【正文】 成 1:10的均勻稀釋液。估計(jì)日本每年創(chuàng)傷弧菌敗血癥病例數(shù)約為 425例。n 魚(yú)類(lèi)和頭足類(lèi)動(dòng)物取表面組織、腸或鰓。 n 另取 1 mL滅菌吸管，按上條操作依次制備 10倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換用 1支 1 mL滅菌吸管。分離平板 ——mCPC 和 CC 典型的創(chuàng)傷弧菌在 mCPC和 CC平板上呈現(xiàn)為圓的、扁平的、中心不透明邊緣透明的黃色菌落，直徑 1 mm～ 2 mm。創(chuàng)傷弧菌在 3％氯化鈉三糖鐵瓊脂中的反應(yīng)為底層變黃不變黑，無(wú)氣泡，斜面顏色不變或紅色加深，偶爾斜面變黃。1 ℃ 培養(yǎng) 24 h～ 48 h后觀察結(jié)果。與乳糖膽鹽肉湯的作用和意義相同，但具有更多的優(yōu)越性，LST中的選擇性抑菌劑是月桂基硫酸鹽，相對(duì)于膽鹽穩(wěn)定性更好些。 樣品的接種與培養(yǎng)n 將待檢樣品選取適宜的 2~3個(gè)連續(xù)稀釋度 , 每個(gè)稀釋度接種 2張 測(cè)試片。當(dāng)培養(yǎng)區(qū)域出現(xiàn)大量氣泡，大量不明顯小菌落或培養(yǎng)區(qū)呈暗紅色三種情況，表明大腸菌群的濃度較高，需要進(jìn)一步稀釋樣品來(lái)獲得準(zhǔn)確的讀數(shù)。n 培養(yǎng)特性：需氧或兼性厭氧，最適溫度 37℃ ， n 營(yíng)養(yǎng)要求：不高，普通培養(yǎng)基生長(zhǎng)良好。n 現(xiàn)行的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)采用了 (1)亞硒酸鹽胱氨酸增菌液，和 (2)四硫磺酸鹽孔雀綠增菌液。附表使用說(shuō)明n A1尿素 氰化鉀 賴氨酸 判斷結(jié)果 甲副 + + 沙門(mén)氏菌 Ⅳ 和 Ⅴ + + 沙門(mén)氏菌個(gè)別變體n A2 甘露醇 山梨醇 判斷結(jié)果 + + 沙門(mén)氏菌 靛 + 緩慢愛(ài)德華氏菌 B1 ONPG 沙門(mén)氏菌屬 ONPG + 大腸埃希氏菌屬腸桿菌科細(xì)菌生化特性腸桿菌科細(xì)菌生化特性n 近一百年以來(lái)，有許多學(xué)者，為積累腸桿菌科細(xì)菌的生化特性資料，付出了辛勤的勞動(dòng)。其中對(duì)腸桿菌科細(xì)菌鑒定重要的試驗(yàn)有：氰化鉀、 。n 一是因?yàn)橐蜃友宓男r(jià)不高，難以覆蓋所試驗(yàn)的菌株。大腸埃希氏菌大腸埃希氏菌 O157:H7/NM檢驗(yàn)檢驗(yàn)一、一、 常規(guī)方法常規(guī)方法n 檢樣n ↓n 25g(mL)+改良 EC肉湯 (mEC+n） 225mln 快速篩選 陰性 n 36177。1℃ 培養(yǎng) 18～ 24h，觀察菌落。大部分非O157 ，仍有 6%不發(fā)酵山梨醇，它們與摩根氏菌和哈夫尼亞菌一樣在 TCSMAC上表現(xiàn)為與 O157相同的菌落特征。血清凝集試驗(yàn)應(yīng)做生理鹽水對(duì)照。在漩渦混合器上輕輕振蕩，用開(kāi)蓋器打開(kāi)每個(gè) Eppendorff管的蓋子，每管加入 20μL　 O157免疫磁珠懸液。對(duì)照同時(shí)做。n 捕獲：將磁板插入到磁板架中濃縮磁珠。如果在后續(xù)的洗滌過(guò)程中也這樣做的話，脂肪的影響將減小，也可達(dá)到充分捕獲的目的。 n n 用漩渦混合器將免疫磁珠混勻，用加樣器各取 50μL免疫磁珠懸液分別轉(zhuǎn)移至 CTSMAC平板和改良 CHROMagar O157顯色瓊脂平板一側(cè)，然后用涂布棒將免疫磁珠涂布平板的一半，再用接種環(huán)劃線接種平板的另一半。該菌存在于近海的海水、海底沉積物和魚(yú)類(lèi)、貝殼等海產(chǎn)品中。樣品制備n 冷凍樣品應(yīng)在 45 ℃ 以下不超過(guò) 15min或在 2 ℃ ～ 5 ℃ 不超過(guò) 18 h解凍，若不能及時(shí)檢驗(yàn)，應(yīng)放于－ 15 ℃ 左右保存；非冷凍而易腐的樣品應(yīng)盡可能及時(shí)檢驗(yàn)，若不能及時(shí)檢驗(yàn)，應(yīng)置 2 ℃ ～ 5 ℃ 冰箱保存，在 24 h內(nèi)檢驗(yàn)。n 定量檢測(cè)n 用滅菌吸管吸取 1:10稀釋液 1 mL，注入含有 9 mL 3％氯化鈉堿性蛋白胨水的試管內(nèi)，振搖試管混勻，制備 1:100的稀釋液。1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～ 24 h。副溶血性弧菌為革蘭氏陰性，呈棒狀、弧狀、卵圓狀等多形態(tài)，無(wú)芽胞，有鞭毛。1 ℃ 培養(yǎng) 24 h～ 48 h后觀察結(jié)果。 培養(yǎng)特性n 微需氧： 5％氧氣、 10％二氧化碳、85％氮?dú)?；n 最適生長(zhǎng)溫度： 42～ 43℃ ；n 營(yíng)養(yǎng)要求高，含血液和血清的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，液體培養(yǎng)基混濁生長(zhǎng)。 1 ℃ 24 h～ 48 h42 ℃ 177。1℃ ；n 時(shí)間 24, 48h。動(dòng)力觀察 螺旋狀運(yùn)動(dòng) b氧化酶試驗(yàn) 陽(yáng)性微需氧 25℃ 生長(zhǎng)試驗(yàn)不生長(zhǎng)有氧 42℃ 生長(zhǎng)試驗(yàn) 不生長(zhǎng)a 有些菌株形態(tài)不典型； b 有些菌株運(yùn)動(dòng)不明顯空腸彎曲菌的鑒定 特征 空腸彎曲菌結(jié)腸彎曲菌紅嘴鷗彎曲菌烏普薩拉彎曲菌過(guò)氧化氫酶試驗(yàn) ＋ ＋ ＋ －或微弱馬尿酸鈉水解試驗(yàn) ＋ － － －吲哚乙酸酯水解試驗(yàn) ＋ ＋ － +頭孢菌素敏感試驗(yàn) R R R S萘啶酮酸敏感試驗(yàn) Sa Sa R/ Sb S注：＋ 陽(yáng)性；－陰性； R抗性； S敏感a 空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌對(duì)萘啶酮酸的耐藥性呈現(xiàn)增長(zhǎng)趨勢(shì)。2h檢樣100 g/mL+稀釋液 900 mL36℃ 177。而較高的生長(zhǎng)溫度可以進(jìn)一步抑制其他細(xì)菌的生長(zhǎng)。n 在腸桿菌的生化鑒定中使用最廣泛的是API 20E和 Vitek GNI+。n 3. 質(zhì)控樣品應(yīng)經(jīng)過(guò)穩(wěn)定性測(cè)試，于 2 ℃5 ℃ 放置，分別于 1周、 2周、 1個(gè)月后，隨機(jī)抽取 5種質(zhì)控樣品檢驗(yàn)確認(rèn)，經(jīng)驗(yàn)證樣品中所含食源性致病菌種類(lèi)在放置前后沒(méi)有變化才可作為質(zhì)控樣品。n 2. 檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)在收到質(zhì)控樣品后 30天內(nèi)進(jìn)行檢驗(yàn)。謝謝大家！謝謝觀看 /歡迎下載BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAITH。n 4. 檢驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)注意生物安全防護(hù)，實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)對(duì)質(zhì)控樣品進(jìn)行無(wú)害化處理。每個(gè)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)一個(gè)編號(hào)，編號(hào)由省市代碼加阿拉伯?dāng)?shù)字組成，每個(gè)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)兩支平行質(zhì)控樣品，每支 5 g，一支用于檢驗(yàn)，一支為備份?？偨Y(jié)分析檢測(cè)結(jié)果，以達(dá)到促進(jìn)提高檢驗(yàn)人員的理論和檢驗(yàn)技術(shù)水平，并對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行綜和評(píng)價(jià)的目的。n 顯色培養(yǎng)基對(duì) ES的選擇性較好， ES形成的特征性菌落易于辨認(rèn)，以 DFI為例：1. 硫化氫指示劑可以區(qū)分 ES和產(chǎn)生少量 α 葡萄糖苷酶但 H2S陽(yáng)性菌株（如普通變形桿菌）。2h前增菌選擇性增菌選擇性分離生化鑒定TSA25℃ 177。空彎菌株的保存n 分離已經(jīng)鑒定的菌株應(yīng)在血平板上經(jīng) 2次純化，立即保存于 20％甘油的 布氏肉湯菌種保存管中，置于－ 80 ℃ 保存；n 冷凍干燥保存。n 微需氧條件：n 5% O2 10%CO2 85N2彎曲菌在 Bolton肉湯中培養(yǎng)n 均勻混濁，微紅，不臭。預(yù)增菌、增菌和分離程序平板上雜菌較多微需氧 42 ℃ 177。 抵抗力n 不強(qiáng)，直射陽(yáng)光、干燥可殺滅；n 60℃ 5min 滅活；n 紫外線照射 5min可滅活；n 一般消毒劑均可殺滅。n API 20E生化鑒定試劑盒或 VITEK：刮取 3％ 氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板上的單個(gè)菌落，用生理鹽水制備成濁度適當(dāng)?shù)募?xì)胞懸浮液，使用 API 20E生化鑒定試劑盒或 VITEK鑒定。1 ℃ 培養(yǎng) 24h觀察結(jié)果。從培養(yǎng)箱取 TCBS平板后，應(yīng)盡快（不超過(guò) 1 h）挑取菌落或標(biāo)記要挑取的菌落。n 根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情況的估計(jì)，選擇三個(gè)連續(xù)的適宜稀釋度，每個(gè)稀釋度接種 3支含有 9 mL 3％氯化鈉堿性蛋白胨水的試管，每管接種 1 mL。貝類(lèi)取全部?jī)?nèi)容物，包括貝肉和體液；n 甲殼類(lèi)取整個(gè)動(dòng)物，或者動(dòng)物的中心部分，包括腸和鰓。主要引起食物中毒，尤以日本、東南亞、美國(guó)及我國(guó)臺(tái)北地區(qū)多見(jiàn)，也是我國(guó)大陸沿海地區(qū)食物中毒中最常見(jiàn)的一種病原菌。1℃ 培養(yǎng)18～ 24h。重復(fù)上述步驟 ～ 。n 吸取上清液：取 1支滅菌的加長(zhǎng)吸管，從免疫磁珠聚集物對(duì)側(cè)深入液面，輕輕吸走上清液。對(duì)照同時(shí)做。避免產(chǎn)生泡沫。n CCP:先做 O157血清凝集，后做 H7因子凝集，注意自凝菌，用生理鹽水做對(duì)照。1℃ 培養(yǎng) 18～ 24h。在 CTSMAC平板上，發(fā)酵山梨醇的菌落為紅色； 典型菌落為不發(fā)酵山梨醇的圓形、光滑、較小的無(wú)色菌落，中心呈現(xiàn)較暗的灰褐色， 用接種針挑起時(shí)無(wú)拉絲現(xiàn)