dna-酶切、回收和連接(完整版)
【正文】 白、氯仿、 SDS、 EDTA、甘油等）； ? 影響限制性內(nèi)切酶活性的生物因子： 5. 內(nèi)切酶用量不超過總反應(yīng)體積的 10%； 6. 消化時(shí)間適當(dāng)延長(zhǎng)有利于提高酶活性； 7. 加 DNAsefree的 BSA 可以起到穩(wěn)定酶活性的作用； 8. 用硅化處理的器皿進(jìn)行酶切可以提高酶活性； 9. 酶切所用器皿和 ddH2O要經(jīng)過高溫滅菌方可使用； 。 三 . 試劑與器材 〈 一 〉 試劑 1. 限制性內(nèi)切酶 EcoRI, HindIII ； 10 內(nèi)切酶緩沖液 2. T4DNA連接酶； 10 連接酶緩沖液 3. 電泳緩沖液 （ TBE或 1 TAE） 4. 瓊脂糖；溴酚蘭；溴化乙錠 (工作濃度 ) 5. 酚；氯仿；無水乙醇； 70%乙醇；滅菌雙蒸水 ? Note: 1. Concentration: 20,000 and 100,000 units/ml. Assayed on lambda DNA 2. Storage Conditions: 250 mM NaCl, 10 mM TrisHCl (pH ), mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, , and 50% glycerol. Store at 20176。 現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)幾百種限制性內(nèi)切酶 ， 它們以內(nèi)切方式水解核酸鏈中的磷酸二酯鍵 ， 產(chǎn)生的 DNA片段 5’端為 P， 3’端為 OH。 由于限制性內(nèi)切酶能識(shí)別 DNA特異序列并進(jìn)行切割 ，因而在基因重組 、 DNA序列分析 、 基因組甲基化分析 、 基因物理圖譜繪制及分子克隆等技術(shù)中收到廣泛應(yīng)用 。 C 3. Diluent Compatibility: Dilue
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