20xx年醫(yī)學(xué)專題—動植物細(xì)胞器離心法分離-全文預(yù)覽
【正文】 鏡方法觀察葉綠體熒光現(xiàn)象。整個(gè)分離過程不宜過長。注意以上勻漿化及離心均控制在 0~4℃ 進(jìn)行。除去核和雜質(zhì)沉淀。)的盤內(nèi)，保持濕度，置溫箱 28℃ 于暗處培育 2~3d?！?實(shí)驗(yàn) (sh237。)。 50mmol/L的 TrisHcl緩沖液 ()配法： 甲基氨基甲烷 (Tris)溶液與 42mL ，加水稀釋至 100mL?！?材料 】玉米黃化幼苗 (水稻、高粱等幼苗均可 )。介質(zhì)中 醇代替。玉米 (y249。)，細(xì)胞核呈紫紅色，混雜的胞質(zhì)為淺藍(lán)色碎片。3．活性鑒定 (ji224。分離 (fēnl237。分離 (fēnl237。g224。)取肝，迅速用生理鹽水洗凈血水，用濾紙吸干水，稱取肝組織 2 g，剪碎；用預(yù)冷的 mol／ L蔗糖溶液洗滌數(shù)次。第九 頁 ，共二十六 頁 。2．器具 (q236。使用時(shí)吸出少量用 1／ 15mol／ L磷酸緩沖液作10~20倍稀釋。(3) 1％詹納斯綠 B(Janus green B)染液，稱取 50 mg詹納斯綠 B液溶于 5mL生理鹽水中，稍微加熱使之溶解后，過濾，即為 1％原液。ngy232。第五 頁 ，共二十六 頁 。n 詹納斯綠 B是一種活體染料，能對動、植物的細(xì)胞或組織在活體狀態(tài)下進(jìn)行無毒害的染色。第三 頁 ，共二十六 頁 。細(xì)胞器沉降先后順序是細(xì)胞核、線粒體、溶酶體和其他微體、核糖體和大分子。bāo)線粒體?！?原理 】n 線粒體（ mitochondria）是真核細(xì)胞特有的，司能量轉(zhuǎn)換的重要細(xì)胞器。實(shí)驗(yàn) 4 動植物細(xì)胞器分離 (fēnl237。2．對分離得到的線粒體進(jìn)行活性鑒定。n 將動植物組織制成勻漿，在適當(dāng)?shù)膽腋〗橘|(zhì)中用差速離心法可以分離細(xì)胞 (x236。依次增加離心力和離心時(shí)間，就能夠使這些顆粒按其大小、輕重分批沉降在離心管底部，從而分批收集。整個(gè)操作過程樣品要保持在 0℃ ~4℃ ，避免酶失活。第四 頁 ，共二十六 頁 。染色法可以顯示出活細(xì)胞內(nèi)的某種天然結(jié)構(gòu)存在的真實(shí)性，而不影響細(xì)胞的生命活動和產(chǎn)生任何物理、化學(xué)變化以至引起細(xì)胞的死亡?！?實(shí)驗(yàn)用品 】1．試劑：(1) mol／ L蔗糖 + mol／ L三羥甲基氨基甲烷 (Tris)一鹽酸緩沖液 (pH )： mol／ L三羥甲基氨基甲烷溶液 (r243。第六 頁 ，共二十六 頁 。先在 Giemsa粉中加少量甘油，然后在研缽內(nèi)研磨至無顆粒狀，再將剩余甘油倒入混勻， 56℃ 左右保溫 2 h，使其充分溶解，最后加甲醇混勻，成為 Giemsa原液，保存于棕色
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