【正文】 將上述酶切體系置 37℃水浴鍋或恒溫箱中酶切過夜。接上電源：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（或設(shè)計） 12 陽極遠(yuǎn)離上樣孔，陰極靠近上樣孔（ DNA 向陽極移動）。 （ 2） 上樣電泳 輕輕拔出梳子，將膠兩頭的透明膠帶揭去，移入電泳槽，點樣孔一側(cè)靠近操作者，注入 1 TAE 緩沖液，浸沒凝膠?；靹颍訜?，至瓊脂糖徹底溶解。 瓊脂糖凝膠電泳方法 （ 1） 灌膠 將透明膠帶粘于灌膠模槽的兩端，制成灌膠模。每 個溫度梯度 一個反應(yīng)，最后電泳 檢測并 比較 各個 退火溫度 的條帶效果， 得到最好結(jié) 果。 用于聚丙 烯 酰胺凝膠電泳和銀染的溶液的配制 1) 30% 丙 烯 酰胺（丙 烯 酰胺 :甲叉雙丙 烯 酰胺＝ 29:1） :700ml雙蒸水中加入 290g丙 烯 酰胺， 10g甲叉雙丙 烯 酰胺，攪拌使完全溶解，加水定容至 1000ml， 4℃保存 ； 2) 10% 過硫酸銨 ： 稱取 1g過硫酸銨溶于 8ml雙蒸水，定容至 10ml； 3) 10% 乙醇 ： 量取 50ml無水乙醇溶于 450ml水中，混勻 ； 4) 1% HNO3： 量取 15ml濃 HNO3溶于 985ml雙蒸水中，混勻 ； 5) % AgNO3： 稱取 1g AgNO3溶于 500ml雙蒸水中，置于棕色試劑瓶 ； 6) 3% Na2CO3（ %甲醛） ： 稱取 30g無水 Na2CO3溶于 900ml雙蒸水中，加入 甲醛，定容至 1000ml； 7) 3% HAc： 量取 30ml冰 HAc溶于 970ml雙蒸水，混勻。3H 2O溶于 400ml雙蒸水中，用 HAc調(diào)至 pH=，加水定容華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（或設(shè)計） 9 至 500ml。2H 2O溶于 800ml雙蒸水中，加入NaOH（約 20g）調(diào)至 pH=，定容到 1000ml。 實驗材料 Eppendorf 管 、雙面板、微量移液槍 （ 1000μ l、 200μ l、 40μ l、 10μ l、 l） 及槍 頭、 一次性 PE 塑料手套。 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（或設(shè)計） 7 4．本實驗?zāi)康囊饬x 本實 驗室滑國華等 （ 20xx） 在山羊 MTNR1A 中共發(fā)現(xiàn) 7 個 SNPs，對其中 4 個SNPs 分析結(jié)果顯示： MTNR1A 不同基因型對山羊產(chǎn)羔數(shù)性狀有一定的影響。 Pelletier 等 （ 20xx） 用M n lⅠ 限制性內(nèi)切酶消化 2組發(fā)情行為有明顯差異 （ 常年發(fā)情和季節(jié)性發(fā)情 ）的 Merinos d′ Arles 母綿羊以及季節(jié)性發(fā)情明顯的 Ile2de2France 母綿羊 M TNR1A基因外顯子 2的 824 bp 擴(kuò)增產(chǎn)物 ， 發(fā)現(xiàn)存在 303 bp 和 236 bp 多態(tài)片段。根據(jù)其分子生物學(xué)方法又可分為MTNR1A、 MTNR1B、 MTNR1C 三種亞型 （ 張凱 等， 20xx） 。松果體分泌褪黑激素 ， 通過下丘腦 — 垂體性腺軸影響生殖系統(tǒng)。性狀關(guān)聯(lián)分析結(jié)果表明： 波爾山羊的 AA 基因純合型頭胎平均產(chǎn)羔數(shù)比 GG 基因雜合型多 只，加性效應(yīng)值為 ，顯性效應(yīng)值為 ； 經(jīng)產(chǎn)羔數(shù)的 AA 型比 GG 型多 只；加性效應(yīng)值為 ，顯性效應(yīng)值為 。 方法 ................................................................... 9 DNA 的提取 ............................................... 9 .................................................. 10 擴(kuò)增及其電泳檢測 ............................................... 10 . 限制性內(nèi)切酶消化擴(kuò)增產(chǎn)物以及電泳檢測 ............................ 12 .......................................................... 13 2 結(jié)果與分析 ............................................................... 13 PCR 擴(kuò)增結(jié)果 ........................................................... 13 酶切結(jié)果 ............................................................... 14 褪黑激素基因頻率和基因型頻率分析結(jié)果 ................................... 15 MTNR1A 基因型與波爾山羊頭胎產(chǎn)羔數(shù)性狀的關(guān)聯(lián)分析 ........................ 15 MTNR1A 基因型與經(jīng)產(chǎn)產(chǎn)羔數(shù)性狀的關(guān)聯(lián)分析 ................................ 16 3 討論 ..................................................................... 16 3． 1 不同山羊品種基因型頻率及基因頻率差異 .................................. 16 3． 2 MTNR1A 不同基因型對波爾山羊頭胎和經(jīng)產(chǎn)羔數(shù)的影響 ....................... 17 參考文獻(xiàn) .................................................................... 17 致 謝 ....................................................................... 18 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（或設(shè)計） 4 山羊褪黑激素受體 1A 基因 HinfⅠ 酶切多態(tài)性及其與產(chǎn)羔數(shù)性狀的關(guān)聯(lián)分析 摘 要 本研究以褪黑激素受體 1A 基 因為候選基因，分析該基因多態(tài)性對山羊產(chǎn)羔數(shù)性狀的影響。武漢 二○○ 八 年 六 月 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（或設(shè)計） 2 分類號 密級 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文 山羊褪 黑激素受體 1A 基因 HinfⅠ酶切多態(tài)性及其與產(chǎn)羔數(shù)性狀的關(guān)聯(lián)分析 HinfⅠ RFLP of Melatonin receptor 1 A(MTNR1A) gene and the association with the litter size traits in goat 學(xué)生姓名： 賈 征 學(xué)生學(xué)號： 040801030 學(xué)生專業(yè)： 動物科學(xué) 指導(dǎo)教師： 楊利國 教 授 華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物 科學(xué)學(xué)院 二○○ 八 年六月 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（或設(shè)計） 3 目 錄 摘 要 ........................................................................ 4 ABSTRACT ..................................................................... 5 前 言 ........................................................................ 6 ....................................................