【正文】 子量較低，約占非組蛋白的20%，染色質(zhì)的8%。molecules=than,的DNA.2X10^11Km strand），又稱antisensewhichto 二.他們把放射性標記的氨基酸注射到大鼠體內(nèi)，經(jīng)過一段時間后收獲其肝臟，進行蔗糖梯度沉淀并分析各種細胞成份中的放射性蛋白質(zhì)。UGUUUCCUUUAG 實驗6: 以隨機多聚物指導多肽合成。 以人工合成的三核苷酸如UUU、UCU、UGU等為模板，在含核糖體、AAtRNA的反應(yīng)液中保溫后通過硝酸纖維素濾膜，只有游離的AAtRNA因相對分子質(zhì)量小而通過濾膜，而核糖體或與核糖體結(jié)合的AAtRNA則留在濾膜上，這樣可把已結(jié)合與未結(jié)合的AAtRNA分開。1966年，Crick根據(jù)立體化學原理提出擺動假說（wobble當反密碼子第一位是U或G時，能識別兩個密碼子。所有的tRNA都能夠與核糖體的P位點和A位點結(jié)合，此時，tRNA分子三葉草型頂端突起部位通過密碼子：反密碼子的配對與mRNA相結(jié)合，而其3’末端恰好將所轉(zhuǎn)運的氨基酸送到正在延伸的多肽上。D臂是根據(jù)它含有二氫尿嘧啶（dihydrouracil）命名的。tRNA合成酶的識別有關(guān)。tRNA合成酶識別。 EAAAMP+ofitstheseparateRNA，rRNA）組成的亞細胞顆粒。 核糖體可解離為亞基或結(jié)合成70S/80S顆粒。信使核糖核酸 mRNA 蛋白質(zhì)合成消耗了細胞中90%左右用于生物合成反應(yīng)的能量。ActivationinThebindsthethischaintheanfactor（EF）終止因子。UAA和UGA。核糖體大亞基 Mg2+ 合成的起始可分為三步: 30S釋放三個起始因子。 eIF3 eIF5： 有完整的起始復合物，氨基酰tRNA首先必須與GTPEFTu復合物相結(jié)合，形成氨基酰tRNAGTPEFTu復合物并與70S中的A位點相結(jié)合。transferase 肽鏈的終止 當終止密碼子進入核糖體A位點時，在釋放因子RF13的作用下：對鏈霉素敏感位點在30S亞基上。因此，前3種抗生素被廣泛用于人類醫(yī)學，后兩種則很少在醫(yī)學上使用。DNA和RNA雖然很相似，只有T或U及核糖的第二位碳原子上有所不同，但它們的生物學活性卻很不同。在糖代謝中也有重要作用，如生成UDPG和 其次，把甘氨酸中的三個基團加到PRA上。 參與合成AMP的是①腺苷琥珀酸合成酶和②腺苷琥珀酸裂解酶。phosphate）。 大腸桿菌核苷酸還原酶有兩大特征，它的生物學活性和底物特異性同時受效應(yīng)子（effector 2.2’上的COH失去氧原子，生成dNDP。oxidase或Guanine許多化療（chemotherapy）藥劑都針對核苷酸合成途徑。 二、氨基酸代謝 按所占的質(zhì)量比例計算，N在生物體內(nèi)的重要性排在CHO之后，列第4位。ADP+Pi+H+ 因此，谷氨酰胺合成酶是氮代謝中的主要調(diào)控位點。氨基酸合成的六條主要途徑 。group、Met殘基，有時還包括N揣多個殘基或C端的殘基都會被切除。of 四、蛋白質(zhì)的運輸和降解蛋白質(zhì)合成之初，一旦信號肽序列的N端暴露在核糖體外，該序列（包括核糖體）就迅速與SRP（signal與Ubiquitin相連的蛋白將被送到一個依賴于ATP的蛋白質(zhì)降解系統(tǒng)（Proteasome，Mr.每個DNA復制的獨立單元被稱為復制子（replicon），主要包括復制起始位點（Origine Topoisomerase，主要功能是消除DNA解鏈過程中所產(chǎn)生的扭曲力。 1.當細胞中存在足夠的SSB和DNA DNA甲基化與DNA復制起始密切相關(guān)。由DNALigase把兩個片段相連。 4. ㈡、DNA的損傷修復 1．orrepair） 最簡單的轉(zhuǎn)座子不含有任何宿主基因而常被稱為插入序列（insertion 轉(zhuǎn)座作用的機制 轉(zhuǎn)座時發(fā)生的插入作用有一個普遍的特征，那就是受體分子中有一段很短的（312bp）、被稱為靶序列的DNA會被復制，使插入的轉(zhuǎn)座子位于兩個重復的靶序列之間。轉(zhuǎn)座引起插入突變。 mRNA，編碼了一個或多個蛋白質(zhì)序列；tRNA，把mRNA上的遺傳信息變?yōu)槎嚯闹械陌被嵝畔?；rRNA，是合成蛋白質(zhì)的工廠核糖體中的主要成份。 一旦RNA聚合酶啟動了基因轉(zhuǎn)錄，它就會沿著模板5’→3’方向不停地移動，合成RNA鏈，直到遇到終止信號時才釋放新生的RNA鏈，并與模板DNA脫離。依賴于ρ因子的終止 105的六聚體蛋白，它能水解各種核苷三磷酸，實際上是一種NTP酶。polⅡ轉(zhuǎn)錄過程中碰到受損傷的核苷酸時，TFⅡH能及時啟動核苷酸切除修復系統(tǒng)，將損傷修復。5’的磷酸二酯鍵發(fā)起進攻。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)至少有5種snRNAsU1，U2，U4，U5，U6。 年份. 1957 19591960W. 19721973Submit=+%CB%D1%CB%F7+’克隆。L.Submit=+%CB%D1%CB%F7+’ 轉(zhuǎn)基因小鼠；A.HREF=’HTTP: Article ?Field=Titleamp。 1983Submit=+%CB%D1%CB%F7+’ 轉(zhuǎn)基因植物。 1988 1992 1997NBSP。Rubin得到Aamp。NBSP。 19811977年完成了全長5387bp的噬菌體φ174基因組測定。NBSP。、。Brenner等人證明，多肽鏈上的氨基酸序列與該基因中的核苷酸序列存在著共線性關(guān)系。 1961Meselson和F..F第五講nuclear 所以，RNA加工成熟主要包括：5’加帽子結(jié)構(gòu)；3’加多聚A；切除內(nèi)含子寡聚U的存在使雜合鏈的3’端部分出現(xiàn)不穩(wěn)定的rU但是，也存在三個主要不同點： A．轉(zhuǎn)座產(chǎn)生的染色體畸變。轉(zhuǎn)座酶（transposase）和解離酶（resolvase）分別作用于原始轉(zhuǎn)座子和復制轉(zhuǎn)座子。IS序列都是可以獨立存在的單元，帶有介導自身移動的蛋白。因此，轉(zhuǎn)座有別于同源重組，它依賴于DNA的復制。 3.堿基切除修復（BaseExcisionreplicatingTer有點像一個陷井（trap），使復制叉只能進入，不能出來。 滯后鏈的合成：產(chǎn)生Okazaki只有當oriC被從膜上釋放出來，子鏈被Dam甲基化后，才能有效地與DnaA蛋白結(jié)合，起始新一輪的DNA復制。in大約20個左右的DnaA蛋白首先與OriC中的4個9堿基重復區(qū)相結(jié)合； b.polymerases，合成新生DNA鏈，切除RNA引物。 大腸桿菌DNA的復制需要有20種左右的酶和蛋白質(zhì)因子參與，整個DNA復制機器被稱之為DNA當細胞中存在有錯誤或半衰期很短的蛋白質(zhì)時，該蛋白酶就被激活。(α,β亞基)的作用有點像SRP受體。transport（1）一般帶有1015個疏水氨基酸；C只有與血紅素（heme）相結(jié)合才有功能。許多蛋白質(zhì)都帶有1530個殘基的signalOxide)。當?shù)?97位酪氨酸被腺苷化后（加上AMP），該酶更容易受變構(gòu)抑制劑的反饋調(diào)節(jié)。 1.synthase 嘌呤代謝突變會引起重要疾病。Acid和Urea。 4.當dATP與該位點相結(jié)合時，UDP和CDP的還原反應(yīng)優(yōu)先進行。 5．核糖核苷酸（ribonucleotides）是脫氧核糖核苷酸（Deoxyribonucleotides）的前體。嘌呤核苷酸合成中的反饋調(diào)節(jié) 第六，羧基化 第七，通過分子重排將羧基從咪唑第4碳的環(huán)外氨基上轉(zhuǎn)移到第5位碳原子上。 De 一、核苷酸的合成與代謝 核苷酸是DNA和RNA的前體是細胞內(nèi)化學能流通領(lǐng)域中的載體（ATP，第四講tRNA上的氨基一樣，能與生長中肽鏈上的羧基生成肽鍵，這個反應(yīng)的產(chǎn)物是一條3’羧基端掛了一嘌呤霉素。 抗菌素對蛋白質(zhì)合成的作用可能是阻止mRNA與核糖體結(jié)合（氯霉素），或阻止AAtRNA與核糖體結(jié)合（四環(huán)素類），或干擾AAtRNA與核糖體結(jié)合而產(chǎn)生錯讀（鏈霉素、新霉素、卡那霉素等），或作為競爭性抑制劑抑制蛋白質(zhì)合成。核糖體向mRNA的3’方向移動一個密碼子，使得帶有第二個氨基酸（現(xiàn)已成為二肽）的tRNA從A位進入P位，并使第一個tRNA從P位進入E位。 有GTP。促進沒有蛋白質(zhì)合成活性的80S核糖體解離成40S和60S兩個亞基。具有RNA解旋酶活性，解除mRNA模板的次級結(jié)構(gòu)并使之與40S小亞基結(jié)合，形成eIF4F復合物。 eIF2小亞基、起始因子IF終止因子行使功能時需要GTP。UAA和UAG。bondtranslationalaCompletionbondsribosomalcodeon(This ： 翻譯的起始——核糖體與mRNA結(jié)合并與氨基酰tRNA生成起始復合物。deoxyribonucleic細胞中大多數(shù)核糖體處于非活性的穩(wěn)定狀態(tài)，單獨存在，只有少數(shù)與mRNA一起形成多聚核糖體。大亞基負責氨基酸及tRNA攜帶的功能，如肽鍵的形成、AA真核生物核糖體中RNA占3/5，蛋白質(zhì)占2/5。theaminoacylAMP Thetois 蛋白質(zhì)合成的真實性主要決定于AAtRNA合成酶翻譯階段遺傳信息從mRNA分子轉(zhuǎn)移到結(jié)構(gòu)極不相同的蛋白質(zhì)分子，信息是以能被翻譯成單個氨基酸的三聯(lián)子密碼形式存在的，在這里起作用的是解碼機制。每個tRNA分子至少含有2個稀有堿基，最多有19個，多數(shù)分布在非配對區(qū)，特別是在反密碼子3’端鄰近部位出現(xiàn)的頻率最高，且大多為嘌呤核苷酸。 tRNA的三葉草型二級結(jié)構(gòu) 受體臂（acceptor ④任意一個密碼子的前兩位堿基都與tRNA 4種核苷酸組成61個編碼氨基酸的密碼子和3個終止密碼子，它們不能與tRNA的反密碼子配對，但能被終止因子或釋放因子識別，終止肽鏈的合成。 如果把氨基酸與ATP和肝臟細胞質(zhì)共培養(yǎng)，氨基酸就會被固定在某些熱穩(wěn)定且可溶性RNA分子（transferAGUGUAUCU 實驗5: 以共聚三核苷酸作為模板可得到有3種氨基酸組成的多肽。 實驗4: 以特定序列的共聚物為模板指導多肽的合成。Crick等人第一次證實只有用三聯(lián)子密碼的形式才能把包含在由AUGC四個字母組成遺傳信息（核酸）準確無誤地翻譯成由20種不同氨基酸組成的蛋白質(zhì)序列，實現(xiàn)遺傳信息的表達。若以兩種核苷酸作為一個密碼（二聯(lián)子），能代表42=16種氨基酸。轉(zhuǎn)錄是指拷貝出一條與DNA鏈序列完全相同（除了T→U之外）的RNA單鏈的過程，是基因表達的核心步驟。nucleicis 編碼鏈（coding如人DNA中平均每毫米只帶有50個基因,而E.cells 果蠅帶有25倍于E.bpis= 幾乎每個基因序列都與它所編碼的蛋白質(zhì)序列呈線性對應(yīng)狀態(tài)。DNA結(jié)合蛋白。 組蛋白的修飾作用。組蛋白是染色體的結(jié)構(gòu)蛋白，它與DNA組成核小體。 5’(TxGy)n 3’(AxCy)n 其中X、Y一般為1－4，單細胞真核生物中n常為20－100，高等真核生物中1500。Chromosomes Telomeres ％是不重復或低重復序列,絕大部分功能基因都位于這類序列中。在卵細胞形成過程中這些基因可進行幾千次不同比例的復制，產(chǎn)生2106個拷貝，使rDNA占卵細胞DNA的75%，從而使該細胞能積累1012個核糖體。在單倍體基因組里，這些序列一般只有一個或幾個拷貝，它占DNA總量的40%－80%。 染色質(zhì)DNA的Tm值比自由DNA高，說明在染色質(zhì)中DNA極可能與蛋白質(zhì)分子相互作用；在染色質(zhì)狀態(tài)下，由DNA聚合酶和RNA聚合酶催化的DNA復制和轉(zhuǎn)錄活性大大低于在自由DNA中的反應(yīng)；DNA酶I（DNaseI）對染色質(zhì)DNA的消化遠遠慢于對純DNA的作用。givenorganism如果設(shè)想將人體細胞中的DNA分子繞地球一周，那么，每個堿基大約只占1－5厘米，而一個2－3kb的基因只相當于地球上一條數(shù)十米長，數(shù)厘米寬的線段！ Genotypeasamp。monlythegivenoflivingthe子代噬菌體中帶有50%標記的DNA，卻只有1%的標記蛋白質(zhì)。解剖死鼠，發(fā)現(xiàn)有大量活的S型（而不是R型）細菌。control.recentlyatheaftercontrol.chemicalbase。baseboth)specificitypergenomebepairing.of如一條鏈上某一堿基是C，另一條鏈上與它配對的堿基必定是G。對DNA分子的物理化學研究導致了現(xiàn)代生物學翻天覆地的革命，這更是Avery所沒有想到。 原核生物的基因組和染色體結(jié)構(gòu)都比真核生物簡單，轉(zhuǎn)錄和翻譯在同一時間和空間內(nèi)發(fā)生，基因表達的調(diào)控主要發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平。NBSP。DNA重組技術(shù)是核酸化學、蛋白質(zhì)化學、酶工程及微生物學、遺傳學、細胞學長期深入研究的結(jié)晶，而限制性內(nèi)切酶DNA連接酶及其他工具酶的發(fā)現(xiàn)與應(yīng)用則是這一技術(shù)得以建立的關(guān)鍵。 三、分子生物學的主要研究內(nèi)容 所有生物體中的有機大分子都是以碳原子為核心，并以共價鍵的形式與氫、氧、氮及磷以不同方式構(gòu)成的。在蛋白質(zhì)化學方面，繼Sumner在1936年證實酶是蛋白質(zhì)之后，Sanger利用紙電泳及層析技術(shù)于1953年首次闡明胰島素的一級結(jié)構(gòu)，開創(chuàng)了蛋白質(zhì)序列分析的先河。而Kendrew和Perutz利用X射線衍射技術(shù)解析了肌紅蛋白（myoglobin）及血紅蛋白（hemoglobin）的三維結(jié)構(gòu)，論證了這些蛋白質(zhì)在輸送分子氧過程中的特殊作用，成為研究生物大分子空間立體構(gòu)型的先驅(qū)。 1972年，Paul 1993年，美國科學家Roberts和Sharp因發(fā)現(xiàn)斷裂基因（introns）而獲