20xx年醫(yī)學專題—免疫細胞的分離與檢測-全文預覽
【正文】 ml（靶細胞不裂解，但可自然釋放一定量的同位素）。,（2）方法(fāngfǎ),試驗管：效應細胞(淋巴細胞懸液) ，標記的靶細胞(Cr51標記的雞紅細胞)和亞凝集單位的抗體(兔抗雞紅細胞抗體)各0.1ml，加RPMI 1640完全培養(yǎng)基1.7ml（ADCC）。用計數(shù)儀分別檢測上清和細胞沉淀中的cpm，根據(jù)上清中釋放的51Cr的多少，可判斷(p224。僅介紹同位素釋放法。bāo)活性測定（ADCC活性測定）,動物機體有些免疫細胞，通過抗體依賴細胞介導的細胞毒作用（ADCC）殺傷靶細胞，如NK細胞、活化的T細胞、吞噬細胞等，這類細胞統(tǒng)稱為K細胞。n)原理示意,靶細胞,效應(xi224。,放射性測定(c232。bāo)介導的細胞(x236。ngyu225。,第三十四頁，共七十五頁。由于MLC中淋巴細胞接受同種異型抗原的刺激而發(fā)生活化、增殖，產(chǎn)生種類眾多的細胞因子，促進NK、LAK和CTL等殺傷細胞(x236。bāo)功能測定,一、轉(zhuǎn)化、增殖試驗 二、細胞毒試驗 三、抗體形成試驗 四、細胞吞噬(tūnsh236。)，因此用抗體致敏的紅細胞與B淋巴細胞混合，可見B淋巴細胞周圍粘附有紅細胞,第三十頁，共七十五頁。bāo),花環(huán)形成細胞,綿羊紅細胞,第二十八頁，共七十五頁。o),補體(bǔtǐ),第二十七頁，共七十五頁。,SmIg的熒光(y237。)抗原 以配體識別受體,第二十三頁，共七十五頁。,第二節(jié) 免疫細胞膜分子(fēnzǐ)的檢測,一、免疫細胞膜分子(fēnzǐ)檢測的原理與類型 二、免疫細胞膜分子的檢測方法,第二十二頁，共七十五頁。 目前常用的保護劑為二甲亞砜（DMSO）和甘油，它們對細胞無毒性，分子量小，溶解度大，易穿透細胞。貯存(zh249。,三、細胞(x236。,抗原(k224。浮懸在分層界面而不形成E花環(huán)的群則富含B細胞，而沉降在管底的形成E花環(huán)的細胞用低滲法處理，使圍繞細胞周圍的綿羊紅細胞快速裂解，則獲得純的T細胞。,其他(q237。,MACS (陰性(yīnx236。,第十二頁，共七十五頁。li （2）磁激活細胞分離術MACs：是一種特異性細胞分選技術，其高度特異性來自抗體對抗原的特異性識別。,流式細胞儀,第十一頁，共七十五頁。此法簡單易行，對細胞極少損害。)單個核細胞懸液在通過尼龍毛柱時，B細胞、漿細胞、單核細胞和一些輔助細胞被選擇性粘附于尼龍毛上，而多數(shù)T細胞則通過尼龍毛柱，這是獲得富含T細胞群的有效方法。,黏附(ni225。)分離法純淋巴細胞群的分離,貼壁法：將已制備的單個核細胞懸液傾于玻璃或塑料平皿或扁平小瓶中，移至37℃溫箱靜置1h左右(zuǒy242。xīn)后,稀釋(xīsh236。吸取分層液液面的細胞，就可從外周血中分離到單個核細胞。 紅細胞、粒細胞比重(bǐzh242。,二、免疫細胞(x236。,第二頁，共七十五頁。一、免疫細胞(x236。ng) 免疫細胞的膜分子特征 CD分子,第一頁，共七十五頁。,第四頁，共七十五頁。,密度梯度離心法,聚蔗糖(Ficoll)泛影葡胺(Urografin)(F/H)分層液 Ficoll是蔗糖的多聚體，呈中性，親水性高，平均分子量為400,000，當密度為1.2g/ml仍未超出正常生理性滲透壓，也不穿過生物膜。ng)，離心后漂浮于分層液的液面上，也可有少部分細胞懸浮在分層液中。xīn)前,離心(l237。nf249。,第八頁，共七十五頁。nh233。 吸附柱法：將單個核細胞懸液注入裝有玻璃纖維或葡聚糖凝膠SephadexG10的柱層中，凡有粘附能力的細胞絕大部分被吸附而粘滯在柱層中，從柱上洗脫下來的細胞主要是淋巴細胞。ngguāng)激活分離法（FACS）,第十頁，共七十五頁。ng)分離法,（1）磁鐵吸引法：利用單核細胞具有吞噬的特性，在單個核細胞懸液中加直徑為3μm的羰基鐵顆粒，置37℃溫箱內(nèi)短時旋轉(zhuǎn)搖動，待單核細胞充分吞噬羰基鐵顆粒后，用磁鐵將細胞吸至管底，上層液中含較純的淋巴細胞。MACS分選柱置于一個永久性磁場—MACS分選器中，可以將磁力增強1000倍，足以滯留(zh236。分選柱離開磁場，即可獲得被標記的細
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