電泳技術(shù)及其在分子生物學(xué)中的應(yīng)用(參考版)
2025-01-19 19:44本頁面
【正文】 結(jié)果檢測 : 二抗與底物反應(yīng)顯色 ?辣根過氧化物酶法（ HRP） ?堿性磷酸酶法（ AP） 第一部分完 。 加入二抗溶液，搖床上緩慢搖動， 37℃ 2 小時。 正極 三層濾紙 硝酸纖維素濾膜 凝膠 三層濾紙 負(fù)級 轉(zhuǎn)膜后檢測 麗春紅 S染色 預(yù)染蛋白 marker 考馬斯亮藍(lán)染色 封閉 : 膜上的空白位點 脫脂奶粉（ 5％） BSA(牛血清白蛋白 ) 一抗、標(biāo)記二抗孵育 把硝酸纖維素濾膜放在密閉塑料袋或者培養(yǎng)皿中，根據(jù)濾膜面積以 與濾膜溫育， 4 ℃ 過夜。 對雙向電泳后蛋白質(zhì)分子的印跡分析稱為Eastern印跡法 . Western Blotting 基本原理 在電場的作用下將電泳分離的多肽從凝膠轉(zhuǎn)移至一種固相支持體，然后用這種多肽的特異抗體來檢測。 1975年， Southern建立了將 DNA轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜（ NC膜）上，并利用 DNA－ RNA雜交檢測特定的 DNA片段的方法，稱為 Southern印跡法。 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳（ SDSPAGE） 負(fù)極 積層膠 分離膠 加樣孔 正極 配置 積層膠 分離膠 丙烯酰胺濃度 5% 1015% TrisHCl 1M， PH= ， PH= SDS，過硫酸銨， TEMED濃度相同 電泳 積層膠 分離膠 電壓 80V 120V TrisHCl 甘氨酸電泳緩沖液 ()在凝膠中的電離情況 甘氨酸 → 帶負(fù)電的蛋白質(zhì)亞基→ Cl 帶負(fù)電的蛋白質(zhì)亞基 → 甘氨酸 →Cl 被分離蛋白質(zhì)亞基的電離情況 蛋白質(zhì)亞基由于甘氨酸的擠壓作用，在積層膠不被分離，而是被濃縮為最小體積 蛋白質(zhì)亞基在分離膠根據(jù)分子量的大小被分離 考馬斯亮藍(lán)染色 ( ) One
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