分子生物學(xué)要點(diǎn)-文庫(kù)吧在線文庫(kù)
【正文】 A作為靶序列，進(jìn)行PCR反應(yīng)的過(guò)程。3移碼突變:在編碼序列中，單個(gè)堿基、數(shù)個(gè)堿基的缺失或插入以及片段的缺失或插入等均可以使突變位點(diǎn)之后的三聯(lián)體密碼閱讀框發(fā)生改變，不能編碼原來(lái)的蛋白質(zhì)的突變。3基因診斷:以DNA或RNA為診斷材料，通過(guò)檢查基因的存在、結(jié)構(gòu)缺陷或表達(dá)異常，對(duì)人體的狀態(tài)和疾病作出診斷的方法和過(guò)程。4SSCP:單鏈構(gòu)象多態(tài)性檢測(cè)是一種基于DNA構(gòu)象差別來(lái)檢測(cè)點(diǎn)突變的方法。4周期蛋白:是一類呈細(xì)胞周期特異性或時(shí)相性表達(dá)、累積與分解的蛋白質(zhì)，它與周期素依賴性激酶共同影響細(xì)胞周期的運(yùn)行。所以，乳糖操縱子的這種調(diào)控機(jī)制為可誘導(dǎo)的負(fù)調(diào)控。轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)控:⑴反式作用因子的活性調(diào)節(jié):①表達(dá)式調(diào)節(jié)——反式作用因子合成出來(lái)就具有活性；②共價(jià)修飾——磷酸化和去磷酸化，糖基化；③配體結(jié)合——許多激素受體是反式作用因子；④蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用——蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)復(fù)合物的解離與形成。 募集接頭蛋白Grb2:表皮生長(zhǎng)因子受體自身被磷酸化后，不僅其激酶活性增強(qiáng)，而且其構(gòu)象發(fā)生變化，從而適合與含SH2結(jié)構(gòu)域的蛋白分子相結(jié)合。（七）、cAMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑？答:組成:胞外信息分子（主要是胰高血糖素、腎上腺素和促腎上腺皮質(zhì)激素），受體，G蛋白，AC，cAMP , PKA。 vAC催化ATP生成cAMP 逆轉(zhuǎn)錄酶:依賴于RNA的DNA聚合酶，這是一種有效的轉(zhuǎn)錄RNA成為DNA的酶，產(chǎn)物DNA又稱互補(bǔ)DNA。這些位點(diǎn)上如果沒(méi)有克隆外源性DNA片段，在質(zhì)粒被導(dǎo)入lac的大腸桿菌后，質(zhì)粒攜帶的半 乳糖苷酶基因?qū)⒄１磉_(dá)，與大腸桿菌的半乳糖苷酶基因互補(bǔ)，產(chǎn)生有活性的半乳糖苷酶，加入人工底物Xgal和誘導(dǎo)劑IPTG后，出現(xiàn)藍(lán)色的菌落。（十二）、核酸分子雜交的原理？答:具有互補(bǔ)序列的兩條單鏈核酸分子在一定的條件下（適宜的溫度及離子強(qiáng)度等）堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，重新形成雙鏈；在這一過(guò)程中，核酸分子經(jīng)歷了變性和復(fù)性的變化，以及在復(fù)性過(guò)程中個(gè)分子間鍵的形成和斷裂。高濃度的鹽使堿基錯(cuò)配的雜交體更穩(wěn)定，所以進(jìn)行序列不完全同源的核酸分子雜交時(shí)必須維持雜交反應(yīng)液中的鹽濃度和洗膜液中的鹽濃度。 非特異性雜交反應(yīng):在雜交前應(yīng)對(duì)非特異性雜交反應(yīng)位點(diǎn)進(jìn)行封閉，以減少其對(duì)探針的非特異性吸附作用。切口處產(chǎn)生一個(gè)5末端和3末端，3末端就可以作為引物，在大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ的催化下，以互補(bǔ)的DNA 單鏈為摸板，依次將dNTP連接到切口的3末端的羥基上，合成新的DNA單鏈；同時(shí)DNA聚合酶Ⅰ的5→3的核酸外切酶活性在切口處將舊鏈從5末端逐步切 除，新合成鏈不斷延伸，從而使原DNA分子上的部分核苷酸殘基被標(biāo)記的核苷酸所取代。需要重復(fù)進(jìn)行DNA模板解鏈、引物與模板DNA結(jié)合、DNA聚合酶催化新生DNA的合成，即 高溫變性、低溫退火、中溫延伸3個(gè)步驟構(gòu)成PCR反應(yīng)的一個(gè)循環(huán)，此循環(huán)的反復(fù)進(jìn)行，就可使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。過(guò)短影響PCR的特異性，過(guò)長(zhǎng)會(huì)提高相應(yīng)退火溫度，使延伸溫度超過(guò)TaqDNA聚合酶最適溫度74℃,影響產(chǎn)物的生成。引物與非特異擴(kuò)增區(qū)的序列的同源性不超過(guò)70％，引物3’末端連續(xù)8個(gè)堿基在待擴(kuò)增區(qū)以外不能有完全互補(bǔ)序列，否則易導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。l 基本原理:將目的基因或基因組片段用顯微注射等方法注入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的受精卵或著床前的胚胎細(xì)胞中，使目的基因整合到基因組中，然后將此受精卵或著床前的胚胎 細(xì)胞再植入受體動(dòng)物的輸卵管或子宮中，使其發(fā)育成攜帶有外源基因的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，人們可以通過(guò)分析轉(zhuǎn)基因和動(dòng)物表型的關(guān)系，揭示外源基因的功能；也可以通過(guò) 轉(zhuǎn)入外源基因培育優(yōu)良的動(dòng)物品種。②缺失:一個(gè)堿基或一段核苷酸鏈從DNA大分子上消失。（二十八）、基因診斷常用的生物學(xué)技術(shù)。：在原核生物的mRNA上的其實(shí)密碼子AUG上游方向413核苷酸之前有一段富含嘌呤的序列，稱SD序列。真核生物有多個(gè)復(fù)制起點(diǎn)，為多復(fù)制子；原核生物只有一個(gè)復(fù)制起點(diǎn)，為單復(fù)制子。 副密碼子：tRNA分子上的決定其攜帶氨基酸種類的區(qū)域，與mRNA上的密碼子的堿基互補(bǔ)，存在于三葉草結(jié)構(gòu)的反密碼環(huán)上。３）轉(zhuǎn)錄單元： 原核生物為多順?lè)醋?，真核生物為單順?lè)醋樱蚣易濉? 奢侈基因：只在某特定的細(xì)胞類型中表達(dá)的基因稱奢侈基因。：DNA復(fù)制合成滯后鏈時(shí)首先合成的DNA片段稱為岡崎片段。：是指那些與結(jié)構(gòu)基因表達(dá)調(diào)控相關(guān)、能夠被基因調(diào)控蛋白特異性識(shí)別和結(jié)合的特異DNA序列。③ 蛋白質(zhì)肽鏈中的片段缺失:（二十七）、基因治療的策略？答:基因置換或稱基因矯正:特定的目的基因?qū)胩囟ǖ募?xì)胞，通過(guò)定位重組，讓導(dǎo)入的正?；蛑脫Q基因組內(nèi)原有的缺陷基因，不涉及基因組的任何改變。 胚胎干細(xì)胞的體外培養(yǎng) 打靶載體導(dǎo)入胚胎干細(xì)胞 同源重組胚胎干細(xì)胞的篩選 基因敲除胚胎干細(xì)胞注射入胚泡 胚泡植入假孕小鼠的子宮中 雜交育種獲得純合的基因敲除動(dòng)物（二十四）、DNA芯片的原理？答DNA芯片技術(shù)就是一種大規(guī)模的集成的固相核酸分子雜交，以大量已知堿基序列的寡核苷酸片段為探針，檢測(cè)樣品中哪些核酸序列與其互補(bǔ)，然后通過(guò)定性定量分析得出待測(cè)樣品的基因序列及表達(dá)的信息。（二十一）、真核細(xì)胞表達(dá)外源基因的條件？答:首先必須具備哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)的功能元件。Taq DNA聚合酶 7580℃時(shí)具有最高的聚合酶活性，150個(gè)核苷酸/秒；具有良好的熱穩(wěn)定性，95℃仍有活性。Mg 2+濃度過(guò)低，會(huì)顯著降低酶活性。 lKCl 促進(jìn)引物的退火，濃度太高時(shí)會(huì)抑制Taq DNA聚合酶活性。引物的5’端可以修飾，如附加限制酶位點(diǎn)，引入突變位點(diǎn)，用生物素、熒光物質(zhì)、地高辛標(biāo)記，加入其它短序列包括起始密碼子、終止密碼子等。G+C含量一般占45％ 55％。雜交鏈，引物的Tm值。PCR標(biāo)記法:在PCR反應(yīng)底物中，將一種dNTP換成標(biāo)記物標(biāo)記的dNTP， 這樣標(biāo)記的dNTP就在PCR反應(yīng)的同時(shí)摻入到新合成的DNA鏈上?；蚪M探針:從基因組文庫(kù)里篩選得到一個(gè)特定的基因或基因片段的克隆后，大量擴(kuò)增、純化，切取插入片段，分離純化為探針。2’,3’ddNTP與普通dNTP不同，它們?cè)诿撗鹾颂堑?’位置缺少一個(gè)羥基。 Ca2+CaM依賴的蛋白激酶使目標(biāo)蛋白磷酸化。 v信號(hào)分子與受體結(jié)合，引起受體構(gòu)象變化 活化的Ras作用
化學(xué)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1