【正文】 電泳檢測(cè)，得到的片段與預(yù)期片斷大小一致（ 197bp），條帶清晰（圖 1），特異性高，滿足后續(xù)分析要求。 表 7 波爾山羊 MTNR1A 基因型對(duì)頭胎產(chǎn)羔數(shù)性狀的最小二乘均值及基因效應(yīng)分析 Table 7 Least squares means and allele substitution effects for litter size at first kidding in boar goat MTNR1A 基因型與 經(jīng)產(chǎn) 產(chǎn)羔數(shù)性狀的關(guān)聯(lián)分析 由表 8可知，波爾山羊的 AA 型經(jīng)產(chǎn)羔數(shù)比 GG 型多 只；加性效應(yīng)值為，顯性效應(yīng)值為 。標(biāo)準(zhǔn)誤 Least squares means177。 波爾山羊是引入品種 ， 平均窩產(chǎn)羔數(shù)為 頭 ，低于馬頭山羊。在實(shí)驗(yàn)的過程中，滑國華師姐、于俊娜師姐和楊菲菲師姐在實(shí)驗(yàn)過程中教給我很多知識(shí)和技能，給了我很好的指導(dǎo)和很大的幫助，在此表示感謝。這可能與兩個(gè)品種的育成史有關(guān)。 GG 177。 表 6 山羊 MTNR1A 基因 HinfⅠ酶切基因型和基因頻率分布表 Table 6 Genotype and allele frequencies of HinfⅠ RFLP for the Goat M TNR1A gene MTNR1A 基因型與波爾山羊頭胎產(chǎn)羔數(shù)性狀的關(guān)聯(lián)分析 由表 7可知，波爾山羊的 AA 基因純合型頭胎平均產(chǎn)羔數(shù)比 GG 基因雜合型多品種 Breed 數(shù)量 N 基因型 Geype 基因型頻率 Geype frequency 等位基因頻率 Allele frequency 波爾山羊 65 AA A GG G 馬頭山羊 51 AA 1 A 1 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（或設(shè)計(jì)） 16 只，加性效應(yīng)值為 ，顯性效應(yīng)值為 。 1. 拆下 電泳裝置，剝下聚丙烯酰胺凝膠，放到一個(gè)塑料盤內(nèi)，用雙蒸水沖漂洗2次； 2. 加入 500ml 10％乙醇固定液，在搖床上固定 8～ 10 min，棄去反應(yīng)液； 3. 加入 500ml 1％ HNO3 氧化，在搖床上輕搖 8～ 10 min，棄去反應(yīng)液，用雙蒸水漂洗 2 次； 4. 倒入 500ml ％ AgNO3 銀染液，染色 15～ 30 min，棄去反應(yīng)液，用雙蒸水漂洗 2次； 5. 加入 500ml 3％ Na2CO3顯色液，手搖顯色至出現(xiàn)清晰的銀染帶，迅速棄去反應(yīng)液； 6. 用 500ml 3％ HAC 停止顯色； 7. 將已經(jīng)染好的聚丙烯酰胺凝膠置于透射白光板 上，觀察酶切反應(yīng)結(jié)果、記錄并拍照。點(diǎn)樣時(shí)，加樣頭尖端插入上樣孔內(nèi) 1/3 高度，輕輕將樣品推入，避免刺入前后凝膠和刺穿凝膠底部。將模放于水平臺(tái)上。 引物 參考滑國華等（ 20xx）進(jìn)行設(shè)計(jì)，序列如下： 上游引物 : 5’ ACGACCCGAGGATCTATTCC 3’ 下游引物 : 5’ ATATAAGTCCTGGGGCTTCAGATT 3’， 在下游引物中引入錯(cuò)配堿基 A，當(dāng)突變位點(diǎn)為 G（即反義鏈為 C）時(shí)，可形成 HinfⅠ（ GATTC）酶切位點(diǎn)；當(dāng)突變位點(diǎn)為 A（即反義鏈為 T）時(shí)，該酶切位點(diǎn)缺失，由此可進(jìn)行基因型判定。高壓滅菌，室溫保存 ； 4) 抗凝劑（ ） ： 量取 200ml EDTA加入雙蒸水定容至 500ml。 材料 試驗(yàn)動(dòng)物 馬頭山羊 51 頭，采自湖北省十堰市；波爾山羊 65 頭，采自湖北省宜都市波爾山羊種羊場(chǎng)。 3．褪黑激素受體分子標(biāo)記在其它動(dòng)物中的研究進(jìn)展 目前國內(nèi)外對(duì)綿羊 M TNR1A 基因已經(jīng)有所研究已經(jīng)很多了。 關(guān)鍵詞 ： 山羊 ； 繁殖性狀 ； 褪黑激素受體 ； PCR— RFLP 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（或設(shè)計(jì)） 5 HinfⅠ RFLP of Melatonin receptor 1 A（ MTNR1A） gene and the association with the litter size traits in goat Abstract In the present study， Melatonin receptor 1 A gene （ MTNR1A） was analysed to find the assocation with litter size in goat as a candidate gene. HinfⅠ RFLP （ Restriction Fragment Length polymorphism， RFLP） of MTNR1A was found in 65 Boer goats and 51 goats Ma Tou. No polymorphism was detected in Ma Tau goats . Two genotypes AA， GG were found in Boer goats. The frequency of AA genotype was higher than GG genotype， which were and ， respectively. The allele frequencies for A and G were and . The results of traits association analysis showed that individuals with AA genotype had additional average litter size at first kidding in Boer Goat. The additive effect value was ， while the dominant effects value . Moreover， AA genotype had additional average litter size for multiparity， the additive and dominant effects value were and ， respectively. Allele A was possiblely positively correlated with litter size in Boer goats. The additive effect was dominant at the site. Key words: Goat； Reproductive traits； MTNR1A； PCRRFLP 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（或設(shè)計(jì)） 6 前 言 褪黑激素主要是由松果體合成的 ， 其它合成部位還有 :視網(wǎng)膜、眼眶腔的副淚腺、唾液腺、腸的嗜鉻細(xì)胞及紅細(xì)胞 ， 松果體把對(duì)外界光照形成的神經(jīng)信息經(jīng)下丘腦視交叉上核轉(zhuǎn)變成體液信息 — MEL。華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（或設(shè)計(jì)） 1 本科畢業(yè)論文 題 目： 山羊褪黑激素受體 1A 基因 HinfⅠ酶切 多態(tài)性及其與產(chǎn)羔數(shù)性狀的關(guān)聯(lián)分析 姓 名： 賈 征 學(xué) 號(hào) 040801030 專 業(yè)： 動(dòng) 物 科 學(xué) 指導(dǎo)教師： 楊 利 國 職 稱 教 授 中國 A 等位基因可能與波爾山羊產(chǎn)羔數(shù)呈正相關(guān)，該位點(diǎn)主要以加性方式起作用。 目前在哺乳動(dòng)物中還沒有發(fā)現(xiàn) MTNR1C 受體，而具有明顯季節(jié)性繁殖特征的動(dòng)物僅在垂體結(jié)節(jié)部發(fā)現(xiàn)MTNR1A受體，提示垂體結(jié)節(jié)部