【正文】 線性范圍時(shí)，要注意幾個(gè)重要的濃度：最低分析濃度或線性范圍的下限，不同的醫(yī)學(xué)決定水平值，最高分析濃度或線性范圍的上限。 4． 8 數(shù)據(jù)收集 數(shù)據(jù)可以很方便地記錄在工作 表或計(jì)算機(jī)表格程序中。 如當(dāng)檢測(cè)系統(tǒng)每測(cè)試需要反應(yīng)體積為 ，每濃度水平測(cè)量 2次，則至少需 考慮反應(yīng)死體積。不管用何種方法準(zhǔn)備低高值溶液，操作時(shí)要小心、謹(jǐn)慎。 當(dāng)建立方法的線性范圍時(shí)，需 7到 11個(gè)樣本，且 20%到 30%的樣本的濃度范圍超出預(yù)期的測(cè)量范圍，在可接受的線性響應(yīng)范圍內(nèi)，試圖舍去非線性點(diǎn)，可得到較寬的線性范圍。大量的常規(guī)臨床生化方法的定標(biāo)都是用水溶液材料，稱量法可用來確定靶值。 商業(yè)質(zhì)控物 /定標(biāo)物 /線性物質(zhì) 如果用到這些物質(zhì)，同病人標(biāo)本一樣進(jìn)行分析，可以用高值和低值標(biāo)本進(jìn)行混合得到中間濃度。 可能情況下，生產(chǎn)廠家在制定測(cè)量方法時(shí)要考慮到稀釋液的研究。 4． 3 可接受基質(zhì)體系 如果多種基質(zhì)標(biāo)本類型（如尿液、血清、腦脊液、全血等）在實(shí)驗(yàn)中用到，則應(yīng)評(píng)價(jià)每種基質(zhì)類型。在本評(píng)價(jià)實(shí) 驗(yàn)中，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)用移液管精確地吸取高低值濃度標(biāo)本配成的混合物的誤差比單個(gè)的稱量法配制不同濃度的標(biāo)本的誤差要小。 4． 1 標(biāo)本要求 線性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)要求有足夠量的標(biāo)本，要能滿足五個(gè)或更多濃度標(biāo)本的稀釋和測(cè)量。 多項(xiàng)式評(píng)價(jià)線性首先假設(shè)數(shù)據(jù)組呈非線性，所有數(shù)據(jù)點(diǎn)能用直線或曲線的數(shù)學(xué)方程來表達(dá)，隨機(jī)誤差在可接受范圍內(nèi)，則不論最適曲線是直線與否，都不影響（線性范圍內(nèi)）實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)點(diǎn)之間 其他濃度反應(yīng)狀況，并能得到連續(xù)可靠的結(jié)果 。 多項(xiàng)式回 歸 （ Polynomial regression） ： 不同 階 別的多次最小二乘法回歸 Y=a+b1X 一次多項(xiàng)式或者擬合直線 Y=a+b1X+b2X2 二次多項(xiàng)式 Y= a+b1X+b2X2+b3X3 三次多項(xiàng)式 重復(fù)性 （ Repeatability） ： (測(cè)量?jī)x器 )在相同的測(cè)量條件下，對(duì)同一樣品多次測(cè)量，測(cè)量?jī)x器重復(fù)給出十分相近示值的能力 ， 重復(fù)性可以用示值的離散特性定量表示。 線性范圍（ Linear range）： 在本指南中，指覆蓋檢測(cè)系統(tǒng)可接受線性關(guān)系的范圍，非線性誤差小于設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)。大多用濃度或活性表示。 但這種方法并不簡(jiǎn)單，用戶必須對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)（多用表格設(shè)計(jì)）進(jìn)行多次多項(xiàng)式回歸。 EP6A僅僅是指導(dǎo)用戶的一系列方法評(píng)價(jià)文件中的一種，請(qǐng)參照最近發(fā)布的 EP21文件 臨床實(shí)驗(yàn)方法的總分析誤差。 本指南要求實(shí)驗(yàn)室設(shè)定非線性誤差的目標(biāo)，只提供基本概念，沒有特定的要求。標(biāo)準(zhǔn)防護(hù)是一種新的防護(hù)指南，主要強(qiáng)調(diào)全身防護(hù)和與身體隔離的原則。這項(xiàng)政策的實(shí)行是一個(gè)發(fā)展和教育的過程，從一些新項(xiàng)目和現(xiàn)有文 件的修訂開始。精密度好時(shí)有利于判斷線性關(guān)系，精密度差時(shí)則不利于確定線性關(guān)系。回歸線由所有點(diǎn)所得，同時(shí)得到兩個(gè)方差即：由重復(fù)測(cè)量得到的樣本方差和由五個(gè)平均值的回歸線得到的均值方差。 曾有爭(zhēng)論，對(duì)于競(jìng)爭(zhēng)免疫法這類測(cè)量方法來說，線性不是必須的，因?yàn)闇y(cè)量方法的響應(yīng)物與濃度之間本來就 呈非線性關(guān)系。在下一層次文件出版時(shí)，這些評(píng)論或者修改了文件或者委員會(huì)在文件附錄中給以反饋。它應(yīng)該接受評(píng)審以保證其有效性。 指南 ： 通過一致化過程形成的文件，敘述了用于臨床檢驗(yàn)界的一般實(shí)驗(yàn)操作、方法或材料的規(guī)范。 NCCLS創(chuàng)建于 1968年并獲得美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)研究院的認(rèn)可。 敘述了文件敘述了實(shí)驗(yàn)室的程序、常規(guī)和參考方法以及評(píng)估方案可應(yīng)用于所有檢驗(yàn)學(xué)科。 “標(biāo)準(zhǔn) ”一詞，除了有特定含義外，還常用來指有關(guān)的 NCCLS文件。 3 NCCLS 標(biāo)準(zhǔn)和指南為良好實(shí)驗(yàn)室實(shí)踐（ GLP）提供了一個(gè)一致化的意見。 自愿參與 強(qiáng)烈希望各專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室科學(xué)家能自愿參加 NCCLS項(xiàng)目。臨床醫(yī)生清楚某分析物量與患者的病理生理過程并非呈線性，但是他們非常希望實(shí)驗(yàn)室報(bào)告的結(jié)果與該分析物的真實(shí)濃度水平或數(shù)量或活性是呈線性關(guān)系的。也可能（概率很?。┯捎跇颖痉讲詈艽螅ㄖ貜?fù)性差）而導(dǎo)致臨床上很重要的非線性得出相反結(jié)果。通過目測(cè)有助于判斷使用哪種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法和是否 具有線性關(guān)系，非線性度是否與預(yù)期的目標(biāo)相近。 Measurement procedure(測(cè)量程序 )代替 Analytical method(分析方法 )，指一系列用給定的方法完成的特殊操作。 關(guān)鍵詞： 允許偏差， 允許誤差，線性，基質(zhì)效應(yīng)，測(cè)量誤差，總誤差，不確定度 8 定量測(cè)量方法的線性評(píng)價(jià) 一種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，批準(zhǔn)的指南 1． 范圍 本文件提供一種建立、驗(yàn)證和 /或證實(shí)定量測(cè)量方法線性范圍的操作方法，它不能鑒別非線性的原因，用更多的樣本數(shù)，可以更可靠地判斷線性關(guān)系。本指南強(qiáng)調(diào)任何用戶有必要確定自己對(duì)線性程度的要求，或非線性的允許誤差范圍。操作方法大體相似，不同的僅僅是分析的濃度水平和重復(fù)的次數(shù)。 Tholen提出一種圖解連同回歸線性失擬誤差與目標(biāo)百分比對(duì)比的評(píng)價(jià)方法，對(duì)連續(xù)線性片斷進(jìn)行簡(jiǎn)單的斜率分析。 自變量 （ Input variable） ： 非獨(dú)立 變量 （ independence variable）， 與因變量 （ output variable） 相對(duì)應(yīng) ， 用 X表示 ， 它的值點(diǎn)在 X軸上。線性回歸其 因變量 與各 回歸參數(shù) 之間為 線性關(guān)系 。 檢測(cè)系統(tǒng)（ Testing system） ：包括測(cè)量過程的所有因素，如儀器、樣本、人員、試劑、輔助材料和操作等，也包括樣本類型、測(cè)試溫度、濕度等。這種方法由兩部分組成，第一部分是檢查非線性模型是否比線性模型更適合于數(shù)據(jù)組；第二部分是評(píng)價(jià)最適非線性模型與線性模型的差值（每個(gè)點(diǎn)）是否小于該方法所允許的偏差。生產(chǎn)商希望有更多的測(cè)量點(diǎn)（比預(yù)期的線性范圍寬 20～ 30%），這樣能檢測(cè)到 “拐點(diǎn) ”，就能確定更寬的線性范圍。 如果用到商品化的體外診斷試劑，需將廠家附上。 病人標(biāo)本 12 理想的樣本類型是病人的標(biāo)本，用接近于預(yù)期的可報(bào)告范圍上限和下限（或測(cè)量低限）的兩個(gè)分析濃度的標(biāo)本配成所有標(biāo)本濃度。如果含分析物的濃溶液加入病人標(biāo)本中時(shí)，加入量盡可能少（原則上少于總體積的 10%），并記錄溶劑。這些稀釋液要用最小量，并可以查證其可用。表 1為一些分析物的建議原料，儀器或試 劑廠家的建議也可能有助于確定合適的材料。驗(yàn)證線性范圍時(shí)， 高值和低值的測(cè)量均值要用到。下面為等間距分配各管濃度。 預(yù)期各管濃度分別為 40， 60， 80， 100和 120單位。 樣本測(cè)量時(shí)要隨機(jī)分布，在一個(gè)分析批內(nèi)或連續(xù)分析批中。詳細(xì)的結(jié)果評(píng)估必須逐步參照以下模式： 1) 檢查數(shù)據(jù)是否有極端明顯的差異 （或錯(cuò)誤） ，如果有分析或技術(shù)性問題被發(fā)現(xiàn)并得到糾正，則重復(fù)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程 。 4) 觀察每個(gè)濃度水平的測(cè)量值之間差值。出現(xiàn)離群值提示非線性或存在系統(tǒng)誤差。這種方法有兩部分：第一步判斷用非線性多項(xiàng)式擬合數(shù)據(jù)是否比線 性好；第二步是當(dāng)非線性多項(xiàng)式擬合數(shù)據(jù)點(diǎn)比線性好時(shí)，判斷最適 17 非線性模型與線性擬合之間的差值是否小于預(yù)先設(shè)定的該方法的允許偏差。 三次多項(xiàng)式 模型代表一種 “S”形反應(yīng)曲線，在測(cè)量范圍的兩端呈非線性。如果沒有非線性系數(shù) b2和b3（ p），則認(rèn)為存在線性關(guān)系，不精密度高時(shí)，則分析完成。 DLi僅表示 該 濃度水平處的偏差，而不反映點(diǎn)與點(diǎn)之間的偏差。如果不同濃度樣本間的 SDr大致相等，則不同濃度樣本間不精密度較恒 定，可用 SDr表示。如果 SDr超過設(shè)定目標(biāo)，則可能是精密度太低，不足以用來真實(shí)、可靠地評(píng)價(jià)線性關(guān)系。單純的目視圖表不足以建立或驗(yàn)證線性。 具體的設(shè)定誤差目標(biāo)的方法超出本指南的范圍。下列文件可以幫助用戶碰到一些難題不能解決時(shí)進(jìn)行參考： 1) 技術(shù) 性 錯(cuò)誤如干擾（ EP7臨床化學(xué)的干擾試驗(yàn)） 2) 試驗(yàn)結(jié)果的攜帶污染與漂移，及不精密度與偏倚的初步評(píng)價(jià)（ EP10定量臨床化學(xué)方法初步評(píng)價(jià)） 3) 分析 不精密度（ EP5臨床化學(xué)設(shè)備的精密度評(píng)價(jià)） 23 4) 偏倚（ EP9用病人標(biāo)本進(jìn)行方法比較與偏倚估計(jì)） 如果出現(xiàn)過度意外的誤差，應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)，以決定該方法或儀器是否可用。 如果在醫(yī)學(xué)決定水平處的允許偏差范圍未確定，則可認(rèn)為在整個(gè)線性范圍內(nèi)，允許偏差范圍是一致的。 自由度 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 26 附錄 C：舉例 例 1 IgM 在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)準(zhǔn)備五個(gè)等距濃度的標(biāo)本測(cè)定 IgM，每標(biāo)本重復(fù)測(cè)定兩次。 當(dāng)隨機(jī)誤差為 %時(shí)， 低于 實(shí)驗(yàn)室所規(guī)定的 誤差目標(biāo) 2%。 表：回歸分析的結(jié)果 階別 回歸系數(shù) 結(jié)果 系統(tǒng)誤差 t檢驗(yàn) 自由度 回歸 標(biāo)準(zhǔn) 誤 一 次 b0 一次 b1 8 二 次 b0 二次 b1 二次 b2 (*) 7 三次 b0 三次 b1 三次 b2 三次 b3 6 從 一次多項(xiàng)式 和 二次多項(xiàng)式 模型的對(duì)比分析結(jié)果來看，在低和中濃度處有較大的差別，而在高濃度水平處有較好的一致性。通過簡(jiǎn)單的計(jì)算，可以得到多個(gè)標(biāo)本的重復(fù)性 。 階別 系數(shù) 數(shù)值 系統(tǒng)誤差 t檢驗(yàn) 回歸標(biāo)準(zhǔn)誤 自由度 1 st b0 1st b1 10 2nd b0 2nd b1 2nd b2 9 3rd b0 3rd b1 3rd b2 3rd b3 8 三次多項(xiàng)式 和 一次多項(xiàng)式 模型的比較見下表，差值從 ，或 12%到 %，有五個(gè)濃度的差值超過實(shí)驗(yàn)室設(shè)定的誤差水平（ ）。 圖 C3： Ca線性實(shí)驗(yàn) —16稀釋 圖 C4： Ca線性評(píng)價(jià)差值點(diǎn)圖 —16稀釋 33 圖 C5： Ca線性實(shí)驗(yàn) —15稀釋 圖 C6： Ca線性評(píng)價(jià)差值點(diǎn)圖 —15稀釋