【正文】 n 2. 質控樣品中的細菌鑒定到屬，并報告其學名。n 2. 質控樣品在運輸過程中應保持 2℃8℃，確保溫度不會超出其范圍。此次考核由中國 CDC營養(yǎng)食品所組織并制訂考核實施方案，通過發(fā)放統(tǒng)一制備的質控樣品進行考核，由中國 CDC營養(yǎng)食品所負責對檢驗結果進行統(tǒng)一評價。2h TSA： 25℃ 培養(yǎng)后 典型 ES：黃色陰性對照 E. coli ATCC 25922：白色菌落鑒定（生化反應） 生化 試驗 特征黃色素 產 生 ＋氧化 酶 －L賴 氨酸脫 羧 酶 －L鳥 氨酸脫 羧 酶 （＋）L精氨酸雙水解 酶 ＋檸 檬酸水解 (＋ )發(fā) 酵：D山梨醇 （－）L鼠李糖 ＋D蔗糖 ＋D蜜二糖 ＋苦杏仁 甙 ＋注：＋＞ 99%陽性；－＞ 99%陰性；（＋） 90%－ 99%陽性；（－） 90%99%陰性。n 研究證明與其他腸桿菌科細菌（如沙門菌屬、大腸埃希氏菌等）相比， ES具有較高的耐滲透壓能力。1℃ ， 24 h177。鑒定革蘭氏染色形態(tài)觀察 直接相差鏡檢有氧 42 ℃ 177。 1 ℃ 、 4 h接種 mCCDA和 Skirrow平板或 CFA顯色平板100 r/min振蕩微需氧， 42℃ 177。 1 ℃生長試驗氧化酶試驗彎曲菌屬過氧化氫酶試驗 萘啶酮酸敏感試驗馬尿酸鈉水解試驗 吲哚乙酸脂水解試驗空腸彎曲菌報 告挑取可疑菌落，接種哥倫比亞瓊脂平板頭孢菌素敏感試驗36 ℃ 177。如 果進行定量檢測，根據證實為副溶血性 弧菌陽性的試管管數，查 MPN檢索表， 報告每 g（ mL）副溶血性弧菌的 MPN值。1 ℃ 培養(yǎng) 24 h，觀察液體混濁情況。1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～ 24 h。分離n 在所有顯示生長的試管或增菌液中用接種環(huán)沾取一環(huán)，于 TCBS平板或科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基平板上劃線分離。如無均質器，則將樣品放入無菌乳缽中磨碎，然后放在500 mL的滅菌容器內，加 225 mL 3％氯化鈉堿性蛋白胨水，并充分振蕩。不耐熱， 56℃ 、 5分鐘即可殺死，90℃ 、 1分鐘滅活。不同培養(yǎng)基分離效果不同培養(yǎng)基分離效果n CTSMAC：菌落較大，存在較多的山梨醇發(fā)酵陰性的細菌菌落生長，干擾 O157的檢出 。上清液的吸取應盡量完全。每個樣品換用 1支加長吸管。 結合時不要將磁鐵插入到磁板架中。每個樣品更換樣品更換 1只加樣吸頭，質控菌株必須與樣品分開進行只加樣吸頭，質控菌株必須與樣品分開進行，避免交叉污染，避免交叉污染n 取樣前混勻，避開脂肪層與雜質，必要時使用濾網。n 菌液的稀釋應注意無菌操作，濁度應達到使用說明的要求。置 LSTMUG肉湯管于長波紫外燈下觀察，陽性對照應無熒光產生，陰性對照應有熒光；對分解乳糖且無熒光的菌株，在營養(yǎng)瓊脂平板上分純，于 36177。n 劃線時應多次往返，保證分離效果。1℃ 培養(yǎng) 18～ 24h。驗證菌株鑒定的結果驗證菌株鑒定的結果n 沙門氏菌的鑒定結果應當具有完整的血清學分型結果。再按照 H抗原分型。按理，商家應當向雇主提供《細菌鑒定編碼表》，該表的內容應當與細菌的生化特性表一致。生化鑒別試驗生化鑒別試驗n 根據以上所述，可將以上五項生化試驗編制成一份腸桿菌科常見屬、種生化試驗簡化診斷表。含有 5~10個細菌的標本內獲得陽性結果。BPWn 選擇性增菌：使沙門氏菌優(yōu)勢繁殖，其它細菌受到抑制 。 判讀培養(yǎng) 24h ? 2h后應立即計數，可目測、用標準菌落計數器、顯微鏡、或 PetrifilmTM自動判讀儀來計數。 檢樣25g(ml)樣品＋ 225ml稀釋液 ,均質↓稀釋↓接種 PetrifilmTM大腸菌群測試片↓培養(yǎng)↓ 36?1?C 24h ? 2h 計數紅色帶氣泡的菌落↓計算菌落總數↓報告樣品制備按大腸菌群 MPN法的樣品制備方法進行。如果進行定量檢測，根據證實為創(chuàng)傷弧菌陽性的試管管數，查最可能數（MPN）檢索表，報告每 g（ mL）創(chuàng)傷弧菌的 MPN值。1 ℃ 培養(yǎng) 24 h，觀察液體混濁情況。創(chuàng)傷弧菌為革蘭氏陰性，呈棒狀或弧狀。 一支試管劃線一塊平板 。增菌n 定性檢測n 將上述 1:10稀釋液于 36 ℃ 177。 1 ℃ ， 18 h～ 24 h39℃ ～ 40 ℃ 或 36 ℃177。 1 ℃ ， 18 h～ 24 h36 ℃177。1 ℃ 培養(yǎng)12 h～ 16 h。于 39 ℃ ～ 40 ℃ 或 36 ℃ 177。n 挑取純培養(yǎng)的單個可疑菌落，轉種 3％氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面并穿刺底層， 36 ℃ 177。創(chuàng)傷弧菌在無氯化鈉、 8％氯化鈉和 10％氯化鈉的胰胨水中不生長，在 6％氯化鈉的胰胨水中生長旺盛。大腸菌群檢驗大腸菌群定義： 一群在 36℃ 條件下培養(yǎng) 24~48小時能發(fā)酵乳糖、產酸產氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌。樣品 pH的調節(jié)同大腸菌群 MPN法中樣品 pH的調節(jié)。 紅色有氣泡的菌落 確認為大腸菌群數。SC+TTBn 選擇性平板分離培養(yǎng)：BS+XLD/HE/顯色培基n 生化試驗：鑒定分離出來的細菌是否符合沙門氏菌的生化譜，可采用API 20E等成套生化試劑n 血清學鑒定：特異性診斷血清鑒定到種。才使我們理解到 25克無是應該在 25克食品中不能帶有 1個沙門氏菌。主要用于沙門氏菌的鑒定，根據情況再補充幾項試驗，可以準確地鑒定腸桿菌科中最常見的 12個屬。使用者應該對該表進行審查，認為編碼表的數據可信。如果這個血清型具有K抗原，一般在 O抗原分群以后再檢查。如果只鑒定到 O群，沒有得出抗原的分型結果，往往不是沙門氏菌。同時做陽性及陰性對照。n 涂布時應適當稀釋。1℃ 培養(yǎng) 18～ 24h，并進行下列鑒定。二、免疫磁珠捕獲法二、免疫磁珠捕獲法操作步驟操作步驟n 1. 增菌：同常規(guī)法。取樣前混勻，避開脂肪層與雜質，必要時使用濾網。 用手轉動時應輕輕顛倒 Eppendorff管架，不可劇烈搖動。n 免疫磁珠的滑落：某些樣品特別是那些富含脂肪的樣品，其磁珠積聚物易于滑落到管底。 使用多塊磁珠分離裝置時，磁鐵與磁鐵應遠離放置。n CHROMagar O157：較多的非 O157菌落生長，菌落較大，影響 O157菌的檢出n 改良 CHROMagar O157：非 O157細菌生長較少且菌落相對局限， O157菌落特征性明顯。對低溫及高濃度氯代鈉抵抗力甚強。增菌n 定性檢測n 將上述 1:10稀釋液于 36 ℃ 177。一支試管劃線一塊平板。初步鑒定n 氧化酶試驗：挑選純培養(yǎng)的單個菌落進 行氧化酶試驗，副溶血性弧菌為氧化酶陽性。副溶血性弧菌在無氯化鈉和 10％氯化鈉的胰胨水中不生長或微弱生長，在 7％氯化鈉的胰胨水中生長旺盛。空腸彎曲菌檢驗空腸彎曲菌分類地位螺菌科彎曲菌屬空腸彎曲菌芬奈爾彎曲菌豬彎曲菌結腸彎曲菌同性戀彎曲菌短暫彎曲菌胎兒彎曲菌海鷗彎曲菌胎兒亞種 口腔亞種等等13個種形態(tài)與染色n 革蘭陰性彎曲小桿菌，多種形態(tài)，有螺旋形、彎曲桿狀、 S形、逗點狀、飛翔的海鷗形，陳舊培養(yǎng)物中可變成球形。 1 ℃ 4 h42 ℃ 177。1℃ 、 24 h微需氧 42 ℃ 177。1 ℃生長實驗氧化酶試驗 結果相符合者，確定為彎曲菌屬過氧化氫酶試驗萘啶酮酸敏感試驗頭孢菌素敏感試驗馬尿酸鹽水解試驗結果相符者為空腸彎曲菌報 告 可疑菌落微需氧 25 ℃ 177。2h挑取 藍綠色菌落1mL + mLSTVm 10mL44℃ 177。加入 M 的 NaCl在保證 ES良好生長的同時，可以有效地抑制上述其他細菌的生長。商業(yè)生化鑒定系統(tǒng)的應用n 推薦使用的 ES生化鑒定方法有很多，主要有 API 20E， ID 32E， Biolog GN2 MicroPlate， VITEK GNI+等。質控樣品制備n 1. 質控樣品是用經輻照滅菌的奶粉（需經檢驗確認奶粉中無本底細菌）做原料，再混合足量的 14種細菌純培養(yǎng)物。n 菌株運送應按照國際民航組織《危險物品航空安全運輸技術細則》規(guī)定的生物材料等級 B即 UN3373的要求執(zhí)行。質控結果的評價n 中國 CDC營養(yǎng)食品所負責將各檢驗機構的上報數據進行綜合統(tǒng)計處理，對質控結果作出分析評價。質控結果報告內容應包括細菌檢驗結果（附表一）和檢驗記錄及詳細數據等。質控樣品運輸n 1. 質控樣品應密封完整，確保其在運輸過程中不會受到外來污染。n 本次質控范圍為承擔 2023年全國食源性致病菌監(jiān)測工作任務的全國 31個省、直轄市、自治區(qū)以及新疆生產建設兵團的檢驗機構。1℃ 24 h177。4h阪崎腸桿菌檢驗程序前增菌和增菌mLSTVm，即在大腸菌群增菌肉湯 LST中另加入適量的N