transwell是檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力的檢測(cè)方法(更新版)
【正文】 結(jié)果:改進(jìn)后侵襲試驗(yàn)定位準(zhǔn)確,結(jié)果清晰。我做的時(shí)候改為giemsa染色,發(fā)現(xiàn)效果不錯(cuò),具體如下:,取出小室,用棉簽小心將膜上表面的細(xì)胞擦拭去除。l cell suspension to each cell culture insert8. Incubate the cell culture plate for 324 h in a cell culture incubator at 37176。細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性對(duì)結(jié)果影響很大,各組間最好不要分開(kāi)計(jì)數(shù)。結(jié)晶紫也可以用33%醋酸溶解,再用酶標(biāo)儀570nm檢測(cè),同樣可以反應(yīng)穿過(guò)細(xì)胞數(shù)因?yàn)榛|(zhì)膠的厚度直接影響穿過(guò)膜的細(xì)胞數(shù),因此建議有條件的話(huà)還是買(mǎi)這類(lèi)已經(jīng)鋪好膠的試劑盒,比較可靠。我們?cè)趯?shí)際使用的時(shí)候?qū)Υ┻^(guò)膜的細(xì)胞采用1%結(jié)晶紫染色,鏡下計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)目。2。l culture medium with or without chemoattractant to each well of the cell culture plate7. Add 200 181。l of the TrypsinEDTA solution (now containing the migratory cells from each well into a black flat bottom 96 well plate15. Read fluorescence in a fluorescence plate reader at an excitation wavelength of 485 nm and an emission wavelength of 520 nm從第9步開(kāi)始計(jì)數(shù)侵襲細(xì)胞時(shí),這份說(shuō)明書(shū)用的是熒光標(biāo)記,但這種方法成本高而且繁瑣。VEGF 對(duì)人結(jié)腸癌HT229 細(xì)胞體外侵襲能力的影響。 加入無(wú)血清培養(yǎng)基,37℃,5 %CO2 培養(yǎng)24 h~48h,收集細(xì)胞培養(yǎng)上清。已鋪好Matrigel的transwell 培養(yǎng)板置于37℃可保存2 周。蘇木素染色1 min。在實(shí)驗(yàn)時(shí)間上,用NIH3 T3細(xì)胞制備趨化因子做細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)周期為1 周,而用胎牛血清作趨化因子做細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)周期為2 d ,實(shí)驗(yàn)時(shí)間節(jié)省了很多。在作不同濃度TNFα刺激下的HCCC29810 膽囊癌細(xì)胞體外侵襲能力的強(qiáng)弱實(shí)驗(yàn)時(shí)我們將其置于盛有自來(lái)水的燒杯中,反復(fù)漂洗幾次,將多余蘇木素洗去再行脫
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