【正文】 化因子做細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)效果是一樣的,兩組遷移的細(xì)胞數(shù)很接近。取上述稀釋的Matrigel 25 μl 加入transwell 板上室,覆蓋整個(gè)聚碳酯膜,37 ℃,30 min ,使Matrigel 聚合成膠。粉防己堿對(duì)HUVEC 人類臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞遷移能力的抑制作用。 24 well cell culture plate6. Add 600 181。該試劑盒對(duì)穿過膜的細(xì)胞進(jìn)行熒光染色,再用裂解液裂解細(xì)胞后檢測(cè)熒光值。盡量用同一密度的細(xì)胞懸液給予不同處理,保證各組細(xì)胞量一致3。 μm 濾膜過濾除菌。小心將聚碳酯膜自上室基底切取下來,置載玻片上中性樹脂封片。2. 5 脫水和透明時(shí)間脫水時(shí)間各為1 min ,在二甲苯中的時(shí)間不要過長,以2 min~3 min 為宜。2. 4 蘇木素染色上室浸泡在新蘇木素中的時(shí)間為1 min ,用過多次的蘇木素為2 min。用濕棉簽輕輕擦去Matrigel 凝膠和聚碳酯膜上表面的細(xì)胞。蘇木素染液,梯度乙醇,二甲苯溶液。l prewarmed TrypsinEDTA per well13. Incubate for 10 min in a cell culture incubator at 37176。最少也要保證在收樣的時(shí)候,上室內(nèi)還要有細(xì)胞存在。我們做的時(shí)候,%BSA的培養(yǎng)液,下室用5%血清的培養(yǎng)液,下室血清的濃度可根據(jù)細(xì)胞類型的不同進(jìn)行調(diào)整,如果細(xì)胞侵襲能力強(qiáng),可適當(dāng)降低血清濃度,否則可適當(dāng)提高血清濃度。l serumfree culture medium with 8 181。細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)主要應(yīng)用于各種細(xì)胞因子對(duì)惡性腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的影響及一些抑制血管生成的新藥研究,但在具體實(shí)驗(yàn)中獲得真實(shí)、最佳實(shí)驗(yàn)結(jié)果的圖像,并借以說明問題并非簡單。胎盤蘭拒染實(shí)驗(yàn),細(xì)胞活力需大于95 %。如果細(xì)胞活力小,就會(huì)造成細(xì)胞穿透能力下降,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。2. 6 細(xì)胞計(jì)數(shù)當(dāng)實(shí)驗(yàn)用的細(xì)胞為圓形時(shí),實(shí)驗(yàn)人員容易將聚碳酯膜上小孔誤認(rèn)為細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。注意事項(xiàng)2. 1NIH3T3 細(xì)胞制備的趨化因子與胎牛血清趨化因子是能使細(xì)胞產(chǎn)生趨化運(yùn)動(dòng)的一類細(xì)胞因子[2 ] 。20℃保存的Matrigel 在冰上保2℃~8℃過夜融化。(即染成紫紅色的點(diǎn),未著色的多為細(xì)胞碎屑計(jì)數(shù)并拍照留念Transwell細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)概述目的:總結(jié)并改進(jìn)細(xì)胞體