【正文】 如何盡量減少誤差．力求準(zhǔn)確?(2)某單位要求知道一種干酵母粉中的活菌存活率，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)1～2種可行的檢測(cè)方法。位于格線上的菌體一般只數(shù)上方和右邊線上的。若有污物，則需清洗，吹干后才能進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個(gè)大方格分成25個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格(圖15—2)；另一種是一個(gè)大方格分成16個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成25個(gè)小方格，但無(wú)論是哪一種規(guī)格的計(jì)數(shù)板，每一個(gè)大方格中的小方格都是400個(gè)。顯微鏡直接計(jì)數(shù)法的優(yōu)點(diǎn)是直觀、快速、操作簡(jiǎn)單。總之，測(cè)定微生物生長(zhǎng)量的方法很多，各有優(yōu)缺點(diǎn)，工作中應(yīng)根據(jù)具體情況要求加以選擇。實(shí)驗(yàn)中的部分思想對(duì)未來(lái)的科研工作尤為重要，比如每一步都要設(shè)立空白對(duì)照組，在實(shí)驗(yàn)結(jié)果中做出比較討論，這在未來(lái)的自我進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中，這種思想的培養(yǎng)尤為重要。各種實(shí)驗(yàn)用具要嚴(yán)格高溫滅菌，防止用具本身污染?，F(xiàn)代信息技術(shù)的使用能力在微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)中，有很多特殊的、特定的實(shí)驗(yàn)，如有毒有害物質(zhì)參與且不易排污的實(shí)驗(yàn)、不易操作或難以成功的實(shí)驗(yàn)、需要反復(fù)觀察的實(shí)驗(yàn)、反應(yīng)慢導(dǎo)致單位課時(shí)中難以完成的實(shí)驗(yàn)等。眾所周知，微生物學(xué)是一門實(shí)驗(yàn)與理論高度結(jié)合的科目，是一門以實(shí)驗(yàn)為基礎(chǔ)與生活生產(chǎn)息息相關(guān)的課程。當(dāng)在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)與預(yù)料過(guò)程所不符，那么必定是過(guò)程中出現(xiàn)錯(cuò)誤，而尋找并解決的這個(gè)過(guò)程是書(shū)本中無(wú)法給予的。尤其是微生物學(xué)這樣一種學(xué)科，動(dòng)手能力的強(qiáng)弱與知識(shí)的掌握其實(shí)是同等重要的。使用超凈工作臺(tái)時(shí)要嚴(yán)格紫外滅菌和打開(kāi)排風(fēng)扇，手和相關(guān)器材進(jìn)入操作臺(tái)前要用酒精仔細(xì)擦拭，清除表面的微生物。與實(shí)驗(yàn)操作相比，本學(xué)期的微生物學(xué)另一個(gè)重要的是學(xué)會(huì)團(tuán)隊(duì)的重要性，每個(gè)實(shí)驗(yàn)憑借一己之力是無(wú)法完成的，而一個(gè)團(tuán)隊(duì)就可以游刃有余。2．掌握使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)的方法。本實(shí)驗(yàn)以血球計(jì)數(shù)板為例進(jìn)行顯微鏡直接計(jì)數(shù)。設(shè)五個(gè)中方格中的總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為B，如果是25個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板，則1mL菌液中的總菌數(shù)=A/525104B=50000A4．顯微鏡計(jì)數(shù)加樣后靜止5min，然后將血細(xì)胞計(jì)數(shù)板置于顯微鏡載物臺(tái)上，先用低倍鏡找到計(jì)數(shù)室所在位置，然后換成高倍鏡進(jìn)行計(jì)數(shù)。5．清洗血細(xì)胞計(jì)數(shù)板使用完畢后，將血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在水龍頭用水沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。（四）操作步驟l．編號(hào)取無(wú)菌平皿9套，分別用記號(hào)筆標(biāo)明1010106。用此吸管吸取101菌液lmL，此即為100倍稀釋。待培養(yǎng)基凝固后，將平板倒置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。二者操作基本相同，所不同的是后者先將牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基融化后倒平板，待凝固后編號(hào)，并于37℃左右的溫箱中烘烤30min，或在超靜工作臺(tái)上適當(dāng)吹干，然后用無(wú)菌吸管吸取稀釋好的菌液對(duì)號(hào)接種于不同稀釋度編號(hào)的平板上，并盡快用無(wú)菌玻璃涂棒將菌液在平板上涂布均勻，平放于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上20～30min，使菌液滲入培養(yǎng)基表層內(nèi)，然后倒置37℃的恒溫箱中培養(yǎng)24～48h。然后，以樣品液所測(cè)得的光密度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出對(duì)應(yīng)的菌數(shù)。圖15—4 比濁法測(cè)定細(xì)胞濃度的原理（三）器材1．菌種 釀酒酵母培養(yǎng)液2．儀器或其他用具 721型分光光度計(jì)，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，顯微鏡，試管，吸水紙，無(wú)菌吸管，無(wú)菌生理鹽水等。各種操作條件必須與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)的相同，否則，測(cè)得值所換算的含菌數(shù)就不準(zhǔn)確。測(cè)定細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線，了解其生長(zhǎng)繁殖規(guī)律，這對(duì)人們根據(jù)不同的需要，有效地利用和控制細(xì)菌的生長(zhǎng)具有重要意義。圖15—6 直接用試管測(cè)OD值(四)操作步驟1．標(biāo)記取11支無(wú)菌大試管，用記號(hào)筆分別標(biāo)明培養(yǎng)時(shí)間，即0、1116和20h。該方法準(zhǔn)確度高、操作簡(jiǎn)便。結(jié)核菌素試驗(yàn)陰性者應(yīng)接種或補(bǔ)種卡介苗②作為嬰幼兒(尚未接種過(guò)卡介苗者)結(jié)核病的輔助診斷③在未接種卡介苗的人群中作結(jié)核桿菌感染的流行病學(xué)調(diào)查,了解人群自然感染率④測(cè)定腫瘤患者的細(xì)胞免疫功能：變形桿菌代替相應(yīng)的立克次體抗原進(jìn)行非特異性凝集反應(yīng)，檢測(cè)人類或動(dòng)物血清中有無(wú)相應(yīng)的抗體本質(zhì)：交叉凝集試驗(yàn)，立克次體病的輔助診斷：制片→涂片→干燥→固定→染色初染（結(jié)晶紫1min）→媒染（碘液1min）→（95%酒精 30sec）→復(fù)染（稀釋復(fù)紅30sec）→印干→油鏡鏡檢第四篇：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)考試題《微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》試題在進(jìn)行高壓蒸汽滅菌時(shí)，是否只要滅菌鍋壓力表到達(dá)所需的值時(shí)鍋內(nèi)就能獲得所需的滅菌溫度？為什么？在手提式高壓滅菌鍋的蓋上有哪些部件？它們各起什么作用？高壓蒸汽滅菌鍋的操作有哪幾個(gè)步驟？每一步驟應(yīng)注意哪些問(wèn)題？在微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常用于配制固體培養(yǎng)基的凝固劑是什么？它有哪些特性？如何使用？環(huán)境樣品梯度稀釋、涂布平板法分離微生物時(shí)，如何選擇不同稀釋梯度樣品的涂布順序？為什么？在革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)中，為什么會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性？如何避免？在革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)中，不經(jīng)復(fù)染這一步，能否區(qū)別革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌和革蘭氏陰性細(xì)菌？為什么？為何用計(jì)數(shù)板可以計(jì)得樣品中的總菌值？如何計(jì)算樣品中的菌體濃度？血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)時(shí)，計(jì)數(shù)室內(nèi)如有氣泡會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？如何避免產(chǎn)生氣泡？試分析血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法的誤差來(lái)源，并提出減少誤差的方法和措施。玻片凝集試驗(yàn)（1）、要求用傷寒診斷血清，采用玻片凝集試驗(yàn)的方法檢測(cè)待檢細(xì)菌是否為傷寒桿菌。（2）、要求各環(huán)節(jié)無(wú)菌操作正確。