transwell是檢測細胞侵襲能力的檢測方法(完整版)
【正文】 plate and replace it by 450 181。盡量用同一密度的細胞懸液給予不同處理,保證各組細胞量一致3。說明書該公司網(wǎng)上可以下載,對原理也有比較詳細的闡述,可以去查一下。該試劑盒對穿過膜的細胞進行熒光染色,再用裂解液裂解細胞后檢測熒光值。具體細胞密度需要自己摸索。 24 well cell culture plate6. Add 600 181。C and 5 % CO2, agitate the plate from time to time14. Discard the cell culture inserts and transfer 200 181。粉防己堿對HUVEC 人類臍靜脈內(nèi)皮細胞遷移能力的抑制作用。1. 2 趨化因子的制備取傳代第二天長勢良好的NIH3T3細胞,無血清培養(yǎng)基輕柔漂洗兩次。取上述稀釋的Matrigel 25 μl 加入transwell 板上室,覆蓋整個聚碳酯膜,37 ℃,30 min ,使Matrigel 聚合成膠。小心取出上室,用線拴住,并做好標記,用冰預冷的甲醇固定30 min。眾所周知,胎牛血清中有趨化因子,我們在不同濃度TNFα刺激下的HCCC29810 膽囊癌細胞體外侵襲能力的強弱實驗中發(fā)現(xiàn)用胎牛血清和用NIH3T3 細胞制備的趨化因子做細胞體外侵襲實驗效果是一樣的,兩組遷移的細胞數(shù)很接近。在研究粉防己堿對HUVEC 人類臍靜脈內(nèi)皮細胞遷移能力的抑制作用沒有將多余蘇木素洗去,直接脫水、透明,造成細胞圖片背景模糊,細胞不清楚。內(nèi)容總結(jié)
（1）Transwell是檢測細胞侵襲能力的檢測方法
我們所使用的是Chemicon公司的ECM554,基質(zhì)膠已經(jīng)包被好了,買來就可以用,很方便,而且我們算過,跟自己買膠來包被價格相差不大
（2）(即染成紫紅色的點,未著色的多為細胞碎屑計數(shù)并拍照留念
Transwell細胞體外侵襲實驗
概述
目的:總結(jié)并改進細胞體外侵襲實驗的操作經(jīng)驗
。這樣做出的細胞圖片背景干凈,細胞清楚。因此認為可以用胎牛血清來代替NIH3T3 細胞制備的趨化因子。梯度乙醇脫水(80 % ,95 % ,100 % ,二甲苯透明。1. 4Matrigel 侵襲實驗(Matrigel Invasion Assay刺激后的各組細胞用PBS 漂洗3 次。4 ℃,12 000rpm 離心,10 min ,取上清。
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