【正文】 在 Bolton肉湯中培養(yǎng)n 均勻混濁，微紅，不臭。1℃ 、 24 h微需氧 42 ℃ 177。預(yù)增菌、增菌和分離程序平板上雜菌較多微需氧 42 ℃ 177。 1 ℃ 4 h42 ℃ 177。 抵抗力n 不強(qiáng)，直射陽(yáng)光、干燥可殺滅；n 60℃ 5min 滅活；n 紫外線照射 5min可滅活；n 一般消毒劑均可殺滅。空腸彎曲菌檢驗(yàn)空腸彎曲菌分類地位螺菌科彎曲菌屬空腸彎曲菌芬奈爾彎曲菌豬彎曲菌結(jié)腸彎曲菌同性戀?gòu)澢虝簭澢簭澢ｚt彎曲菌胎兒亞種 口腔亞種等等13個(gè)種形態(tài)與染色n 革蘭陰性彎曲小桿菌，多種形態(tài)，有螺旋形、彎曲桿狀、 S形、逗點(diǎn)狀、飛翔的海鷗形，陳舊培養(yǎng)物中可變成球形。n API 20E生化鑒定試劑盒或 VITEK：刮取 3％ 氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板上的單個(gè)菌落，用生理鹽水制備成濁度適當(dāng)?shù)募?xì)胞懸浮液，使用 API 20E生化鑒定試劑盒或 VITEK鑒定。副溶血性弧菌在無(wú)氯化鈉和 10％氯化鈉的胰胨水中不生長(zhǎng)或微弱生長(zhǎng)，在 7％氯化鈉的胰胨水中生長(zhǎng)旺盛。1 ℃ 培養(yǎng) 24h觀察結(jié)果。初步鑒定n 氧化酶試驗(yàn)：挑選純培養(yǎng)的單個(gè)菌落進(jìn) 行氧化酶試驗(yàn)，副溶血性弧菌為氧化酶陽(yáng)性。從培養(yǎng)箱取 TCBS平板后，應(yīng)盡快（不超過(guò) 1 h）挑取菌落或標(biāo)記要挑取的菌落。一支試管劃線一塊平板。n 根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情況的估計(jì)，選擇三個(gè)連續(xù)的適宜稀釋度，每個(gè)稀釋度接種 3支含有 9 mL 3％氯化鈉堿性蛋白胨水的試管，每管接種 1 mL。增菌n 定性檢測(cè)n 將上述 1:10稀釋液于 36 ℃ 177。貝類取全部?jī)?nèi)容物，包括貝肉和體液；n 甲殼類取整個(gè)動(dòng)物，或者動(dòng)物的中心部分，包括腸和鰓。對(duì)低溫及高濃度氯代鈉抵抗力甚強(qiáng)。主要引起食物中毒，尤以日本、東南亞、美國(guó)及我國(guó)臺(tái)北地區(qū)多見(jiàn)，也是我國(guó)大陸沿海地區(qū)食物中毒中最常見(jiàn)的一種病原菌。n CHROMagar O157：較多的非 O157菌落生長(zhǎng)，菌落較大，影響 O157菌的檢出n 改良 CHROMagar O157：非 O157細(xì)菌生長(zhǎng)較少且菌落相對(duì)局限， O157菌落特征性明顯。1℃ 培養(yǎng)18～ 24h。 使用多塊磁珠分離裝置時(shí)，磁鐵與磁鐵應(yīng)遠(yuǎn)離放置。重復(fù)上述步驟 ～ 。n 免疫磁珠的滑落：某些樣品特別是那些富含脂肪的樣品，其磁珠積聚物易于滑落到管底。n 吸取上清液：取 1支滅菌的加長(zhǎng)吸管，從免疫磁珠聚集物對(duì)側(cè)深入液面，輕輕吸走上清液。 用手轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)應(yīng)輕輕顛倒 Eppendorff管架，不可劇烈搖動(dòng)。對(duì)照同時(shí)做。取樣前混勻，避開(kāi)脂肪層與雜質(zhì)，必要時(shí)使用濾網(wǎng)。避免產(chǎn)生泡沫。二、免疫磁珠捕獲法二、免疫磁珠捕獲法操作步驟操作步驟n 1. 增菌：同常規(guī)法。n CCP:先做 O157血清凝集，后做 H7因子凝集，注意自凝菌，用生理鹽水做對(duì)照。1℃ 培養(yǎng) 18～ 24h，并進(jìn)行下列鑒定。1℃ 培養(yǎng) 18～ 24h。n 涂布時(shí)應(yīng)適當(dāng)稀釋。在 CTSMAC平板上，發(fā)酵山梨醇的菌落為紅色； 典型菌落為不發(fā)酵山梨醇的圓形、光滑、較小的無(wú)色菌落，中心呈現(xiàn)較暗的灰褐色， 用接種針挑起時(shí)無(wú)拉絲現(xiàn)象 。同時(shí)做陽(yáng)性及陰性對(duì)照。1℃ ↓ 18～ 24hn 挑取可疑菌落 5～ 10個(gè) ,氧化酶陰性 ,革蘭氏陰性桿菌 接種 TSIn ↓n MUGLSTn 36177。如果只鑒定到 O群，沒(méi)有得出抗原的分型結(jié)果，往往不是沙門(mén)氏菌。n 二是因?yàn)榫甑目乖园l(fā)育不良，特別是 H抗原。如果這個(gè)血清型具有K抗原，一般在 O抗原分群以后再檢查。血清學(xué)分型血清學(xué)分型n 沙門(mén)氏菌具有 O抗原、 K抗原和 H抗原。使用者應(yīng)該對(duì)該表進(jìn)行審查，認(rèn)為編碼表的數(shù)據(jù)可信?！恫苁舷到y(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)第二版》于 2023年出版，法默應(yīng)邀作為該書(shū)中《腸桿菌科》的作者。主要用于沙門(mén)氏菌的鑒定，根據(jù)情況再補(bǔ)充幾項(xiàng)試驗(yàn)，可以準(zhǔn)確地鑒定腸桿菌科中最常見(jiàn)的 12個(gè)屬。n 不過(guò)，甲型副傷寒血清型是賴氨酸陰性的，沙門(mén)氏菌 IV和 V是氰化鉀陽(yáng)性的。才使我們理解到 25克無(wú)是應(yīng)該在 25克食品中不能帶有 1個(gè)沙門(mén)氏菌。n 關(guān)于食品中是否帶有沙門(mén)氏菌，各個(gè)國(guó)家的標(biāo)準(zhǔn)基本上是一樣的，即： 25克無(wú)。SC+TTBn 選擇性平板分離培養(yǎng)：BS+XLD/HE/顯色培基n 生化試驗(yàn)：鑒定分離出來(lái)的細(xì)菌是否符合沙門(mén)氏菌的生化譜，可采用API 20E等成套生化試劑n 血清學(xué)鑒定：特異性診斷血清鑒定到種。n 2) 選擇菌落數(shù)在 15~150之間的稀釋度，平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之；n 3) 如果所有稀釋度測(cè)試片上的菌落數(shù)都小于 15, 則計(jì)數(shù)稀釋度最低的測(cè)試片上的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之；n 4) 如果所有稀釋度的測(cè)試片上均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以 ()1乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告之；n 5) 如果最高稀釋度的菌落數(shù)大于 150個(gè)時(shí)，計(jì)數(shù)最高稀釋度的測(cè)試片上的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之；n 6) 計(jì)數(shù)菌落數(shù)大于 150個(gè)的測(cè)試片時(shí)，可計(jì)數(shù)一個(gè)或兩個(gè)具有代表性的方格內(nèi)的菌落數(shù)，換算成單個(gè)方格內(nèi)的菌落數(shù)后乘以 20即為測(cè)試片上估算的菌落數(shù) (圓形生長(zhǎng)面積為 20 cm2)。 紅色有氣泡的菌落 確認(rèn)為大腸菌群數(shù)。拿起壓板， 靜置至少 1分鐘以使培養(yǎng)基凝固。樣品 pH的調(diào)節(jié)同大腸菌群 MPN法中樣品 pH的調(diào)節(jié)。結(jié)果報(bào)告單位不同n 原方法： MPN / 100g(mL)n 現(xiàn)方法： MPN / g(mL)大腸菌群 PetrifilmTM測(cè)試片法n PetrifilmTM大腸菌群測(cè)試片 是一種預(yù)先制備好的培養(yǎng)基系統(tǒng)，含有 VRB 培養(yǎng)基，冷水可溶性凝膠和 TTC指示劑，可增強(qiáng)菌落計(jì)數(shù)效果。大腸菌群檢驗(yàn)大腸菌群定義： 一群在 36℃ 條件下培養(yǎng) 24~48小時(shí)能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌。n API 20E生化鑒定試劑盒：刮取 3％氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板上的單個(gè)菌落，用 3％氯化鈉溶液制備成濁度適當(dāng)?shù)募?xì)菌懸浮液，使用API 20E生化鑒定試劑盒鑒定。創(chuàng)傷弧菌在無(wú)氯化鈉、 8％氯化鈉和 10％氯化鈉的胰胨水中不生長(zhǎng)，在 6％氯化鈉的胰胨水中生長(zhǎng)旺盛。1 ℃ 培養(yǎng) 24 h，在加 VP試劑前應(yīng)先觀察動(dòng)力。n 挑取純培養(yǎng)的單個(gè)可疑菌落，轉(zhuǎn)種 3％氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面并穿刺底層， 36 ℃ 177。1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～ 24 h。于 39 ℃ ～ 40 ℃ 或 36 ℃ 177。置 36 ℃ 177。1 ℃ 培養(yǎng)12 h～ 16 h。如為帶殼貝類或甲殼類，則應(yīng)先在自來(lái)水中洗刷外殼并甩干表面水分，然后以無(wú)菌操作打開(kāi)外殼，按上述要求取相應(yīng)部分。 1 ℃ ， 18 h～ 24 h36 ℃177。食源性致病菌檢驗(yàn)技術(shù)及質(zhì)量控制 內(nèi)容 O157 :H7/NM檢驗(yàn)創(chuàng)傷弧菌檢驗(yàn)n 沒(méi)有國(guó)標(biāo)n 食物中毒診斷n 國(guó)外相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)n 美國(guó) FDA BAM網(wǎng)絡(luò)版 第 9章 弧菌 2023n NMKL 食品中致病性弧菌的檢驗(yàn) 1997n 加拿大 魚(yú)和海產(chǎn)品創(chuàng)傷弧菌的分離計(jì)數(shù) MFLP73 1995n 日本食品衛(wèi)生檢查指征 2023n 選擇性增菌液 堿性蛋白胨水n 選擇性分離培養(yǎng)基 硫代硫酸鹽－檸檬酸鹽－膽鹽－蔗糖（ TCBS ）瓊脂 改良纖維二糖 多粘菌素 B多粘菌素 E（ mCPC）瓊脂和纖維二糖 多粘菌素 E（ CC）瓊脂平板 ―探針克隆雜交顯示，兩種平板上均有 95％以上的可疑菌落為創(chuàng)傷弧菌n 引起胃腸炎、傷口感染和原發(fā)性敗血癥n 人類感染是因?yàn)槭秤蒙虬肷氖芪廴竞．a(chǎn)品 ,或是因?yàn)閭诮佑|了帶菌的海水或海洋動(dòng)物n 罹患肝病、血色病的個(gè)體易感者及免疫功能低下者 ,一旦感染創(chuàng)傷弧菌 ,更容易發(fā)生致命的傷口感染和原發(fā)性敗血癥 ,后者的病死率超過(guò) 50％n 創(chuàng)傷弧菌是美國(guó)海產(chǎn)品消費(fèi)引起死亡的首要原因 ,美國(guó)州際貝類衛(wèi)生委員會(huì)規(guī)定 ,收獲后經(jīng)處理的牡蠣中創(chuàng)傷弧菌限量不超過(guò) 30 CFU/g。 1 ℃ ， 18 h～ 24 h39℃ ～ 40 ℃ 或 36 ℃177。貝類取全部?jī)?nèi)容物，包括貝肉和體液；甲殼類取整個(gè)動(dòng)物，或者動(dòng)物的中心部分，包括腸和鰓。增菌n 定性檢測(cè)n 將上述 1:10稀釋液于 36 ℃ 177。n 根據(jù)對(duì)檢樣污染情況的估計(jì)，選擇三個(gè)連續(xù)的適宜稀釋度，每個(gè)稀釋度接種三支含有 9 mL 3％氯化鈉堿性蛋白胨水的試管，每管接種 1 mL。 一支試管劃線一塊平板 。純培養(yǎng)n 挑取三個(gè)或以上的可疑菌落，劃線 3％氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板， 36 ℃ 177。創(chuàng)傷弧菌為革蘭氏陰性，呈棒狀或弧狀。n VP試驗(yàn)：以接種針由 3％氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面挑取少許培養(yǎng)物穿刺 3％氯化鈉 MRVP培養(yǎng)基， 36 ℃ 177。1 ℃ 培養(yǎng) 24 h，觀察液體混濁情況。隔夜培養(yǎng)物進(jìn)行 ONPG試驗(yàn)。如果進(jìn)行定量檢測(cè)，根據(jù)證