蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾ppt課件(完整版)
【正文】 O P OOC COOON H 2NNNNC H 2POOHHOO POOOO P OOC COOOO HN H 2NNNNC H 2OR( C H 2 ) 4 E N ZNHOON H 2NNNNC H 2HOORCC H 2SC HHE N Z缺點(diǎn)：產(chǎn)生的 二醛 幾乎全部與賴氨酸側(cè)鏈反應(yīng)，不能與 更多類型側(cè)鏈反應(yīng)。 優(yōu)點(diǎn)：光活化產(chǎn)生的自由基（碳烯或氮烯）能無選擇地與各類側(cè)鏈反應(yīng)。 使用能與蛋白質(zhì)共價(jià)結(jié)合的敏化劑，可以了解某些氨基酸殘基在蛋白質(zhì)空間構(gòu)象中配置情況，也可測(cè)定蛋白質(zhì)中包埋的和暴露的基團(tuán)。 用硫醇、硼氫化鈉、亞硫酸鹽等裂解蛋白質(zhì)中的二硫鍵。 通過化學(xué)修飾將 Cys 轉(zhuǎn)變成 S氨乙酰 Cys 通過化學(xué)修飾將 Ser 轉(zhuǎn)變成 S氨乙酰 Cys 例如用胰蛋白酶只水解精氨酸形成的肽鍵。 敏化光氧化需分子氧，而啟動(dòng)光氧化反應(yīng)的是處于激發(fā)三重態(tài)的敏化劑。 N6對(duì) 溴乙酰胺 芐基 ADP （二）通過腺嘌呤核苷酸的磷酸基可加入另一類反應(yīng) 基團(tuán)。 測(cè)定蛋白質(zhì)上殘基間的距離。 這類交聯(lián)劑的一端含有氨基反應(yīng)部分， N羥琥珀酰亞胺，另一端含有巰基反應(yīng)部分，馬來酰亞胺或聯(lián)硫基。 一、設(shè)計(jì)或選擇交聯(lián)劑要考慮的因素 （一）反應(yīng)的專一性 交聯(lián)劑 分為 同型雙功能試劑 異型雙功能試劑 （二）交聯(lián)距離 隨著交聯(lián)劑兩個(gè)功能基之間距離跨度的增加，形成交聯(lián)的可能性也隨之增加。 應(yīng)注意 的問題 該試劑在水介質(zhì)、高 pH下不穩(wěn)定，迅速水解為 CO2和乙醇。 HENZ S + SC O O O O CO 2 N S N O 2pH ﹥ E N Z SC O O S N O 2+ H ++SC O O N O 2DTNB 2硝基 5硫代苯甲酸 釋放出的 2硝基 5硫代苯甲酸陰離子在 412nm處有 吸收，可用光譜法測(cè)定其含量?；瘜W(xué)修飾的原理 化學(xué)修飾的方法學(xué) 蛋白質(zhì)側(cè)鏈的修飾 蛋白質(zhì)肽鏈的交聯(lián) 親和標(biāo)記 蛋白質(zhì)化學(xué)修飾的應(yīng)用 內(nèi) 容 提 要 （第九講） 三、羧基的修飾 用水溶性碳二亞胺作催化劑，通過胺專一地修飾蛋白質(zhì)中的羧基。 五、組氨酸咪唑基的修飾 常用試劑是焦碳酸二乙酯和碘乙酸。 試劑大大過量時(shí)可與咪唑環(huán)上的兩個(gè)氮都作用，形成雙取代衍生物。 （三）可裂解性 研制可裂解交聯(lián)劑有助于分離和表征交聯(lián)片斷。 COON( C H 2 ) 3 OO2 N羥琥珀酰亞胺辛二酸酯 （非裂解） CSO( C H 2 ) 2SONOONN琥珀酰胺 3（ 2吡啶二硫代 )丙酸酯 （三）可被光活化的試劑 這類試劑是異型雙功能試劑的擴(kuò)展。 測(cè)定酶的活性部位。 OOOOOPOC H 2A d e n S F腺苷 5′(對(duì) 氟磺酰苯酰 磷酸 ） 這類試劑對(duì)賴氨酸 和酪氨酸的反應(yīng)性 很強(qiáng)。 敏化光氧化的反應(yīng)機(jī)理，有兩種解釋： 。 如果要增加胰蛋白酶水解位置。 普遍采用的是用溴化氰專一裂解 Met的羧基所形成的肽鍵。 影響光敏化反應(yīng)效率和選擇性的主要因素是敏化劑對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)合作用。 OOPOOO HNNNNC H 2ON H C O C
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