分子生物學要點-文庫吧在線文庫
【正文】 A作為靶序列，進行PCR反應的過程。3移碼突變:在編碼序列中，單個堿基、數個堿基的缺失或插入以及片段的缺失或插入等均可以使突變位點之后的三聯體密碼閱讀框發(fā)生改變，不能編碼原來的蛋白質的突變。3基因診斷:以DNA或RNA為診斷材料，通過檢查基因的存在、結構缺陷或表達異常，對人體的狀態(tài)和疾病作出診斷的方法和過程。4SSCP:單鏈構象多態(tài)性檢測是一種基于DNA構象差別來檢測點突變的方法。4周期蛋白:是一類呈細胞周期特異性或時相性表達、累積與分解的蛋白質，它與周期素依賴性激酶共同影響細胞周期的運行。所以，乳糖操縱子的這種調控機制為可誘導的負調控。轉錄起始的調控:⑴反式作用因子的活性調節(jié):①表達式調節(jié)——反式作用因子合成出來就具有活性；②共價修飾——磷酸化和去磷酸化，糖基化；③配體結合——許多激素受體是反式作用因子；④蛋白質與蛋白質相互作用——蛋白質與蛋白質復合物的解離與形成。 募集接頭蛋白Grb2:表皮生長因子受體自身被磷酸化后，不僅其激酶活性增強，而且其構象發(fā)生變化，從而適合與含SH2結構域的蛋白分子相結合。（七）、cAMP信號轉導途徑？答:組成:胞外信息分子（主要是胰高血糖素、腎上腺素和促腎上腺皮質激素），受體，G蛋白，AC，cAMP , PKA。 vAC催化ATP生成cAMP 逆轉錄酶:依賴于RNA的DNA聚合酶，這是一種有效的轉錄RNA成為DNA的酶，產物DNA又稱互補DNA。這些位點上如果沒有克隆外源性DNA片段，在質粒被導入lac的大腸桿菌后，質粒攜帶的半 乳糖苷酶基因將正常表達，與大腸桿菌的半乳糖苷酶基因互補，產生有活性的半乳糖苷酶，加入人工底物Xgal和誘導劑IPTG后，出現藍色的菌落。（十二）、核酸分子雜交的原理？答:具有互補序列的兩條單鏈核酸分子在一定的條件下（適宜的溫度及離子強度等）堿基互補配對結合，重新形成雙鏈；在這一過程中，核酸分子經歷了變性和復性的變化，以及在復性過程中個分子間鍵的形成和斷裂。高濃度的鹽使堿基錯配的雜交體更穩(wěn)定，所以進行序列不完全同源的核酸分子雜交時必須維持雜交反應液中的鹽濃度和洗膜液中的鹽濃度。 非特異性雜交反應:在雜交前應對非特異性雜交反應位點進行封閉，以減少其對探針的非特異性吸附作用。切口處產生一個5末端和3末端，3末端就可以作為引物，在大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ的催化下，以互補的DNA 單鏈為摸板，依次將dNTP連接到切口的3末端的羥基上，合成新的DNA單鏈；同時DNA聚合酶Ⅰ的5→3的核酸外切酶活性在切口處將舊鏈從5末端逐步切 除，新合成鏈不斷延伸，從而使原DNA分子上的部分核苷酸殘基被標記的核苷酸所取代。需要重復進行DNA模板解鏈、引物與模板DNA結合、DNA聚合酶催化新生DNA的合成，即 高溫變性、低溫退火、中溫延伸3個步驟構成PCR反應的一個循環(huán)，此循環(huán)的反復進行，就可使目的DNA得以迅速擴增。過短影響PCR的特異性，過長會提高相應退火溫度，使延伸溫度超過TaqDNA聚合酶最適溫度74℃,影響產物的生成。引物與非特異擴增區(qū)的序列的同源性不超過70％，引物3’末端連續(xù)8個堿基在待擴增區(qū)以外不能有完全互補序列，否則易導致非特異性擴增。l 基本原理:將目的基因或基因組片段用顯微注射等方法注入實驗動物的受精卵或著床前的胚胎細胞中，使目的基因整合到基因組中，然后將此受精卵或著床前的胚胎 細胞再植入受體動物的輸卵管或子宮中，使其發(fā)育成攜帶有外源基因的轉基因動物，人們可以通過分析轉基因和動物表型的關系，揭示外源基因的功能；也可以通過 轉入外源基因培育優(yōu)良的動物品種。②缺失:一個堿基或一段核苷酸鏈從DNA大分子上消失。（二十八）、基因診斷常用的生物學技術。：在原核生物的mRNA上的其實密碼子AUG上游方向413核苷酸之前有一段富含嘌呤的序列，稱SD序列。真核生物有多個復制起點，為多復制子；原核生物只有一個復制起點，為單復制子。 副密碼子：tRNA分子上的決定其攜帶氨基酸種類的區(qū)域，與mRNA上的密碼子的堿基互補，存在于三葉草結構的反密碼環(huán)上。３）轉錄單元： 原核生物為多順反子，真核生物為單順反子，基因家族。 奢侈基因：只在某特定的細胞類型中表達的基因稱奢侈基因。：DNA復制合成滯后鏈時首先合成的DNA片段稱為岡崎片段。：是指那些與結構基因表達調控相關、能夠被基因調控蛋白特異性識別和結合的特異DNA序列。③ 蛋白質肽鏈中的片段缺失:（二十七）、基因治療的策略？答:基因置換或稱基因矯正:特定的目的基因導入特定的細胞，通過定位重組，讓導入的正常基因置換基因組內原有的缺陷基因，不涉及基因組的任何改變。 胚胎干細胞的體外培養(yǎng) 打靶載體導入胚胎干細胞 同源重組胚胎干細胞的篩選 基因敲除胚胎干細胞注射入胚泡 胚泡植入假孕小鼠的子宮中 雜交育種獲得純合的基因敲除動物（二十四）、DNA芯片的原理？答DNA芯片技術就是一種大規(guī)模的集成的固相核酸分子雜交，以大量已知堿基序列的寡核苷酸片段為探針，檢測樣品中哪些核酸序列與其互補，然后通過定性定量分析得出待測樣品的基因序列及表達的信息。（二十一）、真核細胞表達外源基因的條件？答:首先必須具備哺乳動物細胞表達的功能元件。Taq DNA聚合酶 7580℃時具有最高的聚合酶活性，150個核苷酸/秒；具有良好的熱穩(wěn)定性，95℃仍有活性。Mg 2+濃度過低，會顯著降低酶活性。 lKCl 促進引物的退火，濃度太高時會抑制Taq DNA聚合酶活性。引物的5’端可以修飾，如附加限制酶位點，引入突變位點，用生物素、熒光物質、地高辛標記，加入其它短序列包括起始密碼子、終止密碼子等。G+C含量一般占45％ 55％。雜交鏈，引物的Tm值。PCR標記法:在PCR反應底物中，將一種dNTP換成標記物標記的dNTP， 這樣標記的dNTP就在PCR反應的同時摻入到新合成的DNA鏈上?；蚪M探針:從基因組文庫里篩選得到一個特定的基因或基因片段的克隆后，大量擴增、純化，切取插入片段，分離純化為探針。2’,3’ddNTP與普通dNTP不同，它們在脫氧核糖的3’位置缺少一個羥基。 Ca2+CaM依賴的蛋白激酶使目標蛋白磷酸化。 v信號分子與受體結合，引起受體構象變化 活化的Ras作用
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