【正文】 如何盡量減少誤差．力求準(zhǔn)確?(2)某單位要求知道一種干酵母粉中的活菌存活率，請設(shè)計1～2種可行的檢測方法。位于格線上的菌體一般只數(shù)上方和右邊線上的。若有污物，則需清洗，吹干后才能進(jìn)行計數(shù)。計數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個大方格分成25個中方格，而每個中方格又分成16個小方格(圖15—2)；另一種是一個大方格分成16個中方格，而每個中方格又分成25個小方格，但無論是哪一種規(guī)格的計數(shù)板，每一個大方格中的小方格都是400個。顯微鏡直接計數(shù)法的優(yōu)點是直觀、快速、操作簡單?？傊?，測定微生物生長量的方法很多，各有優(yōu)缺點，工作中應(yīng)根據(jù)具體情況要求加以選擇。實驗中的部分思想對未來的科研工作尤為重要，比如每一步都要設(shè)立空白對照組，在實驗結(jié)果中做出比較討論，這在未來的自我進(jìn)行的實驗設(shè)計中，這種思想的培養(yǎng)尤為重要。各種實驗用具要嚴(yán)格高溫滅菌，防止用具本身污染?，F(xiàn)代信息技術(shù)的使用能力在微生物學(xué)實驗學(xué)習(xí)中，有很多特殊的、特定的實驗，如有毒有害物質(zhì)參與且不易排污的實驗、不易操作或難以成功的實驗、需要反復(fù)觀察的實驗、反應(yīng)慢導(dǎo)致單位課時中難以完成的實驗等。眾所周知，微生物學(xué)是一門實驗與理論高度結(jié)合的科目，是一門以實驗為基礎(chǔ)與生活生產(chǎn)息息相關(guān)的課程。當(dāng)在試驗中發(fā)現(xiàn)與預(yù)料過程所不符，那么必定是過程中出現(xiàn)錯誤，而尋找并解決的這個過程是書本中無法給予的。尤其是微生物學(xué)這樣一種學(xué)科，動手能力的強弱與知識的掌握其實是同等重要的。使用超凈工作臺時要嚴(yán)格紫外滅菌和打開排風(fēng)扇，手和相關(guān)器材進(jìn)入操作臺前要用酒精仔細(xì)擦拭，清除表面的微生物。與實驗操作相比，本學(xué)期的微生物學(xué)另一個重要的是學(xué)會團(tuán)隊的重要性，每個實驗憑借一己之力是無法完成的，而一個團(tuán)隊就可以游刃有余。2．掌握使用血細(xì)胞計數(shù)板進(jìn)行微生物計數(shù)的方法。本實驗以血球計數(shù)板為例進(jìn)行顯微鏡直接計數(shù)。設(shè)五個中方格中的總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為B，如果是25個中方格的計數(shù)板，則1mL菌液中的總菌數(shù)=A/525104B=50000A4．顯微鏡計數(shù)加樣后靜止5min，然后將血細(xì)胞計數(shù)板置于顯微鏡載物臺上，先用低倍鏡找到計數(shù)室所在位置，然后換成高倍鏡進(jìn)行計數(shù)。5．清洗血細(xì)胞計數(shù)板使用完畢后，將血細(xì)胞計數(shù)板在水龍頭用水沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹風(fēng)機吹干。統(tǒng)計菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。（四）操作步驟l．編號取無菌平皿9套，分別用記號筆標(biāo)明1010106。用此吸管吸取101菌液lmL，此即為100倍稀釋。待培養(yǎng)基凝固后，將平板倒置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。二者操作基本相同，所不同的是后者先將牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基融化后倒平板，待凝固后編號，并于37℃左右的溫箱中烘烤30min，或在超靜工作臺上適當(dāng)吹干，然后用無菌吸管吸取稀釋好的菌液對號接種于不同稀釋度編號的平板上，并盡快用無菌玻璃涂棒將菌液在平板上涂布均勻，平放于實驗臺上20～30min，使菌液滲入培養(yǎng)基表層內(nèi)，然后倒置37℃的恒溫箱中培養(yǎng)24～48h。然后，以樣品液所測得的光密度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出對應(yīng)的菌數(shù)。圖15—4 比濁法測定細(xì)胞濃度的原理（三）器材1．菌種 釀酒酵母培養(yǎng)液2．儀器或其他用具 721型分光光度計，血細(xì)胞計數(shù)板，顯微鏡，試管，吸水紙，無菌吸管，無菌生理鹽水等。各種操作條件必須與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時的相同，否則，測得值所換算的含菌數(shù)就不準(zhǔn)確。測定細(xì)菌的生長曲線，了解其生長繁殖規(guī)律，這對人們根據(jù)不同的需要，有效地利用和控制細(xì)菌的生長具有重要意義。圖15—6 直接用試管測OD值(四)操作步驟1．標(biāo)記取11支無菌大試管，用記號筆分別標(biāo)明培養(yǎng)時間，即0、1116和20h。該方法準(zhǔn)確度高、操作簡便。結(jié)核菌素試驗陰性者應(yīng)接種或補種卡介苗②作為嬰幼兒(尚未接種過卡介苗者)結(jié)核病的輔助診斷③在未接種卡介苗的人群中作結(jié)核桿菌感染的流行病學(xué)調(diào)查,了解人群自然感染率④測定腫瘤患者的細(xì)胞免疫功能：變形桿菌代替相應(yīng)的立克次體抗原進(jìn)行非特異性凝集反應(yīng)，檢測人類或動物血清中有無相應(yīng)的抗體本質(zhì)：交叉凝集試驗，立克次體病的輔助診斷：制片→涂片→干燥→固定→染色初染（結(jié)晶紫1min）→媒染（碘液1min）→（95%酒精 30sec）→復(fù)染（稀釋復(fù)紅30sec）→印干→油鏡鏡檢第四篇：微生物學(xué)實驗考試題《微生物學(xué)實驗》試題在進(jìn)行高壓蒸汽滅菌時，是否只要滅菌鍋壓力表到達(dá)所需的值時鍋內(nèi)就能獲得所需的滅菌溫度？為什么？在手提式高壓滅菌鍋的蓋上有哪些部件？它們各起什么作用？高壓蒸汽滅菌鍋的操作有哪幾個步驟？每一步驟應(yīng)注意哪些問題？在微生物學(xué)實驗中，常用于配制固體培養(yǎng)基的凝固劑是什么？它有哪些特性？如何使用？環(huán)境樣品梯度稀釋、涂布平板法分離微生物時，如何選擇不同稀釋梯度樣品的涂布順序？為什么？在革蘭氏染色實驗中，為什么會出現(xiàn)假陽性和假陰性？如何避免？在革蘭氏染色實驗中，不經(jīng)復(fù)染這一步，能否區(qū)別革蘭氏陽性細(xì)菌和革蘭氏陰性細(xì)菌？為什么？為何用計數(shù)板可以計得樣品中的總菌值？如何計算樣品中的菌體濃度？血球計數(shù)板計數(shù)時，計數(shù)室內(nèi)如有氣泡會對結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？如何避免產(chǎn)生氣泡？試分析血球計數(shù)板計數(shù)法的誤差來源，并提出減少誤差的方法和措施。玻片凝集試驗（1）、要求用傷寒診斷血清，采用玻片凝集試驗的方法檢測待檢細(xì)菌是否為傷寒桿菌。（2）、要求各環(huán)節(jié)無菌操作正確。