【正文】 ermo cyler 德國 Biometra 公司 冷凍離心機 Centrfuge 5810 德國 eppendorf 公司 恒溫搖床 HS80 中國科學院武漢科學儀器廠 自動雙重純水蒸餾器 SZ93 上海亞榮生化儀器廠 紫外分析儀 UVIV 北京市新科技應用研究所 電泳槽 DYYIII 北京六一儀器廠 穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳議 DYY2 北京六一儀器廠 手提式高壓滅菌鍋 YXQSG46280A 上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠 超純水儀 WaterPro 美國 LABCONCO 公司 移液器 1ml； 200μl ； 40μl ； 10μl ； 芬蘭 Labsystems 公司 主要試劑的配置 1) 1M ： 稱取 Tris堿溶于 800ml雙蒸水中，加濃鹽酸調(diào)至pH=，定容到 1000ml。cl （ pH＝ ） ， 1mM EDTA（ pH＝ ） 。 PCR 反應程序 （表 3） 表 3 PCR 反應程序 Table 3 PCR amplification of the response term 步驟 steps PCR 反應條件 PCR reaction conditions 溫度 temperature 時間 time 1 預變性 95℃ 5min 2C 變性 95℃ 30sec 3C 退火 60℃ 30sec 4C 延伸 72℃ 30sec 5 延 伸 72℃ 7min 6 保溫 16℃ 10min 第二步至第四步循環(huán) 35 次。用吸頭吸去表面小泡。20～ 30min 后檢查。 在 197 bp 的擴增片段在 118bp 處存在另一 HinfⅠ酶切位點 ， 酶切后產(chǎn)生 118 bp 和 79bp 片段 ， 其中波爾山羊在 118 處的酶切位點存在多態(tài)性 ， 酶切位點的存在與缺失產(chǎn)生 2 種基因型，分別命名為 AA 和 GG:AA （ 118bp /118 bp ） 、 GG（ 118bp /79bp ） ， 酶切圖譜見圖 2 ； 而馬頭山羊在 118 處的酶切位點則無多態(tài) 性 ， 基因型均為 AA 型。 表 8 波爾山羊 MTNR1A基因型對經(jīng)產(chǎn)產(chǎn)羔數(shù)性狀的最小二乘均值及基因效應分析 Table 8 Least squares means and allele substitution effects for litter size in multiparous boar goat 3 討論 3． 1 不同山羊品種基因型頻率及基因頻率差異 利用 熒光原位雜交方法和遺傳連鎖分析方法， 褪黑激素受體 1A 已經(jīng)在綿羊等多種動物中得到精細定位。 GG 177。 3． 2 MTNR1A 不同基因型對波爾山羊產(chǎn)羔數(shù)的影響 本研究結果顯示：在山羊樣本中，無論是頭胎還是經(jīng)產(chǎn)山羊，褪黑激素受體1A 不同的基因型對性狀的影響表現(xiàn)都為 AA＞ GG，由于受到樣本含量限制，該差異并未達到顯著水平，但是該結果初步揭示褪黑激素受體 1A 基因可能與山羊繁殖性狀相關，而該基因是 否能夠作為分子標記應用于山羊繁殖性狀標記輔助選擇，則需進一步擴大樣本含量，增加品種個數(shù)進行驗證。28（ 2） 7779 [11] 焦傳珍．褪黑激素及其生理功能研究進展．生物學教學 ， 20xx， 30（ 2） 23 [12] 楊 利國． 湖北馬頭山羊 ． 20xx～ 20xx 年全國養(yǎng)羊生產(chǎn)與學術研討會議論文集， 111113 [13] [ 6 ] 季從亮，儲明星，陳國宏等 . 4 個綿羊品種褪黑激 素受體 1a基因第二外顯子 PCRRFLP 分析 [J ]. 華中農(nóng)業(yè)大學學報 ,20xx,22（ 2） : 105109 [14] Barrett P, Conway S, Jockers R, et al. Cloning and functional analysis of a polymorphic variant of the ovine Mel 1amelatonin receptor[J]. Biochimica etBiophysica Acta,1997,1356（ 3） : 299307 [15] ChuM X, Ji C L, Chen G H. Association between PCRRFLP of melatonin receptor 1a gene and high prolificacy in Small Tail Han sheep [J ]. Asian2Aust J Anim Sci,20xx,16(12 ): 17011704MesserL A, LizhengWang, Tuggle C K, et al Mapping of the melatonin receptor 1a （ M TNR1A） gene in pigs, sheep, and cattle[J ]. Mammalian Genome, 1997, 8（ 5） :368370 [16] NotterD R,CockettN E,Hadfield T S. Evaluation of melatonin receptor 1a as a candidate gene influencing reproduction in an autumnlambing sheep flock [J ]. J Anim Sci,20xx,81 4 :912917 [17] PelletierJ,BodinL,Hanocq E, et al. Association between expression of reproductive seasonality and alleles of the gene for Mel1a receptor in the ewe[J]. Biology of Reproduction,20xx,62 4 : 10961101 致 謝 本實驗是在楊利國導師的悉心指導下順利完成的。 在本研究所檢測的兩個山羊群體中，基因型頻率及基因頻率存在較大差異。標準誤 Least squares means177。 圖 2 波爾山羊酶切圖譜 注： M， pBR322/Msp 1 Marher； 1～ 13為酶切產(chǎn)物條帶 genotypes of the M TNR1A fragment defined by PCRRFLP 華中農(nóng)業(yè)大學本科畢業(yè)論文（或設計） 15 圖 3 馬頭山羊酶切圖譜 注： M， pBR322/Msp 1 Marher1～ 8為酶切產(chǎn)物條帶 genotypes of the M TNR1A fragment defined by PCRRFLP 褪黑激素基 因頻率和基因型頻率分析結果 分析兩種山羊品種的褪黑激素基因型頻率發(fā)現(xiàn)，在該酶切位點，馬頭山羊只出現(xiàn) AA 基因型，波爾山羊雖然出現(xiàn)兩種基因型，但 AA 型頻率高于 GG 型。 . 限制性內(nèi)切酶消化擴增產(chǎn)物以及電泳檢測 酶切反應體系 （表 4） 表 4 酶切反應體系 Table 4 PCR and the amount of the ponents 反應體系 response system 反應體積 V（μ l） response volume（μ l） 滅菌蒸餾水 10 Buffer 1 HinfⅠ限制性內(nèi)切酶 PCR 產(chǎn)物 4 Total 10 將上述酶切體系置 37℃水浴鍋或恒溫箱中酶切過夜。 （ 2） 上樣電泳 輕輕拔出梳子，將膠兩頭的透明膠帶揭去，移入電泳槽，點樣孔一側靠近操作者，注入 1 TAE 緩沖液，浸沒凝膠。 瓊脂糖凝