20xx年醫(yī)學(xué)專題—免疫細(xì)胞的分離與檢測(cè)(完整版)
【正文】 ，共七十五頁。bāo)的分離技術(shù),密度梯度離心法 黏附分離法 熒光(y237。bāo)的特征,免疫細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征 理化性狀 生物學(xué)特性(t232。)溶酶體,第三頁，共七十五頁。ng)小于或等于分層液比重(bǐzh242。,黏附(ni225。)分離法：淋巴細(xì)胞亞群的分離,尼龍毛法：混合(h249。,熒光(y237。MACS微珠是與高度特異性單克隆抗體相偶聯(lián)的超順磁化微粒。ngx236。bāo)分層液分離細(xì)胞(x236。n)肽MHC分子四聚體技術(shù),第十八頁，共七十五頁。n)在130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。)的原理與類型,以抗體識(shí)別(sh237。,SmIg的酶免疫檢測(cè)法,,第二十六頁，共七十五頁。,EA花環(huán)：B淋巴細(xì)胞表面有Fc受體，能與免疫球蛋白的Fc段結(jié)合(ji233。,淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)：刺激物分為非特異性（如植物血凝素、刀豆素A等）和特異性刺激因子（如抗原）；檢測(cè)方法為形態(tài)學(xué)檢測(cè)法和3HTdR摻入法及MTT法等。d236。)試驗(yàn),第三節(jié) 免疫細(xì)胞(x236。ng)細(xì)胞,分離上清,第三十七頁，共七十五頁。,（1）原理(yu225。 抗體對(duì)照管：標(biāo)記的靶細(xì)胞和亞凝集單位的抗體各0.1ml，加完全培養(yǎng)基1.8ml（未加效應(yīng)細(xì)胞）。n)和計(jì)算,51Cr實(shí)驗(yàn)釋放(sh236。 NK細(xì)胞活性測(cè)定多采用51Cr釋放法試驗(yàn)，其原理同細(xì)胞毒性T細(xì)胞試驗(yàn)中所采用的51Cr釋放法試驗(yàn)。,（2）方法 試驗(yàn)組孔：脾細(xì)胞懸液(淋巴細(xì)胞) ：標(biāo)記的靶細(xì)胞懸液100:1左右； 對(duì)照組：單純加標(biāo)記的靶細(xì)胞。n) 間接溶血空斑試驗(yàn) SPASRBC溶血空斑試驗(yàn),三、抗體(k224。nɡ xu232。 sh249。n)試驗(yàn),方法(fāngfǎ)：,抗凝血 + 硝基藍(lán)四氮唑（NBT），37。,一、細(xì)胞凋亡(diāo w225。 壞死（necrosis）：壞死是細(xì)胞受到強(qiáng)烈理化或生物因素作用引起細(xì)胞無序變化的死亡過程。,細(xì)胞凋亡(diāo w225。bāo)皺縮 （2）染色質(zhì)邊集 （3）凋亡小體出現(xiàn),第六十一頁，共七十五頁。 生化檢測(cè)法： ①胞漿內(nèi)Ca2+濃度升高。i)觀察法,（1）普通光鏡檢測(cè) HE染色 甲基綠派諾寧染色：細(xì)胞凋亡是一種細(xì)胞主動(dòng)死亡過程，需要有細(xì)胞內(nèi)蛋白酶的激活，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)常有mRNA表達(dá)的增強(qiáng)。)著染，而細(xì)胞質(zhì)無染色。)成塊，出現(xiàn)染色質(zhì)沿核膜內(nèi)側(cè)排列的核邊集現(xiàn)象。典型的細(xì)胞凋亡，在核內(nèi)形成大量200bp大小及其倍體的核苷酸片段，而非典型的凋亡細(xì)胞，由于核內(nèi)的DNA降解不完全，僅形成300~50kb的DNA大片。,（2）原位末端標(biāo)記法（TUNEL）,原理：利用標(biāo)記的dUTP，在TdT作用下結(jié)合DNA斷片的3’末端羥基，顯示斷鏈DNA，提示凋亡 方法：制備組織(zǔzhī)切片 標(biāo)記物結(jié)合 標(biāo)記物顯色 鏡檢,第七十一頁，共七十五頁。nɡ)百分率 =,上清液OD值,上清液OD值+沉淀(ch233。細(xì)胞在內(nèi)源性基因調(diào)控下發(fā)生的主動(dòng)死亡過程，也稱程序性死亡。,。 w224。n)OD值,第七十四頁，共七十五頁。)者為陽性細(xì)胞。 方法：提取(t237。,第六十七頁，共七十五頁。,（2）熒光顯微鏡檢測(cè)—溴化丙錠（PI）染色(rǎns232。根據(jù)(gēnj249。 ③質(zhì)膜通透性增高。bāo)凋亡,第六十二頁，共七十五頁。g242。ir243。bāo)凋亡的概念 細(xì)胞凋亡的原理 細(xì)胞凋亡的特點(diǎn),第五十五頁，共七十五頁。)25min。,NBT還原(hu225。,細(xì)胞吞噬(tūnsh236。,直接(zh237。ng)靶細(xì)胞釋放出來的放射性DNA）。用3HTdR摻入法，靶細(xì)胞為YAC1細(xì)胞株（小鼠淋巴瘤細(xì)胞系）。ng)率（%） 2(上清cpm—本底cpm) 100% (上清cpm本底cpm)＋( 沉淀cpm本底cpm) 51Cr 特異釋放率（%） 試驗(yàn)釋放率—自然釋放率 100% 最大釋放率－自然釋放率,第四十一頁，共七十五頁。 自然釋放管：標(biāo)記的靶細(xì)胞0.1ml ，加完全培養(yǎng)基1.9ml（靶細(xì)胞不裂解，但可自然釋放一定量的同位素）。用計(jì)數(shù)儀分別檢測(cè)上清和細(xì)胞沉淀中的cpm，根
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