【正文】 EC+n） 225mln 快速篩選 陰性 n 36177。于36177。1℃ 培養(yǎng) 18～ 24h，觀察菌落。 n 增菌后的肉湯在取樣前，應(yīng)輕微搖晃混勻。大部分非O157 ，仍有 6%不發(fā)酵山梨醇，它們與摩根氏菌和哈夫尼亞菌一樣在 TCSMAC上表現(xiàn)為與 O157相同的菌落特征。 在 TSI瓊脂中，典型菌株為斜面與底層均呈陽性反應(yīng)呈黃色，產(chǎn)氣或不產(chǎn)氣，不產(chǎn)生 H2S。血清凝集試驗應(yīng)做生理鹽水對照。n 進(jìn)行生化試驗時應(yīng)是用新鮮培養(yǎng)物（ 24h）。在漩渦混合器上輕輕振蕩，用開蓋器打開每個 Eppendorff管的蓋子，每管加入 20μL　 O157免疫磁珠懸液。每個。對照同時做。 注意室內(nèi)溫度 ，保證結(jié)合時間。n 捕獲：將磁板插入到磁板架中濃縮磁珠。如吸取的上清液內(nèi)含有磁珠，則應(yīng)將其放回到 Eppendorff管中，并重復(fù) 2. 4步驟。如果在后續(xù)的洗滌過程中也這樣做的話，脂肪的影響將減小，也可達(dá)到充分捕獲的目的。 吸取上清液至磁珠聚集物處時，應(yīng)放慢速度。 n n 用漩渦混合器將免疫磁珠混勻，用加樣器各取 50μL免疫磁珠懸液分別轉(zhuǎn)移至 CTSMAC平板和改良 CHROMagar O157顯色瓊脂平板一側(cè)，然后用涂布棒將免疫磁珠涂布平板的一半，再用接種環(huán)劃線接種平板的另一半。n 菌落識別、初步生化試驗 、鑒定 同常規(guī)法。該菌存在于近海的海水、海底沉積物和魚類、貝殼等海產(chǎn)品中。對酸敏感，在 2%醋酸中或 50%的食醋中 1分鐘即可死亡。樣品制備n 冷凍樣品應(yīng)在 45 ℃ 以下不超過 15min或在 2 ℃ ～ 5 ℃ 不超過 18 h解凍，若不能及時檢驗，應(yīng)放于－ 15 ℃ 左右保存；非冷凍而易腐的樣品應(yīng)盡可能及時檢驗，若不能及時檢驗，應(yīng)置 2 ℃ ～ 5 ℃ 冰箱保存，在 24 h內(nèi)檢驗。n 以無菌操作取檢樣 25 g（ mL），加入 3％氯化鈉堿性蛋白胨水 225 mL，用旋轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器以 8 000 r/min均質(zhì) 1 min，或拍擊式均質(zhì)器拍擊 2 min，制備成 1:10的均勻稀釋液。n 定量檢測n 用滅菌吸管吸取 1:10稀釋液 1 mL，注入含有 9 mL 3％氯化鈉堿性蛋白胨水的試管內(nèi)，振搖試管混勻，制備 1:100的稀釋液。1 ℃ 恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng) 8 h～ 18 h。1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～ 24 h。TCBS瓊脂上面的副溶血性弧菌TCBS瓊脂上面的副溶血性弧菌可以直接計數(shù)的副溶血性弧菌顯色培養(yǎng)基n 純培養(yǎng)n 挑取 3個或 以上的可疑 菌落，劃線 3％氯化鈉 胰蛋白胨大 豆瓊脂平板， 36 ℃ 177。副溶血性弧菌為革蘭氏陰性，呈棒狀、弧狀、卵圓狀等多形態(tài)，無芽胞，有鞭毛。n 嗜鹽性試驗：挑取純培養(yǎng)的單個可疑菌落，分別接種于不同氯化鈉濃度的胰胨水， 36℃ 177。1 ℃ 培養(yǎng) 24 h～ 48 h后觀察結(jié)果。n H２ S（－）、 VP（－）、動力（ ＋ ）n 甘露醇（＋）、賴氨酸（＋）、ONPG （－）報告n 當(dāng)檢出的可疑菌落生化學(xué)性狀符合表 1要 求時，可以報告檢出副溶血性弧菌。 培養(yǎng)特性n 微需氧： 5％氧氣、 10％二氧化碳、85％氮氣；n 最適生長溫度： 42～ 43℃ ；n 營養(yǎng)要求高，含血液和血清的培養(yǎng)基上生長良好，液體培養(yǎng)基混濁生長。 1 ℃生長試驗有氧 42 ℃ 177。 1 ℃ 24 h～ 48 h42 ℃ 177。1 ℃ 、 24 h100 r/min微需氧振蕩， 36 ℃ 177。1℃ ；n 時間 24, 48h。1℃n 4～ 5h分離 mCCDAn 基礎(chǔ)培養(yǎng)基n 營養(yǎng)成分；n 中和代謝產(chǎn)物，維持生長環(huán)境的成分；n 木炭n 抗生素n 頭孢哌酮鈉 32mg 3代頭孢，廣泛抗菌n 兩性霉素 B 10mg 抑制霉菌、酵母菌n 利福平 10mg 廣譜抗菌藥 主要用于抗結(jié)核分離 Skirrown 基礎(chǔ)培養(yǎng)基n FBP溶液n 丙酮酸鈉n 焦亞硫酸鈉n 硫酸鈉鐵n 抗生素溶液n 頭孢哌酮n 兩性霉素Ｂn 利福平n 無菌脫纖維綿羊血分離培養(yǎng)基 CFA瓊脂n 為法國梅里埃產(chǎn)品n 僅有成品平板出售n 購買周期太長（下訂單現(xiàn)做，然后發(fā)貨，一般要 2個月）n 保質(zhì)期短，一般收到平板就快過期了。動力觀察 螺旋狀運動 b氧化酶試驗 陽性微需氧 25℃ 生長試驗不生長有氧 42℃ 生長試驗 不生長a 有些菌株形態(tài)不典型； b 有些菌株運動不明顯空腸彎曲菌的鑒定 特征 空腸彎曲菌結(jié)腸彎曲菌紅嘴鷗彎曲菌烏普薩拉彎曲菌過氧化氫酶試驗 ＋ ＋ ＋ －或微弱馬尿酸鈉水解試驗 ＋ － － －吲哚乙酸酯水解試驗 ＋ ＋ － +頭孢菌素敏感試驗 R R R S萘啶酮酸敏感試驗 Sa Sa R/ Sb S注：＋ 陽性；－陰性； R抗性； S敏感a 空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌對萘啶酮酸的耐藥性呈現(xiàn)增長趨勢。阪崎腸桿菌檢驗程序阪崎腸桿菌檢驗阪崎腸桿菌檢驗程序報 告生化鑒定挑取黃色菌落DFI瓊脂36℃ 177。2h檢樣100 g/mL+稀釋液 900 mL36℃ 177。4h阪崎腸桿菌檢驗程序前增菌和增菌mLSTVm，即在大腸菌群增菌肉湯 LST中另加入適量的NaCl和 Vm 。而較高的生長溫度可以進(jìn)一步抑制其他細(xì)菌的生長。1℃ 24 h177。n 在腸桿菌的生化鑒定中使用最廣泛的是API 20E和 Vitek GNI+。n 本次質(zhì)控范圍為承擔(dān) 2023年全國食源性致病菌監(jiān)測工作任務(wù)的全國 31個省、直轄市、自治區(qū)以及新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)的檢驗機(jī)構(gòu)。n 3. 質(zhì)控樣品應(yīng)經(jīng)過穩(wěn)定性測試，于 2 ℃5 ℃ 放置，分別于 1周、 2周、 1個月后，隨機(jī)抽取 5種質(zhì)控樣品檢驗確認(rèn)，經(jīng)驗證樣品中所含食源性致病菌種類在放置前后沒有變化才可作為質(zhì)控樣品。質(zhì)控樣品運輸n 1. 質(zhì)控樣品應(yīng)密封完整，確保其在運輸過程中不會受到外來污染。n 2. 檢驗機(jī)構(gòu)應(yīng)在收到質(zhì)控樣品后 30天內(nèi)進(jìn)行檢驗。質(zhì)控結(jié)果報告內(nèi)容應(yīng)包括細(xì)菌檢驗結(jié)果（附表一）和檢驗記錄及詳細(xì)數(shù)據(jù)等。謝謝大家！謝謝觀看 /歡迎下載BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAITH。質(zhì)控結(jié)果的評價n 中國 CDC營養(yǎng)食品所負(fù)責(zé)將各檢驗機(jī)構(gòu)的上報數(shù)據(jù)進(jìn)行綜合統(tǒng)計處理，對質(zhì)控結(jié)果作出分析評價。n 4. 檢驗過程中應(yīng)注意生物安全防護(hù)，實驗完成后應(yīng)對質(zhì)控樣品進(jìn)行無害化處理。n 菌株運送應(yīng)按照國際民航組織《危險物品航空安全運輸技術(shù)細(xì)則》規(guī)定的生物材料等級 B即 UN3373的要求執(zhí)行。每個檢驗機(jī)構(gòu)一個編號，編號由省市代碼加阿拉伯?dāng)?shù)字組成，每個檢驗機(jī)構(gòu)兩支平行質(zhì)控樣品，每支 5 g，一支用于檢驗，一支為備份。質(zhì)控樣品制備n 1. 質(zhì)控樣品是用經(jīng)輻照滅菌的奶粉（需經(jīng)檢驗確認(rèn)奶粉中無本底細(xì)菌）做原料，再混合足量的 14種細(xì)菌純培養(yǎng)物。總結(jié)分析檢測結(jié)果，以達(dá)到促進(jìn)提高檢驗人員的理論和檢驗技術(shù)水平，并對實驗室進(jìn)行綜和評價的目的。商業(yè)生化鑒定系統(tǒng)的應(yīng)用n 推薦使用的 ES生化鑒定方法有很多，主要有 API 20E， ID 32E， Biolog GN2 MicroPlate， VITEK GNI+等。n 顯色培養(yǎng)基對 ES的選擇性較好， ES形成的特征性菌落易于辨認(rèn)，以 DFI為例：1. 硫化氫指示劑可以區(qū)分 ES和產(chǎn)生少量 α 葡萄糖苷酶但 H2S陽性菌株（如普通變形桿菌）。加入 M 的 NaCl在保證 ES良好生長的同時，可以有效地抑制上述其他細(xì)菌的生長。2h前增菌選擇性增菌選擇性分離生化鑒定TSA25℃ 177。2h挑取 藍(lán)綠色菌落1mL + mLSTVm 10mL44℃ 177?？諒澗甑谋４鎛 分離已經(jīng)鑒定的菌株應(yīng)在血平板上經(jīng) 2次純化，立即保存于 20％甘油的 布氏肉湯菌種保存管中，置于－ 80 ℃ 保存；n 冷凍干燥保存。1 ℃生長實驗氧化酶試驗 結(jié)果相符合者，確定為彎曲菌屬過氧化氫酶試驗萘啶酮酸敏感試驗頭孢菌素敏感試驗馬尿酸鹽水解試驗結(jié)果相符者為空腸彎曲菌報 告 可疑菌落微需氧 25 ℃ 177。n 微需氧條件：n 5% O2 10%CO2 85N2彎曲菌