duì)藍(lán)藻的急性毒性研究 10 圖 21 實(shí)驗(yàn)室部分儀器設(shè)備 四環(huán)素對(duì)藍(lán)藻的急性毒性研究 11 實(shí)驗(yàn)藥品 純水、 無(wú)水乙醇（分析純）、甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純）。 四環(huán)素對(duì)藍(lán)藻的急性毒性研究 8 飲用水的微囊藻毒素污染 除天然水體及水庫(kù)源水中普遍檢測(cè)出 MC 外，飲用水也存在 MC 污染。野生動(dòng)物、家畜及家禽飲用了含有毒藻及藻毒的水后，會(huì)引起中毒甚至死亡，人飲用后也會(huì)出現(xiàn)中毒現(xiàn)象，因此當(dāng)作為飲用水源的湖泊、水庫(kù)和河流中出現(xiàn)藍(lán)藻水華時(shí)，則應(yīng) 四環(huán)素對(duì)藍(lán)藻的急性毒性研究 7 引起注意。 藍(lán)藻 、銅綠微囊藻 藍(lán)藻概述 藍(lán)藻和具原核的細(xì)菌等一起，單立為原核生物界。 密度： g/cm3； 沸點(diǎn)： 176。結(jié)果表明，土霉素的 48h EC50超過(guò) 1000 mgL1［ 19］ ，土霉素能抑制等鞭金藻葉綠素含量的生成，并且藥量越大抑制作用越強(qiáng)；對(duì)類胡蘿卜素的生成起促進(jìn)作用，藥量越大則類胡蘿卜素含量越多。 四環(huán)素類抗生素的生態(tài)毒性 四環(huán)素類抗生素對(duì)微生物的生態(tài)毒性 由于四環(huán)素類抗生素主要用來(lái)抑制菌類物質(zhì)的生長(zhǎng)發(fā)育，因此近年來(lái)研究者們對(duì)于四環(huán)素對(duì)細(xì)菌、真菌和微藻等的生態(tài)毒性做了廣泛研究。有報(bào)道顯示：土霉素在綿羊糞便中殘留 21%，金霉素在小公牛糞便中殘留 17%~75%［ 6］ 。因此，對(duì)于含有抗 生素的醫(yī)院污水或城市生活污水，無(wú)論是否經(jīng)過(guò)處理，只要實(shí)施排放，均可以導(dǎo)致對(duì)地表水、地下水以及農(nóng)田土壤環(huán)境的污染。 Acute toxicity。 Dahlem, A. M.。 Furusawa, M.。 掌握數(shù)據(jù)分析基本方法。 了解藻類的一般實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)方法。 五、查閱文獻(xiàn)要求及主要的參考文獻(xiàn) 1. Chorus, I.。 Codispoti, B. A.。 Kincaid, B.。除從微生物培養(yǎng)液提取外，有些抗生素已能通過(guò)人工合成或半合成得到。然而，研究表明，抗生素藥物只有 15%可被吸收利用，大約 85%未被代謝而被直接排放至環(huán)境中。d1土霉素的量對(duì) 50 頭農(nóng)場(chǎng)喂養(yǎng)的西門(mén)塔爾牛進(jìn)行 5 d 口服實(shí)驗(yàn)，此后對(duì)其糞肥中土霉素含量進(jìn)行測(cè)定。kg1［ 14］ 。試驗(yàn)結(jié)果表明，大多數(shù)所測(cè)定的抗菌藥對(duì)銅