電泳技術(shù)及其在分子生物學(xué)中的應(yīng)用(更新版)
【正文】 分完 。 對雙向電泳后蛋白質(zhì)分子的印跡分析稱為Eastern印跡法 . Western Blotting 基本原理 在電場的作用下將電泳分離的多肽從凝膠轉(zhuǎn)移至一種固相支持體，然后用這種多肽的特異抗體來檢測。 蛋白質(zhì) SDS復(fù)合物的形狀近似于長的橢圓棒，它們的短軸是恒定的，而長軸與蛋白質(zhì)分子量的大小成比例。 聚丙烯酰胺凝膠 聚丙烯酰胺凝膠電泳 （ polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE） 聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺單體，在催化劑 TEMED(N， N， N， N39。 瓊脂糖凝膠中 DNA的染色 熒光染料 溴化乙錠（ EB） 含有一個可以嵌入 DNA或 RNA的堆砌堿基之間的一個平面基團(tuán) 與核酸結(jié)合后在紫外線激發(fā)下呈現(xiàn)橘黃色熒光，熒光的位置代表核酸片段所在的位置，熒光的強(qiáng)弱代表核酸量的多少 ,可以檢測到少至 10ng的 DNA條帶。 凝膠的制備 以瓊脂糖為溶質(zhì)， 電泳緩沖液 為溶劑，用微波爐加熱，配制 一定濃度 的溶膠，灌入水平膠框，插入 梳子 ，自然冷卻。電泳技術(shù)及其 在分子生物學(xué)中的應(yīng)用 環(huán)境科學(xué)與技術(shù)研究中心 電泳是帶電荷的膠體顆粒在電場中的移動。許多瓊脂糖鏈依氫鍵及其它力的作用使其互相盤繞形成繩狀瓊脂糖束，構(gòu)成直徑從 50nm到略大于 200nm的三維篩孔的通道。 染色和拍照 常用熒光染料溴化乙錠（ EB）染色，在紫外光下觀察 DNA條帶，用紫外分析儀拍照，或用凝膠成像系統(tǒng)輸出照片，并進(jìn)行有關(guān)的數(shù)據(jù)分析。 ? 所用的電壓 ：低電壓時， DNA片段遷移率與所用的電壓成正比；電場強(qiáng)度升高時，高分子質(zhì)量片段的遷移率遂不成比例的增加； ? 電泳緩沖液 ：組成和離子強(qiáng)度 。 蛋白質(zhì)在一定濃度的含有強(qiáng)還原劑的 SDS溶液中，與SDS分子按比例結(jié)合 (多肽和 SDS的質(zhì)量比為 1:)，形成帶負(fù)電荷的 SDS蛋白質(zhì)復(fù)合物，所帶的負(fù)電荷大大超過了蛋白質(zhì)分子原有的電荷量，從而消除了不同分子之間原有的電荷差異 。 對 RNA的印跡分析稱為 Northern印跡法 . 對單向電泳后的蛋白質(zhì)分子的印跡分析稱為Western印跡
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