電泳技術(shù)及其在分子生物學(xué)中的應(yīng)用-全文預(yù)覽
【正文】 緩沖液 ()在凝膠中的電離情況 甘氨酸 → 帶負(fù)電的蛋白質(zhì)亞基→ Cl 帶負(fù)電的蛋白質(zhì)亞基 → 甘氨酸 →Cl 被分離蛋白質(zhì)亞基的電離情況 蛋白質(zhì)亞基由于甘氨酸的擠壓作用，在積層膠不被分離，而是被濃縮為最小體積 蛋白質(zhì)亞基在分離膠根據(jù)分子量的大小被分離 考馬斯亮藍(lán)染色 ( ) OneDimensional SDSPAGE Isoelectric Focusing (IEF) 等電聚焦電泳的過程 電泳時可將樣品置于凝膠的任何位置； 初始位置在負(fù)極時，因 pH＞ pI，蛋白質(zhì)分子帶負(fù)電，電泳時向正極移動；移動過程中， pH逐漸下降，所帶負(fù)電荷量逐漸減少，蛋白質(zhì)移動速度減慢；當(dāng)移動到 pH=pI時，蛋白質(zhì)所帶凈電荷為零， 蛋白質(zhì)即停止移動； 各種不同蛋白質(zhì)在電泳結(jié)束后，會分別聚集于相應(yīng)的等電點(diǎn)位置，形成一個很窄的區(qū)帶；區(qū)帶的位置是由 pH梯度的分布和蛋白質(zhì)的 pI所決定，而與蛋白質(zhì)分子的大小和形狀無關(guān)。 蛋白質(zhì) SDS復(fù)合物的形狀近似于長的橢圓棒，它們的短軸是恒定的，而長軸與蛋白質(zhì)分子量的大小成比例。這樣，利用該限制性內(nèi)切酶消化此 DNA 時，便會產(chǎn)生與正常不同的限制性片段。 聚丙烯酰胺凝膠 聚丙烯酰胺凝膠電泳 （ polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE） 聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺單體，在催化劑 TEMED(N， N， N， N39。 雙鏈 DNA分子在凝膠中的 遷移率 ?影響 DNA 在瓊脂糖凝膠中的遷移速率的因素 ?DNA分子的大小 ?瓊脂糖濃度 ； ?DNA的構(gòu)象 ：超螺旋環(huán)狀（ I型）、切口環(huán)狀（ II型）和線狀（ III型）； 共價閉環(huán) DNA＞直線 DNA＞開環(huán)雙鏈 DNA。 瓊脂糖凝膠中 DNA的染色 熒光染料 溴化乙錠（ EB） 含有一個可以嵌入 DNA或 RNA的堆砌堿基之間的一個平面基團(tuán) 與核酸結(jié)合后在紫外線激發(fā)下呈現(xiàn)橘黃色熒光，熒光的位置代表核酸片段所在的位置，熒光的強(qiáng)弱代表核酸量的多少 ,可以檢測到少至 10ng的 DNA條帶。在低電壓條件下，
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