【正文】 其下游分子Raf，使之活化。（四）、真核生物轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控機(jī)制？答:（1）、5，端加帽和3，端多聚腺苷酸化的調(diào)控意義:5，端加帽和3，端多聚腺苷酸化是保持mRNA穩(wěn)定的一個(gè)重要因素，它至少保證mRNA在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中不被降解。 轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成:真核生物RNA聚合酶識(shí)別的是由通用轉(zhuǎn)錄因子與DNA形成的蛋白質(zhì)DNA復(fù)合物，只有當(dāng)一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到DNA上，形成有功能的啟動(dòng)子，才能被RNA聚合酶所識(shí)別并結(jié)合。原核基因組的特點(diǎn):①為一條環(huán)狀雙鏈DNA；②只有一個(gè)復(fù)制起點(diǎn)；③具有操縱子結(jié)構(gòu)；④絕大部分為單拷貝；⑤可表達(dá)基因約50%，大于真核生物小于病毒；⑥基因一般是連續(xù)的，無(wú)內(nèi)含子；⑦重復(fù)序列很少。4 SD序列:轉(zhuǎn)錄出的mRNA要進(jìn)入核糖體上進(jìn)行翻譯，需要一段富含嘌呤的核苷酸序列與大腸桿菌16S rRNA3，末端富含嘧啶的序列互補(bǔ)，是核糖體的識(shí)別位點(diǎn)。3反義RNA:堿基序列正好與有意義的mRNA互補(bǔ)的RNA稱為反義RNA。3細(xì)胞癌基因:存在于正常的細(xì)胞基因組中，與病毒癌基因有同源序列，具有促進(jìn)正常細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化和發(fā)育等生理功能。由于常用計(jì)算機(jī)硅芯片作為固相支持物，所以稱為DNA芯片。2DNA復(fù)性:當(dāng)促使變性的因素解除后，兩條DNA鏈又可以通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合形成DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)。1 蛋白磷酸酶:是具有催化已經(jīng)磷酸化的蛋白質(zhì)分子發(fā)生去磷酸化反應(yīng)的一類酶分子，與蛋白激酶相對(duì)應(yīng)存在，共同構(gòu)成了磷酸化和去磷酸化這一重要的蛋白質(zhì)活性的開關(guān)系統(tǒng)。增強(qiáng)子:位于真核基因中遠(yuǎn)離轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)，能明顯增強(qiáng)啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄效率的特殊DNA序列?；蚪M:細(xì)胞或生物體的一套完整單倍體的遺傳物質(zhì)的總和。包括啟動(dòng)子、上游啟動(dòng)子元件、增強(qiáng)子、加尾信號(hào)和一些反應(yīng)元件等。1 受體:是存在于靶細(xì)胞膜上或細(xì)胞內(nèi)能特異識(shí)別生物活性分子并與之結(jié)合，進(jìn)而發(fā)生生物學(xué)效應(yīng)的的特殊蛋白質(zhì)。1 轉(zhuǎn)導(dǎo):指以噬菌體為載體，在細(xì)菌之間轉(zhuǎn)移DNA的過(guò)程，有時(shí)也指在真核細(xì)胞之間通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)移和獲得細(xì)胞DNA的過(guò)程。2 定量PCR:基因表達(dá)涉及的轉(zhuǎn)錄水平的研究常需要對(duì)mRNA進(jìn)行定量測(cè)定，對(duì)此采用的PCR技術(shù)就叫定量PCR。3癌基因:是細(xì)胞內(nèi)控制細(xì)胞生長(zhǎng)的基因，具有潛在的誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的特性。3 RFLP:即限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性，個(gè)體之間DNA的核苷酸序列存在差異，稱為DNA多態(tài)性。相同長(zhǎng)度的單鏈DNA，如果堿基序列不同，形成的構(gòu)象就不同，這樣就形成了單鏈構(gòu)象多態(tài)性。4CAP:是大腸桿菌分解代謝物基因活化蛋白，這種蛋白可將葡萄糖饑餓信號(hào)傳遞個(gè)許多操縱子，使細(xì)菌在缺乏葡萄糖時(shí)可以利用其他碳源。 CAP的正性調(diào)節(jié):在啟動(dòng)子上游有CAP結(jié)合位點(diǎn)，當(dāng)大腸桿菌從以葡萄糖為碳源的環(huán)境轉(zhuǎn)變?yōu)橐匀樘菫樘荚吹沫h(huán)境時(shí)，cAMP濃度升高，與CAP結(jié)合，使 CAP發(fā)生變構(gòu)，CAP結(jié)合于乳糖操縱子啟動(dòng)序列附近的CAP結(jié)合位點(diǎn)，激活RNA聚合酶活性，促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合于操縱子后促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因的 轉(zhuǎn)錄，對(duì)乳糖操縱子實(shí)行正調(diào)控，加速合成分解乳糖的三種酶。⑵反式作用因子與順式作用元件的結(jié)合:反式作用因子被激活后，即可識(shí)別并結(jié)合上游啟動(dòng)子元件和增強(qiáng)子中的保守性序列，對(duì)基因轉(zhuǎn)錄起調(diào)節(jié)作用。Grb2是作為接頭蛋白結(jié)合到受體上。途徑: vIP3 使鈣通道打開，細(xì)胞內(nèi)Ca2+升高 末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶:將脫氧核糖核酸加到DNA的3末端。如果在 多克隆位點(diǎn)上插入外源DNA片段，將使lac Z基因滅活，不能生成半乳糖苷酶，結(jié)果菌落出現(xiàn)白色。雜交的雙方是待測(cè)核酸和已知序列。（十四）、探針的種類和優(yōu)缺點(diǎn)？答:cDNA探針:通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA后，將其克隆于適當(dāng)?shù)目寺≥d體，通過(guò)擴(kuò)增重組質(zhì)粒而使cDNA得到大量的擴(kuò)增。隨機(jī)引物法:隨機(jī)引物是人工合成的長(zhǎng)度為6個(gè)寡核苷酸殘 基的寡聚核苷酸片段的混合物。DNA模板變性:模板雙鏈DNA174。引物的堿基盡可能隨機(jī)，避免出現(xiàn)嘌呤、嘧啶堿基堆積現(xiàn)象。引物3’端堿基是引發(fā)延伸的起點(diǎn)，因此一定要與模板DNA配對(duì)。 底物濃度 工作濃度20200umol/L， dNTPs濃度過(guò)高可加快反應(yīng)速度，也增加堿基的錯(cuò)配率和實(shí)驗(yàn)成本。 反應(yīng)溫度和循環(huán)次數(shù)（十九）、影響大腸桿菌系統(tǒng)外源基因表達(dá)的因素？答:啟動(dòng)子的強(qiáng)弱；基因的劑量；影響RNA轉(zhuǎn)錄和翻譯效率的因素:SD序列、mRNA；外源基因密碼子的選擇；表達(dá)產(chǎn)物的大??；表達(dá)產(chǎn)物的穩(wěn)定性。應(yīng)用:建立用于研究外源基因表達(dá)調(diào)控體系；建立醫(yī)學(xué)中常用的疾病模型；培育動(dòng)物新品種；藥理學(xué)和藥用蛋白的生產(chǎn)研究。③ 插入:一個(gè)原來(lái)沒有的堿基或一段原來(lái)沒有的核苷酸鏈插入到DNA大分子中間。（二十九）、簡(jiǎn)述重組DNA技術(shù)的過(guò)程。它與核糖體16S rRNA　3‘末端富含嘧啶的序列互補(bǔ)，是核糖體的識(shí)別位點(diǎn)。：當(dāng)核酸分子加熱變性時(shí)，其在260nm處的紫外吸收值急劇增加的現(xiàn)象稱增色效應(yīng)。問(wèn)答題。４）DNA序列：　原核生物無(wú)或很少有重復(fù)序列，真核生物有重復(fù)序列。 ：各類不同的細(xì)胞中均有相同的一組基因在表達(dá)，它們的功能對(duì)每個(gè)細(xì)胞都是必需的，這類基因稱持家基因。７. hnRNA：—種核不均一RNA，即mRNA的前體，經(jīng)過(guò)5’加帽和 3’酶切加多聚A，再經(jīng)過(guò)RNA的剪接，將外顯子連接成開放閱讀框，通過(guò)核孔進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)就可以作為蛋白質(zhì)合成的模板了。單順反子：在真核生物中，一個(gè)編碼基因多轉(zhuǎn)錄成一個(gè)mRNA分子，經(jīng)翻譯只生成一條多肽鏈，這樣的一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位稱為單順反子，真核生物中的基因都是以單順反子的形式存在。突變的遺傳效應(yīng):①遺傳密碼的改變:錯(cuò)義突變、無(wú)義突變、同義突變、移碼突變② 對(duì)mRNA剪接的影響:一是使原來(lái)的剪接位點(diǎn)消失；二是產(chǎn)生新的剪接位點(diǎn)。 打靶載體的構(gòu)建:同源序列要足夠長(zhǎng)，要含有篩選用的標(biāo)志基因。蛋白產(chǎn)物必須穩(wěn)定，不易被細(xì)胞內(nèi)蛋白酶快速降解，且對(duì)宿主無(wú)害。在PCR反應(yīng)中，4種dNTP必須 以等摩爾濃度配制，以減少PCR反應(yīng)的錯(cuò)配誤差并提高使用效率。 鎂離子濃度 mmol/L，Taq DNA聚合酶活性需要Mg 2+。 引物與模板結(jié)合時(shí)，引物的5’端最多可以游離十幾個(gè)堿基而不影響PCR反應(yīng)的進(jìn)行。否則會(huì)使引物和模板錯(cuò)誤配對(duì)。退火:引物＋單鏈DNA174。將這 些引物與變性