蛋白質(zhì)復(fù)性ppt課件(完整版)
【正文】 進(jìn)劑，折疊促進(jìn)劑的作用原理在于穩(wěn)定復(fù)性蛋白質(zhì)的天然結(jié)構(gòu)、抑制肽鏈間的疏水相互作用。濃度為 ~可大幅度提高折疊效率（使不正確折疊和二硫鍵不穩(wěn)定）。 5. 多離子化合物，如肝素，可促進(jìn)蛋白質(zhì)的折疊復(fù)性，且有穩(wěn)定蛋白質(zhì)天然構(gòu)型的作用。 9. 人工伴侶，將變性蛋白質(zhì)首先加到含表面活性劑的溶液中，以防聚集，然后用環(huán)糊精除去表面活性劑，促進(jìn)折疊復(fù)性。 ? 完善現(xiàn)有技術(shù)，實(shí)現(xiàn)現(xiàn)有技術(shù)的實(shí)用化和規(guī)?；?3）供給豐富的培養(yǎng)基，創(chuàng)造最佳培養(yǎng)條件，如供氧、 pH等。 ，蛋白質(zhì)成為失去了生物學(xué)活性伸展肽鏈 蛋白質(zhì)體外復(fù)性的常用方法 : \透析 \超濾復(fù)性法； ：表面活性劑、 PEG、分子伴侶等； 3.反相膠團(tuán)復(fù)性法、雙水相體系復(fù)性法； 4. 層析折疊復(fù)性（固相復(fù)性）：凝膠過濾層析（ GF）、親和層析（ AFC） 、離子交換層析（ IEC） 、疏水層析（ HIC）等 。 5）重組蛋白所處的環(huán)境：發(fā)酵溫度高時(shí)容易形成包涵體。 ? 開發(fā)實(shí)用的設(shè)備。 蛋白質(zhì)復(fù)性時(shí)聚集反應(yīng)的抑制 常用的蛋白質(zhì)復(fù)性添加劑 復(fù)性添加劑 復(fù)性蛋白質(zhì) GdmCl 熒光假單孢菌脂肪酶，溶菌酶，碳酸酐酶 II，干擾素 β多肽 尿素 豬生長激素，溶菌酶， IGF1，干擾素 β 多肽 L精氨酸 熒光假單孢菌脂肪酶，雞卵清溶菌酶， α糖苷酶 鹽類 (NH4)2SO4 溶菌酶 糖類 甘油熒光假單孢菌脂肪酶，溶菌酶， IGF1 蔗糖 IGF1 葡萄糖 溶菌酶 N乙酰基葡糖胺 溶菌酶 肌氨酸 溶菌酶 蛋白質(zhì)復(fù)性時(shí)聚集反應(yīng)的抑制 表面活性劑類 Chaps TGFβ類蛋白質(zhì)，碳酸酐酶 II Tween 人生長激素 SDS 干擾素 β多肽 月桂酰基肌氨酸鈉 單鏈 Fv片段 十二烷基麥芽糖 MHC Triton X100 碳酸酐酶 II PEG 碳酸酐酶 II 十八烯甘油 碳酸酐酶 II 單十二?；姿狨? 溶菌酶 硫代甜菜堿 雞卵清溶菌酶 短鏈醇 正戊醇，正己醇， 碳酸酐酶 環(huán)己醇 蛋白質(zhì)復(fù)性的促進(jìn)劑 分子內(nèi)沒有 SS鍵的蛋白質(zhì)復(fù)性相對比較簡單，只需抑制聚集反應(yīng)，不涉及 SS鍵的形成。如胰島素生長因子 I的復(fù)性，除了在復(fù)性液中加入 Cu2+和Mg2+、 2mol尿素、鹽類（ 1mol/L NaCl、 DTT）外，還加入乙醇、甘油等。天然蛋白質(zhì)即由第二個(gè)中間體形成。 例：人 ?干擾素的后處理工藝 發(fā)酵液 離心 (發(fā)酵液冷卻至 10?C以下 ， 4000r/min離心 10min) 菌體 細(xì)胞破碎 (1倍體積細(xì)胞 +10倍體積 PBS buffer, 冰浴超聲破碎 5次 , 30s/次 , 4000r/min離心 30min)， 洗滌 (% Triton X100溶液 ， 1000r/min離心 20min， 重復(fù)三次 ) 包涵體提取變性
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