【正文】 的DNA單鏈結(jié)合后，以4種dNTP（其中一種是標(biāo)記物標(biāo)記的dNTP）為底物，合成與探針DNA互補(bǔ)的切帶有標(biāo)記物的DNA探針。它是目前應(yīng)用最為廣泛的一種探針。它有以下優(yōu)點(diǎn):在低溫下探針更穩(wěn)定；能更好地保留非共價(jià)結(jié)合的核酸。探針長(zhǎng)度應(yīng)控制在50300個(gè)堿基對(duì)為好。（十一）SANGER雙脫氧鏈終止法的原理？答DNA 鏈中核苷酸以3’,5’磷酸二酯鍵連接，合成DNA所用的底物是 2’脫氧核苷三磷酸。依賴DNA的RNA聚合酶:識(shí)別特異性啟動(dòng)子，RNA轉(zhuǎn)錄。 信號(hào)分子與受體結(jié)合，引起受體構(gòu)象變化 低分子量G蛋白R(shí)as的活化:SOS可促進(jìn)Ras釋放GDP，結(jié)合GTP的反應(yīng)，使Ras激活。⑷反式作用因子的組合式調(diào)控作用:每一種反式作用因子結(jié)合順式作用元件后雖然可以發(fā)揮促進(jìn)或抑制作用，但反式作用因子對(duì)基因調(diào)控不是由單一因子完成的而是幾種因子組合發(fā)揮特定的作用。（三）、真核生物轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控機(jī)制？答:真核生物在轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控主要是通過(guò)反式作用因子、順式作用元件和RNA聚合酶的相互作用來(lái)完成的，主要是反式作用因子結(jié)合順式作用元件后影響轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成過(guò)程。 種類單一；②單倍體基因組:每個(gè)基因組在病毒中只出現(xiàn)一次；③形式多樣；④大小不一；⑤基因重疊；⑥動(dòng)物/細(xì)菌病毒與真核/原核基因相似:內(nèi)含子；⑦具有不規(guī)則的結(jié)構(gòu)基因；⑧基因編碼區(qū)無(wú)間隔:通過(guò)宿主及病毒本身酶切；⑨無(wú)帽狀結(jié)構(gòu)；⑩結(jié)構(gòu)基因沒(méi)有翻譯起始序列。4 細(xì)胞全能性:指同一種生物的所有細(xì)胞都含有相同的DNA，即基因的數(shù)目和種類是一樣的，但在不同階段，同一個(gè)體的不同組織和器官中基因表達(dá)的種類和數(shù)目是不同的。3基因治療:一般是指將限定的遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)入患者特定的靶細(xì)胞，以最終達(dá)到預(yù)防或改變特殊疾病狀態(tài)為目的治療方法。包括病毒癌基因和細(xì)胞癌基因。2 DNA芯片：DNA芯片技術(shù)是指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接將大量的DNA探針以顯微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后與標(biāo)記的樣品雜 交，通過(guò)對(duì)雜交信號(hào)的檢測(cè)分析，即可獲得樣品的遺傳信息。2 DNA變性:在物理或化學(xué)因素的作用下，導(dǎo)致兩條DNA鏈之間的氫鍵斷裂，而核酸分子中的所有共價(jià)鍵則不受影響。1 蛋白激酶:是指能夠?qū)⒘姿峒瘓F(tuán)從磷酸供體分子轉(zhuǎn)移到底物蛋白的氨基酸受體上的一大類酶。啟動(dòng)子:是RNA聚合酶特異性識(shí)別和結(jié)合的DNA序列。分子生物學(xué)要點(diǎn)一、名詞解釋：基因:能夠表達(dá)和產(chǎn)生蛋白質(zhì)和RNA的DNA序列，是決定遺傳性狀的功能單位。 反式作用因子:是指真核細(xì)胞內(nèi)含有的大量可以通過(guò)直接或間接結(jié)合順式作用元件而調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄活性的蛋白質(zhì)因子。1分子克隆:在體外對(duì)DNA分子按照即定目的和方案進(jìn)行人工重組，將重組分子導(dǎo)入合適宿主，使其在宿主中擴(kuò)增和繁殖，以獲得該DNA分子的大量拷貝。 轉(zhuǎn)染:指病毒或以它為載體構(gòu)建的重組子導(dǎo)入真核細(xì)胞的過(guò)程。27基因打靶:是指通過(guò)DNA定點(diǎn)同源重組，改變基因組中的某一特定基因，從而在生物活體內(nèi)研究此基因的功能。當(dāng)癌基因結(jié)構(gòu)或表達(dá)發(fā)生異常時(shí)，其產(chǎn)物可使細(xì)胞無(wú)限制增殖，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。若因此而改變了限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)則可導(dǎo)致相應(yīng)的限制性片段的長(zhǎng)度和數(shù)量發(fā)生變化，稱為RFLP。4管家基因:在生物體生命的全過(guò)程都是必須的，且在一個(gè)生物個(gè)體的幾乎所有細(xì)胞中持續(xù)表達(dá)的基因。50、順?lè)醋?結(jié)構(gòu)域二、 問(wèn)答題（一）、病毒、原核、真核基因組的特點(diǎn)？答:病毒基因組的特點(diǎn):① 協(xié)調(diào)調(diào)節(jié):乳糖操縱子中的I基因編碼的阻遏蛋白的負(fù)調(diào)控與CAP的正調(diào)控兩種機(jī)制，互相協(xié)調(diào)、互相制約。⑶反式作用因子的作用方式——成環(huán)、扭曲、滑動(dòng)、Oozing。 調(diào)控分子SOS的活化:SOS含有可與SH3結(jié)構(gòu)域相結(jié)合的富含脯氨酸基序，當(dāng)Grb2結(jié)合到磷酸化的表皮生長(zhǎng)因子受體后，它的兩個(gè)SH3結(jié)構(gòu)域即可結(jié)合SOS，使之活化。 cAMP活化PKA，PKA使目標(biāo)蛋白磷酸化，調(diào)節(jié)代謝酶的活性或調(diào)節(jié)基因的表達(dá)v（八）、IP3Ca2+信號(hào)途徑: Ca2+與CaM結(jié)合，激活Ca2+CaM依賴的蛋白激酶v堿性磷酸酶:催化去除DNA、RNA等的5磷酸基團(tuán)。由于這種顏色標(biāo)志，重組克隆和非重組克隆的區(qū)分一目了然。（十三）、影響雜交的因素？答:核酸分子的濃度和長(zhǎng)度:核酸濃度越大，復(fù)性速度越快。 雜交液中的甲酰胺:甲酰胺能降低核酸雜交的TM值。提取質(zhì)粒后分離純化作為探針使用。對(duì)于任何一個(gè)用作探針的DNA片段，隨機(jī)引物混合物中都會(huì)有一些六核苷酸片段可以與之結(jié)合，起到DNA合成引物的作用。單 鏈DNA，94℃。3’端不應(yīng)有連續(xù)3個(gè)G和C。引物3’端最佳堿基選擇是G和C，形成的堿基配對(duì)比較穩(wěn)定。 TrisHCl緩沖液 必要時(shí)加入適量二甲基亞砜(DMSO)或甲酰胺利于破壞模板二級(jí)結(jié)構(gòu)，提高PCR反應(yīng)特異性。降低濃度會(huì)導(dǎo)致反應(yīng)速度下降，可提高反應(yīng)的特異性。（二十）、大腸桿菌系統(tǒng)表達(dá)外源基因必須具備的條件？答:要求外源基因的編碼區(qū)不能含有內(nèi)含子；表達(dá)的外源片段要位于大腸桿菌啟動(dòng)子的下游，并形成正確的閱讀框架；轉(zhuǎn)錄出的mRNA必須有與大腸桿菌16S rRNA3，末端相匹配的SD序列，才能被有效的翻譯成蛋白質(zhì)。（二十三）、基因敲除的基本程序？答:通過(guò)DNA同源重組，使得胚胎干細(xì)胞特定的內(nèi)源基因被破壞而造成功能喪失，然后通過(guò)胚胎干細(xì)胞介導(dǎo)得到該基因喪失的小鼠模型的過(guò)程稱為基因敲除。④ 倒位DNA鏈內(nèi)重組，使其中一段方向倒置。：是指數(shù)個(gè)功能上相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因串聯(lián)在一起，構(gòu)成信息區(qū)，連同其上游的調(diào)控區(qū)（包括啟動(dòng)子和操縱基因）以及下游的轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)所構(gòu)成的基因表達(dá)單位，所轉(zhuǎn)錄的RNA為多順?lè)醋?。：是大腸桿菌分解代謝物基因活化蛋白，這種蛋白可將葡萄糖饑餓信號(hào)傳遞個(gè)許多操縱子，使細(xì)菌在缺　　　　　　　　　　　乏葡萄糖時(shí)可以利用其他碳源?！　p色效應(yīng)：加熱變性了的核酸分子，在退火條件下發(fā)生復(fù)性時(shí)，其在260nm處的紫外吸收值減少的現(xiàn)象稱減色效應(yīng)。１）染色體方面： 原核生物為環(huán)狀DNA分子，且DNA裸露或結(jié)合少量蛋白質(zhì)，只有一個(gè)基因連鎖群；５）基因表達(dá)：　原核生物RNA和蛋白質(zhì)在同一區(qū)間合成，有重疊基因；真核生物RNA在核中合成和加工，蛋白質(zhì)在細(xì)胞中合成，有斷裂基因24 / 24