【正文】 據(jù)上清中釋放的51Cr的多少，可判斷(p224。bāo)活性測定（ADCC活性測定）,動物機(jī)體有些免疫細(xì)胞，通過抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC）殺傷靶細(xì)胞，如NK細(xì)胞、活化的T細(xì)胞、吞噬細(xì)胞等，這類細(xì)胞統(tǒng)稱為K細(xì)胞。,放射性測定(c232。ngyu225。由于MLC中淋巴細(xì)胞接受同種異型抗原的刺激而發(fā)生活化、增殖，產(chǎn)生種類眾多的細(xì)胞因子，促進(jìn)NK、LAK和CTL等殺傷細(xì)胞(x236。)，因此用抗體致敏的紅細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞混合，可見B淋巴細(xì)胞周圍粘附有紅細(xì)胞,第三十頁，共七十五頁。o),補(bǔ)體(bǔtǐ),第二十七頁，共七十五頁。)抗原 以配體識別受體,第二十三頁，共七十五頁。 目前常用的保護(hù)劑為二甲亞砜（DMSO）和甘油，它們對細(xì)胞無毒性，分子量小，溶解度大，易穿透細(xì)胞。,三、細(xì)胞(x236。浮懸在分層界面而不形成E花環(huán)的群則富含B細(xì)胞，而沉降在管底的形成E花環(huán)的細(xì)胞用低滲法處理，使圍繞細(xì)胞周圍的綿羊紅細(xì)胞快速裂解，則獲得純的T細(xì)胞。,MACS (陰性(yīnx236。li,流式細(xì)胞儀,第十一頁，共七十五頁。)單個(gè)核細(xì)胞懸液在通過尼龍毛柱時(shí)，B細(xì)胞、漿細(xì)胞、單核細(xì)胞和一些輔助細(xì)胞被選擇性粘附于尼龍毛上，而多數(shù)T細(xì)胞則通過尼龍毛柱，這是獲得富含T細(xì)胞群的有效方法。)分離法純淋巴細(xì)胞群的分離,貼壁法：將已制備的單個(gè)核細(xì)胞懸液傾于玻璃或塑料平皿或扁平小瓶中，移至37℃溫箱靜置1h左右(zuǒy242。吸取分層液液面的細(xì)胞，就可從外周血中分離到單個(gè)核細(xì)胞。,二、免疫細(xì)胞(x236。一、免疫細(xì)胞(x236。,第四頁，共七十五頁。ng)，離心后漂浮于分層液的液面上，也可有少部分細(xì)胞懸浮在分層液中。nf249。nh233。ngguāng)激活分離法（FACS）,第十頁，共七十五頁。MACS分選柱置于一個(gè)永久性磁場—MACS分選器中，可以將磁力增強(qiáng)1000倍，足以滯留(zh236。ng)選擇法）,N,S,第十三頁，共七十五頁。bāo)。,MHC I類(左)和Ⅱ類(右)分子(fēnzǐ)四聚體結(jié)構(gòu)示意圖,第十九頁，共七十五頁。 細(xì)胞復(fù)蘇的原理與方法：細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)速度要快，使之迅速通過細(xì)胞最易受損的－5～0℃，細(xì)胞仍能生長，活力受損不大。bi233。,補(bǔ)體(bǔtǐ)依賴的細(xì)胞毒試驗(yàn)（CDC）,染料(rǎnli224。h233。 混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)：混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)(MLC)或稱混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)常用于器官移植前的組織配型，以測定受體和供體主要組織相容性抗原(HLA抗原)相容的程度。ng),3HTdR,絲裂原（抗原(k224。bāo)功能測定,第三十六頁，共七十五頁。,K細(xì)胞(x236。nlǐ),將靶細(xì)胞用51Cr標(biāo)記后，再與特異性的IgG抗體結(jié)合，加入K細(xì)胞后即可發(fā)生ADCC效應(yīng)，引起靶細(xì)胞的溶解并釋放51Cr。 最大釋放對照管：標(biāo)記的靶細(xì)胞0.1ml 加蒸餾水 1.9ml（靶細(xì)胞會裂解，完全釋放同位素）。f224。在這里以檢測小鼠脾臟NK細(xì)胞活性為例，說明本試驗(yàn)方法。 37℃ 5%CO2培養(yǎng)18小時(shí)（NK細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞）； 每孔加終濃度為0.15%的胰酶和0.0125%DNA酶37℃處理30min（消化細(xì)胞和處理掉死亡(sǐw225。ngtǐ)形成試驗(yàn),第四十五頁，共七十五頁。)空斑試驗(yàn),第四十八頁，共七十五頁。)的吞噬細(xì)胞數(shù),吞噬指數(shù) =,吞噬細(xì)胞吞噬的總顆粒數(shù),計(jì)數(shù)的吞噬細(xì)胞數(shù),第五十一頁，共七十五頁。C孵育(fū y249。nɡ)的概念與原理,細(xì)胞(x236。表現(xiàn)為細(xì)胞 脹大，胞膜破裂，細(xì)胞內(nèi)容(n232。nɡ)的原理,凋亡信號——凋亡受體——信號傳導(dǎo)——凋亡基因啟動——編碼程序性死亡蛋白——細(xì)胞結(jié)構(gòu)(ji233。,細(xì)胞(x236。 ②細(xì)胞內(nèi)活性氧增多。而細(xì)胞壞死是一種被動的細(xì)胞死亡過程，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)常有RNA的損失。,第六十五頁，共七十五頁。晚期的凋亡細(xì)胞，清晰可見細(xì)胞核裂解產(chǎn)生的凋亡小體。利用這一特性，可通過DNA凝膠電泳來判定凋亡的發(fā)生和發(fā)展情況。,TUNEL染色：細(xì)胞核固縮有的呈碎片狀，不規(guī)則，大小不一致，呈棕黃色顆粒(kēl236。ndi224。意外事故(y236