【正文】 n 2. 質(zhì)控樣品中的細(xì)菌鑒定到屬，并報(bào)告其學(xué)名。n 2. 質(zhì)控樣品在運(yùn)輸過程中應(yīng)保持 2℃8℃，確保溫度不會(huì)超出其范圍。此次考核由中國 CDC營養(yǎng)食品所組織并制訂考核實(shí)施方案，通過發(fā)放統(tǒng)一制備的質(zhì)控樣品進(jìn)行考核，由中國 CDC營養(yǎng)食品所負(fù)責(zé)對檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)一評價(jià)。2h TSA： 25℃ 培養(yǎng)后 典型 ES：黃色陰性對照 E. coli ATCC 25922：白色菌落鑒定（生化反應(yīng)） 生化 試驗(yàn) 特征黃色素 產(chǎn) 生 ＋氧化 酶 －L賴 氨酸脫 羧 酶 －L鳥 氨酸脫 羧 酶 （＋）L精氨酸雙水解 酶 ＋檸 檬酸水解 (＋ )發(fā) 酵：D山梨醇 （－）L鼠李糖 ＋D蔗糖 ＋D蜜二糖 ＋苦杏仁 甙 ＋注：＋＞ 99%陽性；－＞ 99%陰性；（＋） 90%－ 99%陽性；（－） 90%99%陰性。n 研究證明與其他腸桿菌科細(xì)菌（如沙門菌屬、大腸埃希氏菌等）相比， ES具有較高的耐滲透壓能力。1℃ ， 24 h177。鑒定革蘭氏染色形態(tài)觀察 直接相差鏡檢有氧 42 ℃ 177。 1 ℃ 、 4 h接種 mCCDA和 Skirrow平板或 CFA顯色平板100 r/min振蕩微需氧， 42℃ 177。 1 ℃生長試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn)彎曲菌屬過氧化氫酶試驗(yàn) 萘啶酮酸敏感試驗(yàn)馬尿酸鈉水解試驗(yàn) 吲哚乙酸脂水解試驗(yàn)空腸彎曲菌報(bào) 告挑取可疑菌落，接種哥倫比亞瓊脂平板頭孢菌素敏感試驗(yàn)36 ℃ 177。如 果進(jìn)行定量檢測，根據(jù)證實(shí)為副溶血性 弧菌陽性的試管管數(shù)，查 MPN檢索表， 報(bào)告每 g（ mL）副溶血性弧菌的 MPN值。1 ℃ 培養(yǎng) 24 h，觀察液體混濁情況。1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～ 24 h。分離n 在所有顯示生長的試管或增菌液中用接種環(huán)沾取一環(huán)，于 TCBS平板或科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基平板上劃線分離。如無均質(zhì)器，則將樣品放入無菌乳缽中磨碎，然后放在500 mL的滅菌容器內(nèi)，加 225 mL 3％氯化鈉堿性蛋白胨水，并充分振蕩。不耐熱， 56℃ 、 5分鐘即可殺死，90℃ 、 1分鐘滅活。不同培養(yǎng)基分離效果不同培養(yǎng)基分離效果n CTSMAC：菌落較大，存在較多的山梨醇發(fā)酵陰性的細(xì)菌菌落生長，干擾 O157的檢出 。上清液的吸取應(yīng)盡量完全。每個(gè)樣品換用 1支加長吸管。 結(jié)合時(shí)不要將磁鐵插入到磁板架中。每個(gè)樣品更換樣品更換 1只加樣吸頭，質(zhì)控菌株必須與樣品分開進(jìn)行只加樣吸頭，質(zhì)控菌株必須與樣品分開進(jìn)行，避免交叉污染，避免交叉污染n 取樣前混勻，避開脂肪層與雜質(zhì)，必要時(shí)使用濾網(wǎng)。n 菌液的稀釋應(yīng)注意無菌操作，濁度應(yīng)達(dá)到使用說明的要求。置 LSTMUG肉湯管于長波紫外燈下觀察，陽性對照應(yīng)無熒光產(chǎn)生，陰性對照應(yīng)有熒光；對分解乳糖且無熒光的菌株，在營養(yǎng)瓊脂平板上分純，于 36177。n 劃線時(shí)應(yīng)多次往返，保證分離效果。1℃ 培養(yǎng) 18～ 24h。驗(yàn)證菌株鑒定的結(jié)果驗(yàn)證菌株鑒定的結(jié)果n 沙門氏菌的鑒定結(jié)果應(yīng)當(dāng)具有完整的血清學(xué)分型結(jié)果。再按照 H抗原分型。按理，商家應(yīng)當(dāng)向雇主提供《細(xì)菌鑒定編碼表》，該表的內(nèi)容應(yīng)當(dāng)與細(xì)菌的生化特性表一致。生化鑒別試驗(yàn)生化鑒別試驗(yàn)n 根據(jù)以上所述，可將以上五項(xiàng)生化試驗(yàn)編制成一份腸桿菌科常見屬、種生化試驗(yàn)簡化診斷表。含有 5~10個(gè)細(xì)菌的標(biāo)本內(nèi)獲得陽性結(jié)果。BPWn 選擇性增菌：使沙門氏菌優(yōu)勢繁殖，其它細(xì)菌受到抑制 。 判讀培養(yǎng) 24h ? 2h后應(yīng)立即計(jì)數(shù)，可目測、用標(biāo)準(zhǔn)菌落計(jì)數(shù)器、顯微鏡、或 PetrifilmTM自動(dòng)判讀儀來計(jì)數(shù)。 檢樣25g(ml)樣品＋ 225ml稀釋液 ,均質(zhì)↓稀釋↓接種 PetrifilmTM大腸菌群測試片↓培養(yǎng)↓ 36?1?C 24h ? 2h 計(jì)數(shù)紅色帶氣泡的菌落↓計(jì)算菌落總數(shù)↓報(bào)告樣品制備按大腸菌群 MPN法的樣品制備方法進(jìn)行。如果進(jìn)行定量檢測，根據(jù)證實(shí)為創(chuàng)傷弧菌陽性的試管管數(shù)，查最可能數(shù)（MPN）檢索表，報(bào)告每 g（ mL）創(chuàng)傷弧菌的 MPN值。1 ℃ 培養(yǎng) 24 h，觀察液體混濁情況。創(chuàng)傷弧菌為革蘭氏陰性，呈棒狀或弧狀。 一支試管劃線一塊平板 。增菌n 定性檢測n 將上述 1:10稀釋液于 36 ℃ 177。 1 ℃ ， 18 h～ 24 h39℃ ～ 40 ℃ 或 36 ℃177。 1 ℃ ， 18 h～ 24 h36 ℃177。1 ℃ 培養(yǎng)12 h～ 16 h。于 39 ℃ ～ 40 ℃ 或 36 ℃ 177。n 挑取純培養(yǎng)的單個(gè)可疑菌落，轉(zhuǎn)種 3％氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面并穿刺底層， 36 ℃ 177。創(chuàng)傷弧菌在無氯化鈉、 8％氯化鈉和 10％氯化鈉的胰胨水中不生長，在 6％氯化鈉的胰胨水中生長旺盛。大腸菌群檢驗(yàn)大腸菌群定義： 一群在 36℃ 條件下培養(yǎng) 24~48小時(shí)能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌。樣品 pH的調(diào)節(jié)同大腸菌群 MPN法中樣品 pH的調(diào)節(jié)。 紅色有氣泡的菌落 確認(rèn)為大腸菌群數(shù)。SC+TTBn 選擇性平板分離培養(yǎng)：BS+XLD/HE/顯色培基n 生化試驗(yàn)：鑒定分離出來的細(xì)菌是否符合沙門氏菌的生化譜，可采用API 20E等成套生化試劑n 血清學(xué)鑒定：特異性診斷血清鑒定到種。才使我們理解到 25克無是應(yīng)該在 25克食品中不能帶有 1個(gè)沙門氏菌。主要用于沙門氏菌的鑒定，根據(jù)情況再補(bǔ)充幾項(xiàng)試驗(yàn)，可以準(zhǔn)確地鑒定腸桿菌科中最常見的 12個(gè)屬。使用者應(yīng)該對該表進(jìn)行審查，認(rèn)為編碼表的數(shù)據(jù)可信。如果這個(gè)血清型具有K抗原，一般在 O抗原分群以后再檢查。如果只鑒定到 O群，沒有得出抗原的分型結(jié)果，往往不是沙門氏菌。同時(shí)做陽性及陰性對照。n 涂布時(shí)應(yīng)適當(dāng)稀釋。1℃ 培養(yǎng) 18～ 24h，并進(jìn)行下列鑒定。二、免疫磁珠捕獲法二、免疫磁珠捕獲法操作步驟操作步驟n 1. 增菌：同常規(guī)法。取樣前混勻，避開脂肪層與雜質(zhì)，必要時(shí)使用濾網(wǎng)。 用手轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)應(yīng)輕輕顛倒 Eppendorff管架，不可劇烈搖動(dòng)。n 免疫磁珠的滑落：某些樣品特別是那些富含脂肪的樣品，其磁珠積聚物易于滑落到管底。 使用多塊磁珠分離裝置時(shí)，磁鐵與磁鐵應(yīng)遠(yuǎn)離放置。n CHROMagar O157：較多的非 O157菌落生長，菌落較大，影響 O157菌的檢出n 改良 CHROMagar O157：非 O157細(xì)菌生長較少且菌落相對局限， O157菌落特征性明顯。對低溫及高濃度氯代鈉抵抗力甚強(qiáng)。增菌n 定性檢測n 將上述 1:10稀釋液于 36 ℃ 177。一支試管劃線一塊平板。初步鑒定n 氧化酶試驗(yàn)：挑選純培養(yǎng)的單個(gè)菌落進(jìn) 行氧化酶試驗(yàn)，副溶血性弧菌為氧化酶陽性。副溶血性弧菌在無氯化鈉和 10％氯化鈉的胰胨水中不生長或微弱生長，在 7％氯化鈉的胰胨水中生長旺盛?？漳c彎曲菌檢驗(yàn)空腸彎曲菌分類地位螺菌科彎曲菌屬空腸彎曲菌芬奈爾彎曲菌豬彎曲菌結(jié)腸彎曲菌同性戀彎曲菌短暫彎曲菌胎兒彎曲菌海鷗彎曲菌胎兒亞種 口腔亞種等等13個(gè)種形態(tài)與染色n 革蘭陰性彎曲小桿菌，多種形態(tài)，有螺旋形、彎曲桿狀、 S形、逗點(diǎn)狀、飛翔的海鷗形，陳舊培養(yǎng)物中可變成球形。 1 ℃ 4 h42 ℃ 177。1℃ 、 24 h微需氧 42 ℃ 177。1 ℃生長實(shí)驗(yàn)氧化酶試驗(yàn) 結(jié)果相符合者，確定為彎曲菌屬過氧化氫酶試驗(yàn)萘啶酮酸敏感試驗(yàn)頭孢菌素敏感試驗(yàn)馬尿酸鹽水解試驗(yàn)結(jié)果相符者為空腸彎曲菌報(bào) 告 可疑菌落微需氧 25 ℃ 177。2h挑取 藍(lán)綠色菌落1mL + mLSTVm 10mL44℃ 177。加入 M 的 NaCl在保證 ES良好生長的同時(shí)，可以有效地抑制上述其他細(xì)菌的生長。商業(yè)生化鑒定系統(tǒng)的應(yīng)用n 推薦使用的 ES生化鑒定方法有很多，主要有 API 20E， ID 32E， Biolog GN2 MicroPlate， VITEK GNI+等。質(zhì)控樣品制備n 1. 質(zhì)控樣品是用經(jīng)輻照滅菌的奶粉（需經(jīng)檢驗(yàn)確認(rèn)奶粉中無本底細(xì)菌）做原料，再混合足量的 14種細(xì)菌純培養(yǎng)物。n 菌株運(yùn)送應(yīng)按照國際民航組織《危險(xiǎn)物品航空安全運(yùn)輸技術(shù)細(xì)則》規(guī)定的生物材料等級 B即 UN3373的要求執(zhí)行。質(zhì)控結(jié)果的評價(jià)n 中國 CDC營養(yǎng)食品所負(fù)責(zé)將各檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)的上報(bào)數(shù)據(jù)進(jìn)行綜合統(tǒng)計(jì)處理，對質(zhì)控結(jié)果作出分析評價(jià)。質(zhì)控結(jié)果報(bào)告內(nèi)容應(yīng)包括細(xì)菌檢驗(yàn)結(jié)果（附表一）和檢驗(yàn)記錄及詳細(xì)數(shù)據(jù)等。質(zhì)控樣品運(yùn)輸n 1. 質(zhì)控樣品應(yīng)密封完整，確保其在運(yùn)輸過程中不會(huì)受到外來污染。n 本次質(zhì)控范圍為承擔(dān) 2023年全國食源性致病菌監(jiān)測工作任務(wù)的全國 31個(gè)省、直轄市、自治區(qū)以及新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)的檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)。1℃ 24 h177。4h阪崎腸桿菌檢驗(yàn)程序前增菌和增菌mLSTVm，即在大腸菌群增菌肉湯 LST中另加入適量的N