20xx年醫(yī)學(xué)專題—mtt法檢測細胞活力精講(更新版)
【正文】 共二十四頁。 2）置37℃，5%CO2孵育24小時，倒置顯微鏡下觀察。jīng)物充分溶解。 2. 培養(yǎng)細胞：將培養(yǎng)板移入CO2孵箱中，在37℃、5% CO2及飽和濕度條件下培養(yǎng)，至細胞單層鋪滿孔底（96孔平底板，大約12h），加入濃度梯度的藥物。 在一定細胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶物形成的量與活細胞數(shù)成正比。)和意義,檢測細胞存活和生長情況(q237。d236。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的紫藍色結(jié)晶物，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數(shù)量，從而反映細胞的增殖情況。 （邊緣孔用PBS或空白培養(yǎng)基填充）。 6. 每孔加入100ul二甲基亞砜（置搖床上低速振蕩10min，使結(jié)晶(ji233。同時設(shè)置調(diào)零孔（培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜），對照孔（細胞、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜），每組設(shè)5個復(fù)孔。ow249。oji224?？梢砸詴r間為橫軸，光吸收值為縱軸繪制細胞生線曲線，專門公式求IC50（半數(shù)抑制濃度 ）。ow249。,第十三頁，共二十四頁。ng)保證MTT結(jié)晶形成酌量與細胞數(shù)呈的線性關(guān)系。在不同時間點的測定OD值，輸入(shūr249。,第十六頁，共二十四頁。由于試驗本底增加，會試驗敏感性。故而MTT細胞密度多采用10000/ml，100ul/孔。 注意細胞懸液一定要混勻，已避免細胞沉淀下來，導(dǎo)致(dǎozh236。)清除上清,直接吸出：加DMSO前要把液體吸掉，但培養(yǎng)液里的紫色結(jié)晶可能會吸去，可在這之前先用平板離心機離心96孔板，2000r，5分鐘，然后吸掉上清(如果是懸浮細胞，則推薦此法,懸浮細胞要離心2500rpm10min.且其做MTT最好用圓底型96孔板,清除上清時注意不要把下面的結(jié)晶顆粒吸掉,建議各孔吸棄150160ul即可)。guǒ)培養(yǎng)液沒棄干凈，空白孔也要留有等量的培養(yǎng)液，這樣在檢測時可以盡量去除培養(yǎng)液的影響，DMSO的量也可為100ul或150ul. 加了DMSO后用振蕩器輕輕振蕩5－10min, 時間控制盡量嚴格一點,放置時間長了會影響結(jié)果,值會偏大,且結(jié)果不可信. 加入DMSO溶解后盡快檢測。如果各個孔的孔間差異性特別(t232。ng)總結(jié),MTT法檢測細胞活力
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