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分子生物學(xué)要點(diǎn)(存儲(chǔ)版)

2025-05-07 03:17上一頁面

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【正文】 化。轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化及轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用:活化的ERK可以轉(zhuǎn)至細(xì)胞核內(nèi),使某些轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子發(fā)生磷酸化,從而影響基因的轉(zhuǎn)錄。v v活化后的G蛋白激活PLC PLC水解PIP2生成IP3 和DGvDNA聚合酶:催化單核苷酸鏈延伸。(十)、藍(lán)白篩選的原理?答:某些質(zhì)粒帶有大腸桿菌的半乳糖苷酶基因片段,在半乳糖苷酶基因的 基因區(qū)外又另外引入了一段含多種單一限制酶位點(diǎn)的DNA序列。在4組獨(dú)立酶反應(yīng)中分別采用4種不同的ddNTP,結(jié)果將產(chǎn)生4組寡核苷酸,它們將分別終止于模板鏈的A、C、G或T位置。 離子強(qiáng)度:在低離子強(qiáng)度下,核酸雜交非常緩慢,隨著離子強(qiáng)度的增加,雜交反應(yīng)率增加。(十五)、探針的標(biāo)記法?答: 缺口平移法:此法是利用適當(dāng)濃度的DNase Ⅰ在DNA雙鏈上隨機(jī)切割單鏈,造成單鏈切口。PCR全過程每一步的轉(zhuǎn)換是通過溫度的改變來控制的。(十七)、PCR引物設(shè)計(jì)的基本要求?答:引物長度一般為15~30個(gè)核苷酸。兩個(gè)引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列,尤其應(yīng)避免3’端的互補(bǔ)重疊。 加入BSA或明膠有利于保護(hù)TaqDNA聚合酶活性。 退火溫度與引物Tm值有關(guān),引物Tm值在5580 ℃ 范圍較為理想。它的特點(diǎn)是“分子及細(xì)胞水平操作,組織及動(dòng)物整體水平表達(dá)”。分為轉(zhuǎn)換和顛換?;驑?biāo)記:基因標(biāo)記實(shí)驗(yàn)是基因治療的前奏,并不在于直接治療疾病而是期望能夠提供有關(guān)正常細(xì)胞生物學(xué)和疾病病理方面的信息。:是一種具自身催化RNA切割和RNA剪接功能的由RNA組成的酶,可以作為基因表達(dá)和病毒復(fù)制的抑制劑。:基因組獨(dú)立進(jìn)行復(fù)制的單位稱復(fù)制子,每個(gè)復(fù)制子都有復(fù)制起點(diǎn)和復(fù)制終點(diǎn)。: mRNA上的三個(gè)相臨的核苷酸序列,稱三聯(lián)體密碼子,是蛋白質(zhì)合成中某一氨基酸的編碼單位。2)染色體遺傳物質(zhì):原核生物為質(zhì)粒,真核生物為細(xì)胞器基因組。 13. 衰減子:在色氨酸操縱子中,當(dāng)色氨酸濃度很高時(shí),核糖體能夠很快的通過編碼序列1,而封閉編碼序列2,這種與轉(zhuǎn)錄偶聯(lián)的翻譯過程導(dǎo)致序列3,4形成一個(gè)不 依賴p因子的終止結(jié)構(gòu)稱衰減子,它能夠使前方的RNA聚合酶脫落,從而導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄終止,類似的結(jié)構(gòu)在其他氨基酸操縱子中也存在。:以RNA為模板,以四種dNTP在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成DNA的過程叫作逆轉(zhuǎn)錄。包括啟動(dòng)子、上游啟動(dòng)子元件、增強(qiáng)子、加尾信號(hào)和一些反應(yīng)元件等?;蛱砑踊蚍Q基因增補(bǔ):通過導(dǎo)入外源基因使靶細(xì)胞表達(dá)其本身不表達(dá)的基因。其方法包括芯片的制備、樣品的準(zhǔn)備、分子雜交和檢測分子。要求哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體帶有能在真核細(xì)胞中表達(dá)外源基因的真核轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件;注意選擇轉(zhuǎn)染的受體細(xì)胞,不同類型的細(xì)胞具有不同的特性;注意選擇適當(dāng)?shù)倪x擇標(biāo)記。引物 。Mg 2+濃度過高又使酶催化非特異性擴(kuò)增增強(qiáng)。(十八)、PCR的反應(yīng)條件?答:PCR反應(yīng)的緩沖液: 3’端和5’端引物具有相似的Tm值,Tm值計(jì)算公式:Tm=4(G+C)+ 2(A+T)引物自身不應(yīng)存在互補(bǔ)序列以避免折疊成發(fā)夾結(jié)構(gòu)。引物的延伸:溫度至70 ℃左右, Taq DNA聚合酶以4種dNTP為原料,以目的DNA為模板,催化以引物3’末端為起點(diǎn)的5’→3’DNA鏈延伸反應(yīng),形成新生DNA鏈。末端標(biāo)記法:只是將DNA片段的一端進(jìn)行標(biāo)記。寡核苷酸探針:根據(jù)已知的核酸順序,采用DNA合成儀合成一定長度的寡核苷酸片段作為探針。 核酸分子的復(fù)雜性:是指存在于反應(yīng)體系中的不同順序的總長度。 溫度:溫度過高不利于復(fù)性,而溫度過低,少數(shù)堿基配對(duì)形成的局部雙鏈不易解離,適宜的溫度是較TM值低25度。在DNA聚合酶作用下通過三磷酸基團(tuán)摻入到延伸 的DNA鏈中,但由于沒有3’羥基,不能同后續(xù)的dNTP形成磷酸二酯鍵,因此,正在延伸的DNA鏈不能繼續(xù)延伸。 (2)、良好載體的條件(九)、分子克隆中常用的工具酶及良好載體的條件?答:(1)、常用的工具酶限制性核酸內(nèi)切酶:是細(xì)菌產(chǎn)生的一類能識(shí)別和切割雙鏈DNA分子內(nèi)特定的堿基順序的核酸水解酶。 v受體活化G蛋白 v受體活化G蛋白R(shí)af是MAPK級(jí)聯(lián)反應(yīng)的第一個(gè)分子,由此啟動(dòng)了MAPK的三級(jí)激活過程。轉(zhuǎn) 錄起始復(fù)合物的形成過程為:TFⅡD結(jié)合TATA盒;RNA聚合酶識(shí)別并結(jié)合TFⅡDDNA復(fù)合物形成一個(gè)閉合的復(fù)合物;其他轉(zhuǎn)錄因子與RNA聚合酶結(jié) 合形成一個(gè)開放復(fù)合物。真核基因組的特點(diǎn):① 真核生物基因組遠(yuǎn)大于原核生物基因組,結(jié)構(gòu)復(fù)雜,基因數(shù)龐大,具有多個(gè)復(fù)制起點(diǎn);②基因組DNA與蛋白質(zhì)結(jié)合成染色體,儲(chǔ)存于細(xì)胞核內(nèi);③真核基因?yàn)閱雾?反子,而細(xì)菌和病毒的結(jié)構(gòu)基因多為多順反子;④基因組中非編碼區(qū)多于編碼區(qū);⑤真核基因多為不連續(xù)的斷裂基因,由外顯子和內(nèi)含子鑲嵌而成;⑥存在大量的重 復(fù)序列;⑦功能相關(guān)的基因構(gòu)成各種基因家族;⑧存在可移動(dòng)的遺傳因素;⑨體細(xì)胞為雙倍體,而精子和卵子為單倍體。4反義核酸技術(shù):是通過合成一種短鏈且與DNA或RNA互補(bǔ)的,以DNA或RNA為目標(biāo)抑制翻譯的反義分子,干擾目的基因的轉(zhuǎn)錄、剪接、轉(zhuǎn)運(yùn)、翻譯等過程的技術(shù)??梢宰鳛橐环N調(diào)控特定基因表達(dá)的手段。在正常細(xì)胞內(nèi)未激活的細(xì)胞癌基因叫原癌基因,當(dāng)其受到某些條件激活時(shí),結(jié)構(gòu)和表達(dá)發(fā)生異常,能使細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。2錯(cuò)義突變DNA分子中堿基對(duì)的取代,使得mRNA的某一密碼子發(fā)生變化,由它所編碼的氨基酸就變成另一種的氨基酸,使得多肽鏈中的氨基酸順序也相應(yīng)的發(fā)生改變的突變。2 退火:指將溫度降至引物的TM值左右或以下,引物與DNA摸板互補(bǔ)區(qū)域結(jié)合形成雜交鏈。1 基因工程:有目的的通過分子克隆技術(shù),人為的操作改造基因,改變生物遺傳性狀的系列過程。它可位于被增強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄基因的上游或下游,也可相距靶基因較遠(yuǎn)。端粒:以線性染色體形式存在的真核基因組DNA末端都有一種特殊的結(jié)構(gòu)叫端粒。 順式作用元件:是指那些與結(jié)構(gòu)基因表達(dá)調(diào)控相關(guān)、能夠被基因調(diào)控蛋白特異性識(shí)別和結(jié)合的特異DNA序列。其中由細(xì)胞分泌的調(diào)節(jié)靶細(xì)胞生命活動(dòng)的化學(xué)物質(zhì)稱為細(xì)胞間信息分子;而在細(xì)胞內(nèi)傳遞信息調(diào)控信號(hào)的化學(xué)物質(zhì)稱為細(xì)胞內(nèi)信息分子。1感染:以噬菌體、粘性質(zhì)粒和真核細(xì)胞病毒為載體的重組DNA分子,在體外經(jīng)過包裝成具有感染能力的病毒或噬菌體顆粒,才能感染適當(dāng)?shù)募?xì)胞,并在細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)增。2原位PCR:以組織固定處理細(xì)胞內(nèi)的DNA或RN
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