【正文】 實(shí)為創(chuàng)傷弧菌陽(yáng)性的試管管數(shù)，查最可能數(shù)（MPN）檢索表，報(bào)告每 g（ mL）創(chuàng)傷弧菌的 MPN值。 還有就是 LST更容易觀察。 檢樣25g(ml)樣品＋ 225ml稀釋液 ,均質(zhì)↓稀釋↓接種 PetrifilmTM大腸菌群測(cè)試片↓培養(yǎng)↓ 36?1?C 24h ? 2h 計(jì)數(shù)紅色帶氣泡的菌落↓計(jì)算菌落總數(shù)↓報(bào)告樣品制備按大腸菌群 MPN法的樣品制備方法進(jìn)行。將 PetrifilmTM大腸菌群測(cè)試片置于平坦實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，揭開(kāi)上層膜，用吸管吸取 1mL樣液垂直滴加在測(cè)試片的中央， 將上層膜緩慢蓋下，避免氣泡產(chǎn)生和上層膜直接落下 ，把壓板（平面底朝下）放置在上層膜中央，輕輕地壓下，使樣液均勻覆蓋于圓形的培養(yǎng)面積上，切勿扭轉(zhuǎn)壓板。 判讀培養(yǎng) 24h ? 2h后應(yīng)立即計(jì)數(shù)，可目測(cè)、用標(biāo)準(zhǔn)菌落計(jì)數(shù)器、顯微鏡、或 PetrifilmTM自動(dòng)判讀儀來(lái)計(jì)數(shù)。結(jié)果報(bào)告n 1) 選取菌落數(shù)在 15~150之間的測(cè)試片作為計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn) 。BPWn 選擇性增菌：使沙門(mén)氏菌優(yōu)勢(shì)繁殖，其它細(xì)菌受到抑制 。沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)方法的步驟沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)方法的步驟n 沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)方法的步驟是：n 增菌培養(yǎng)n 接種鑒別培養(yǎng)基，分離菌落n 生化試驗(yàn)，鑒定到屬和種；也可以用噬菌體試驗(yàn)鑒定到屬n 血清學(xué)分型增菌培養(yǎng)增菌培養(yǎng)n 首先是增菌培養(yǎng)基的靈敏度。含有 5~10個(gè)細(xì)菌的標(biāo)本內(nèi)獲得陽(yáng)性結(jié)果。沙門(mén)氏菌屬和有關(guān)細(xì)菌的鑒別沙門(mén)氏菌屬和有關(guān)細(xì)菌的鑒別 1n 沙門(mén)氏菌是賴氨酸陽(yáng)性、氰化鉀和 酶陰性的；而弗勞地氏檸檬酸桿菌群則是賴氨酸陰性、氰化鉀和 。生化鑒別試驗(yàn)生化鑒別試驗(yàn)n 根據(jù)以上所述，可將以上五項(xiàng)生化試驗(yàn)編制成一份腸桿菌科常見(jiàn)屬、種生化試驗(yàn)簡(jiǎn)化診斷表。特別是美國(guó)學(xué)者法默 （Farmer, III）于 1986年提出了包括腸桿菌科細(xì)菌近 100個(gè)種的 47項(xiàng)生化特性。按理，商家應(yīng)當(dāng)向雇主提供《細(xì)菌鑒定編碼表》，該表的內(nèi)容應(yīng)當(dāng)與細(xì)菌的生化特性表一致。補(bǔ)充生化試驗(yàn)補(bǔ)充生化試驗(yàn)n 試驗(yàn)者對(duì)于所獲得的生化試驗(yàn)結(jié)果有懷疑時(shí)，可用手工方法進(jìn)行補(bǔ)充試驗(yàn)，直至認(rèn)為試驗(yàn)結(jié)果可信為止。再按照 H抗原分型。應(yīng)當(dāng)不要用灼熱的接種環(huán)去挑取血清。驗(yàn)證菌株鑒定的結(jié)果驗(yàn)證菌株鑒定的結(jié)果n 沙門(mén)氏菌的鑒定結(jié)果應(yīng)當(dāng)具有完整的血清學(xué)分型結(jié)果。1℃ 18～ 24h n 陽(yáng)性 報(bào)告n CTSMAC平板和改良 CHROMagar O157顯色瓊脂平板n 36177。1℃ 培養(yǎng) 18～ 24h。必要時(shí)將混合菌落分純。n 劃線時(shí)應(yīng)多次往返，保證分離效果。3. 初步生化試驗(yàn)n 在 CTSMAC和改良 CHROMagar O157顯色瓊脂平板上挑取 5～ 10個(gè)典型或可疑菌落，分別接種 TSI瓊脂，同時(shí)接種 MUGLST肉湯，于36177。置 LSTMUG肉湯管于長(zhǎng)波紫外燈下觀察，陽(yáng)性對(duì)照應(yīng)無(wú)熒光產(chǎn)生，陰性對(duì)照應(yīng)有熒光；對(duì)分解乳糖且無(wú)熒光的菌株，在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上分純，于 36177。對(duì)于 H7因子血清不凝集者，應(yīng)穿刺接種半固體瓊脂管，檢查動(dòng)力，經(jīng)連續(xù)傳代 3次，動(dòng)力試驗(yàn)陰性， H7因子血清凝集陰性者，確定為無(wú)動(dòng)力株。n 菌液的稀釋?xiě)?yīng)注意無(wú)菌操作，濁度應(yīng)達(dá)到使用說(shuō)明的要求。n 磁珠在加入前在混旋器上短暫混勻，不可劇烈震蕩，磁珠在加入前在混旋器上短暫混勻，不可劇烈震蕩，避免產(chǎn)生泡沫。每個(gè)樣品更換樣品更換 1只加樣吸頭，質(zhì)控菌株必須與樣品分開(kāi)進(jìn)行只加樣吸頭，質(zhì)控菌株必須與樣品分開(kāi)進(jìn)行，避免交叉污染，避免交叉污染n 取樣前混勻，避開(kāi)脂肪層與雜質(zhì)，必要時(shí)使用濾網(wǎng)。加樣后立即混勻。 結(jié)合時(shí)不要將磁鐵插入到磁板架中。在 3min內(nèi)不斷地傾斜磁板架，確保懸液中和蓋子上的免疫磁珠全部被收集起來(lái)，此時(shí)，在 Eppendorff管壁中間明顯可見(jiàn)的圓形或橢圓形棕色聚物。每個(gè)樣品換用 1支加長(zhǎng)吸管。n ：從磁板架上移走磁板，在每個(gè)Eppendorff中加入 1mL PBSTween20洗液，轉(zhuǎn)動(dòng)磁板架 3次以上，洗滌免疫磁珠混合物。上清液的吸取應(yīng)盡量完全。待瓊脂表面水分完全吸收后，翻轉(zhuǎn)平板，于 36177。不同培養(yǎng)基分離效果不同培養(yǎng)基分離效果n CTSMAC：菌落較大，存在較多的山梨醇發(fā)酵陰性的細(xì)菌菌落生長(zhǎng)，干擾 O157的檢出 。在 37℃ 、含氯化鈉 3～ 4%的環(huán)境中生長(zhǎng)最好。不耐熱， 56℃ 、 5分鐘即可殺死，90℃ 、 1分鐘滅活。n 魚(yú)類(lèi)和頭足類(lèi)動(dòng)物取表面組織、腸或鰓。如無(wú)均質(zhì)器，則將樣品放入無(wú)菌乳缽中磨碎，然后放在500 mL的滅菌容器內(nèi)，加 225 mL 3％氯化鈉堿性蛋白胨水，并充分振蕩。n 另取 1 mL滅菌吸管，按上條操作依次制備 10倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換用 1支 1mL滅菌吸管。分離n 在所有顯示生長(zhǎng)的試管或增菌液中用接種環(huán)沾取一環(huán)，于 TCBS平板或科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基平板上劃線分離。n 典型的副溶血性弧菌在 TCBS上呈現(xiàn)為圓的、半透明的、表面光滑的綠色菌落，用接種環(huán)輕觸，有類(lèi)似口香糖的質(zhì)感，直徑 2 mm～ 3 mm。1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～ 24 h。n 挑取純培養(yǎng)的單個(gè)可疑菌落，轉(zhuǎn)種 3％氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面并穿刺底層， 36 ℃ 177。1 ℃ 培養(yǎng) 24 h，觀察液體混濁情況。隔夜培養(yǎng)物進(jìn)行 ONPG試驗(yàn)。如 果進(jìn)行定量檢測(cè)，根據(jù)證實(shí)為副溶血性 弧菌陽(yáng)性的試管管數(shù)，查 MPN檢索表， 報(bào)告每 g（ mL）副溶血性弧菌的 MPN值。生化特性n 不酵解不氧化碳水化合物；n 氧化酶、觸酶陽(yáng)性； 抗原結(jié)構(gòu)和血清分型n 菌體抗原（ O）抗原：可分成 45個(gè)以上血清型， 第 1 12和 18血清型最為常見(jiàn) ；n 鞭毛抗原（ H)抗原；n 包膜抗原（ K）抗原。 1 ℃生長(zhǎng)試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn)彎曲菌屬過(guò)氧化氫酶試驗(yàn) 萘啶酮酸敏感試驗(yàn)馬尿酸鈉水解試驗(yàn) 吲哚乙酸脂水解試驗(yàn)空腸彎曲菌報(bào) 告挑取可疑菌落，接種哥倫比亞瓊脂平板頭孢菌素敏感試驗(yàn)36 ℃ 177。 1 ℃ 24 h～ 48 h樣品處理n 25g+100ml Bolton，均質(zhì) 1～ 2min，取濾液進(jìn)行培養(yǎng)；空腸彎曲菌對(duì)下列因素非常敏感n 在空氣中的暴露；n 干燥；n 低 pH；n 加熱；n 冷凍；n 鹽；n 長(zhǎng)期的貯存。 1 ℃ 、 4 h接種 mCCDA和 Skirrow平板或 CFA顯色平板100 r/min振蕩微需氧， 42℃ 177。n 如果振蕩培養(yǎng) 24小時(shí)即可；n 如果靜置培養(yǎng)需 48小時(shí)；n 振蕩幅度 100rpm。鑒定革蘭氏染色形態(tài)觀察 直接相差鏡檢有氧 42 ℃ 177。b 海鷗彎曲菌的不同菌株，分別表現(xiàn)為敏感或抗性。1℃ ， 24 h177。1℃ ， 18 h177。n 研究證明與其他腸桿菌科細(xì)菌（如沙門(mén)菌屬、大腸埃希氏菌等）相比， ES具有較高的耐滲透壓能力。分離顯色培養(yǎng)基的基本原理相似，二者都是根據(jù) ES能產(chǎn)生 α 葡萄糖苷酶，分解底物XaGlc產(chǎn)生有色菌落。2h TSA： 25℃ 培養(yǎng)后 典型 ES：黃色陰性對(duì)照 E. coli ATCC 25922：白色菌落鑒定（生化反應(yīng)） 生化 試驗(yàn) 特征黃色素 產(chǎn) 生 ＋氧化 酶 －L賴 氨酸脫 羧 酶 －L鳥(niǎo) 氨酸脫 羧 酶 （＋）L精氨酸雙水解 酶 ＋檸 檬酸水解 (＋ )發(fā) 酵：D山梨醇 （－）L鼠李糖 ＋D蔗糖 ＋D蜜二糖 ＋苦杏仁 甙 ＋注：＋＞ 99%陽(yáng)性；－＞ 99%陰性；（＋） 90%－ 99%陽(yáng)性；（－） 90%99%陰性。質(zhì)量控制n 參加衛(wèi)生部及有關(guān)部門(mén)組織的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力培訓(xùn)、驗(yàn)證、比對(duì)及考核n 接受衛(wèi)生部及有關(guān)部門(mén)對(duì)我省監(jiān)測(cè)工作的督導(dǎo)檢查n 衛(wèi)生廳制定我省質(zhì)量控制考核辦法，并組織實(shí)施n 省疾病預(yù)防控制中心負(fù)責(zé)進(jìn)行檢驗(yàn)技術(shù)和數(shù)據(jù)上報(bào)的培訓(xùn)質(zhì)控考核n 發(fā)給未知樣品，在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)，在室內(nèi)質(zhì)控的基礎(chǔ)上，考核實(shí)驗(yàn)室真實(shí)的技術(shù)水平和熟練程度，按時(shí)上報(bào)結(jié)果。此次考核由中國(guó) CDC營(yíng)養(yǎng)食品所組織并制訂考核實(shí)施方案，通過(guò)發(fā)放統(tǒng)一制備的質(zhì)控樣品進(jìn)行考核，由中國(guó) CDC營(yíng)養(yǎng)食品所負(fù)責(zé)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)一評(píng)價(jià)。n 4. 15種質(zhì)控樣品應(yīng)盡量覆蓋各個(gè)省，省內(nèi)各個(gè)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)的質(zhì)控樣品應(yīng)盡量做到互不相同。n 2. 質(zhì)控樣品在運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)保持 2℃8℃，確保溫度不會(huì)超出其范圍。n 3. 檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)做好實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)量控制，并參照中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品衛(wèi)生檢驗(yàn)微生物學(xué)部分（ GB/T 47892023）相關(guān)章節(jié)對(duì)質(zhì)控樣品進(jìn)行檢驗(yàn)，按照相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行增菌培養(yǎng)，將增菌培養(yǎng)物劃線接種于相應(yīng)的平板上分離，挑取單個(gè)菌落進(jìn)行生化鑒定等。 n 2. 質(zhì)控樣品中的細(xì)菌鑒定到屬，并報(bào)告