transwell是檢測細胞侵襲能力的檢測方法(更新版)
【正文】 結果:改進后侵襲試驗定位準確,結果清晰。我做的時候改為giemsa染色,發(fā)現(xiàn)效果不錯,具體如下:,取出小室,用棉簽小心將膜上表面的細胞擦拭去除。l cell suspension to each cell culture insert8. Incubate the cell culture plate for 324 h in a cell culture incubator at 37176。細胞計數(shù)的準確性對結果影響很大,各組間最好不要分開計數(shù)。結晶紫也可以用33%醋酸溶解,再用酶標儀570nm檢測,同樣可以反應穿過細胞數(shù)因為基質(zhì)膠的厚度直接影響穿過膜的細胞數(shù),因此建議有條件的話還是買這類已經(jīng)鋪好膠的試劑盒,比較可靠。我們在實際使用的時候對穿過膜的細胞采用1%結晶紫染色,鏡下計數(shù)細胞數(shù)目。2。l culture medium with or without chemoattractant to each well of the cell culture plate7. Add 200 181。l of the TrypsinEDTA solution (now containing the migratory cells from each well into a black flat bottom 96 well plate15. Read fluorescence in a fluorescence plate reader at an excitation wavelength of 485 nm and an emission wavelength of 520 nm從第9步開始計數(shù)侵襲細胞時,這份說明書用的是熒光標記,但這種方法成本高而且繁瑣。VEGF 對人結腸癌HT229 細胞體外侵襲能力的影響。 加入無血清培養(yǎng)基,37℃,5 %CO2 培養(yǎng)24 h~48h,收集細胞培養(yǎng)上清。已鋪好Matrigel的transwell 培養(yǎng)板置于37℃可保存2 周。蘇木素染色1 min。在實驗時間上,用NIH3 T3細胞制備趨化因子做細胞體外侵襲實驗周期為1 周,而用胎牛血清作趨化因子做細胞體外侵襲實驗周期為2 d ,實驗時間節(jié)省了很多。在作不同濃度TNFα刺激下的HCCC29810 膽囊癌細胞體外侵襲能力的強弱實驗時我們將其置于盛有自來水的燒杯中,反復漂洗幾次,將多余蘇木素洗去再行脫
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