【正文】 RNA不需加工就可直接作為蛋白質(zhì)合成模板；7）起始tRNA 9 分子生物學(xué)考試寶典（私房版） 攜帶的是甲酰蛋氨酸（fMet）可有多個(gè)起始部位，同時(shí)合成不同蛋白；8）核糖體直接結(jié)合到AUG部位 ：1）轉(zhuǎn)錄和翻譯分開(kāi)，產(chǎn)物為單順?lè)醋?，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物需進(jìn)行加工；2）轉(zhuǎn)錄激活主要受順式作用元件和反式作用因子相互作用調(diào)節(jié)；3）有3種RNA聚合酶，分別轉(zhuǎn)錄不同RNA；4）起始tRNA攜帶的是蛋氨酸，就一個(gè)起始部位；5）核糖體結(jié)合與“帽子”結(jié)構(gòu)，掃描找到AUG。 四、基因突變的遺傳效應(yīng) ：發(fā)生堿基取代、缺失、插入都會(huì)引起DNA堿基組成和排列順序的改變，但就轉(zhuǎn)錄、翻譯合成蛋白質(zhì)而言，基因突變會(huì)產(chǎn)生多種遺傳效應(yīng)。 、修飾劑引起堿基對(duì)的改變 1）復(fù)制時(shí)產(chǎn)生堿基錯(cuò)配； 2）修復(fù)時(shí)產(chǎn)生堿基錯(cuò)配； 3）堿基自發(fā)改變導(dǎo)致DNA損傷：如互變異構(gòu)移位、脫氨基、堿基丟失。 70. 基因治療：一般是指將限定的遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)入患者特定的靶細(xì)胞，以最終達(dá)到預(yù)防或改變特殊疾病狀態(tài)為目的的治療方法。受體可分為膜受體和細(xì)胞內(nèi)受體，其作用特點(diǎn)是：高度特異性，高親和力，可飽和性，可逆性，放大效應(yīng) 66. G蛋白：即鳥(niǎo)苷酸結(jié)合蛋白，是由α、β、γ三個(gè)亞基構(gòu)成的異源三聚體，另一類G蛋白為小分子單體G蛋白。 60. DNA芯片技術(shù)：在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接將大量DNA探針以顯微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后與標(biāo)記的樣品雜交，通過(guò)對(duì)雜交信號(hào)的檢測(cè)分析，即可得出樣品的遺傳信息（基因序列及表達(dá)的信息）的技術(shù)，常用計(jì)算機(jī)硅芯片作為固相支持物。 54. 核酶：是一種可以催化RNA切割和RNA剪接反應(yīng)的由RNA組成的酶。 48. 亮氨酸拉鏈（leucine zipper）：有些反式作用因子結(jié)合DNA結(jié)構(gòu)域中有一段約30個(gè)氨基酸組成的核心序列，每個(gè)6個(gè)氨基酸殘基有規(guī)律的出現(xiàn)1個(gè)亮氨酸殘基，能夠形成兩性α螺旋，一端為富含堿性氨基酸的親水的堿性區(qū)域，一端為成行亮氨酸構(gòu)成的疏水區(qū)（亮氨酸拉鏈區(qū)），兩個(gè)具有亮氨酸拉鏈區(qū)的單體以疏水力相互作用就形成了亮氨酸拉鏈。 44. 端粒（telomere）：是位于真核生物染色體末端的，由DNA和蛋白質(zhì)組成的一膨出結(jié)構(gòu)。CDKI分為CIP/KIP家族和INK家族。 33. 抑癌基因：存在于正常細(xì)胞內(nèi)的一大類抑制細(xì)胞生長(zhǎng)并具有潛在抑癌作用的基因。 30. 癌基因：是細(xì)胞內(nèi)控制細(xì)胞生長(zhǎng)的基因，具有潛在的誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的特性。其兩端側(cè)翼序列是兩個(gè)反向重復(fù)序列（IS）。 19. 操縱元件：是一段能夠被不同基因表達(dá)調(diào)控蛋白識(shí)別和結(jié)合的DNA序列，是決定基因表達(dá)效率的關(guān)鍵元件。 12. 分子克?。涸隗w外對(duì)DNA分子按照既定目的和方案進(jìn)行人工重組，將重組分子導(dǎo)入宿主，使其在宿主中擴(kuò)增和繁殖，以獲得該DNA分子的大量拷貝。 8. 微衛(wèi)星DNA：又稱為短串聯(lián)重復(fù)（STR），是一類更為簡(jiǎn)單的寡核苷酸串聯(lián)重復(fù)序列，其重復(fù)單位為2～6bp，重復(fù)次數(shù)10～60次左右，其總長(zhǎng)度通常小于150bp，分布在所有的染色體。 2. 基因組：細(xì)胞或生物體內(nèi)一套完整單倍體的遺傳物質(zhì)的總和。其主要功能是參與翻譯起始調(diào)控，是翻譯的必需序列。兩個(gè)反向序列間可以有間隔序列，也可以串聯(lián)在一起（回文結(jié)構(gòu)）。研究?jī)?nèi)容包括：基因組的表達(dá)，蛋白質(zhì)產(chǎn)物的功能，基因組多樣性的研究，基因組功能注釋。 23. CAP：是大腸桿菌分解代謝物基因活化蛋白。 27. 管家基因：在生物體生命全過(guò)程都是必須的，且在一個(gè)生物個(gè)體幾乎所有細(xì)胞都持續(xù)表達(dá)的基因。特點(diǎn)：1）存在廣泛；2）高度保守；3）原癌基因是必需基因，產(chǎn)物有重要功能；4）在某些因素作用下可發(fā)生突變，成為癌基因。 37. 周期蛋白依賴性蛋白激酶抑制蛋白（CDKI）：是對(duì)CDK激酶起負(fù)性調(diào)控作用的蛋白質(zhì)。 42. DNA變性：在理化因素作用下DNA分子由穩(wěn)定的雙螺旋結(jié)構(gòu)松解為無(wú)規(guī)則線性結(jié)構(gòu)的現(xiàn)象。包括：?jiǎn)?dòng)子、上游啟動(dòng)元件、增強(qiáng)子、加尾信號(hào)和一些反應(yīng)元件等。對(duì)蛋白質(zhì)激酶所引起的變化產(chǎn)生衰減信號(hào)。 58. 核酸分子雜交：具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下按堿基互補(bǔ)原則退火形成雙鏈。又稱為第一信使。粘?？梢韵袷删w一樣被包裝成λ粒子。 7 分子生物學(xué)考試寶典（私房版） 二、DNA損傷因素及機(jī)制 1）形成胸腺嘧啶二聚體，影響雙螺旋結(jié)構(gòu)，使復(fù)制和轉(zhuǎn)錄受阻； 2）引起DNA間交聯(lián)，DNA與蛋白質(zhì)交聯(lián)，甚至DNA鏈斷裂。包括同源重組和非同源重組。如果插入或缺失核苷酸是3的整數(shù)倍，合成多肽鏈就會(huì)增加或減少一個(gè)或數(shù)個(gè)氨基酸。 在乳糖存在時(shí)，乳糖經(jīng)透酶作用進(jìn)入細(xì)胞，在由β半乳糖苷酶催化生成半乳糖。衰減子位于結(jié)構(gòu)基因E和操縱元件之間的L基因中。具有鋅指結(jié)構(gòu)的反式作用因子都含有幾個(gè)相同的鋅指結(jié)構(gòu)，每個(gè)指結(jié)構(gòu)的指尖部分可以進(jìn)入DNA雙螺旋的大溝或小溝。 ：真核生物RNA聚合酶識(shí)別的是由通用轉(zhuǎn)錄因子與DNA形成的蛋白質(zhì)DNA復(fù)合物，只有當(dāng)一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到DNA上，形成有功能的啟動(dòng)子，才能被RNA聚合酶所識(shí)別并結(jié)合。 十、真核生物轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控機(jī)制 ’端加帽和3’端多聚腺苷酸化：是保持mRNA轉(zhuǎn)錄過(guò)程穩(wěn)定，不被降解的重要因素。主要與細(xì)胞增殖、分裂、分化及癌變有關(guān)。 3）在Mg2+存在下，GTP取代GDP使α亞基暴露與AC結(jié)合位點(diǎn)，結(jié)合并激活A(yù)C。 4）活化的Ras進(jìn)而活化Raf，Raf是一種MAPKKK,可逐步激活MEK（MAPKK）→ERK1（MAPK），完成MAPK的級(jí)聯(lián)活化； 5）活化的ERK1轉(zhuǎn)位至核內(nèi)，作用于一些轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，影響基因的表達(dá)。細(xì)胞受到生長(zhǎng)因子刺激→在G1中期表達(dá)cyclin D，G1晚期期表達(dá)cyclin E分別與Cdk4/6 和Cdk2形成復(fù)合物→復(fù)合物使Rb蛋白磷酸化而釋放轉(zhuǎn)錄因子E2F靶基因表達(dá)，不再依賴生長(zhǎng)因子→通過(guò)限制點(diǎn)。 ①G1后期開(kāi)始表達(dá)cyclin B，cyclin B與Cdk1結(jié)合，在G2M轉(zhuǎn)折處，Cdk1被磷酸酶Cdc25C 去磷酸化而活化cyclinBCdk1,導(dǎo)致底物蛋白（組蛋白核纖層蛋白等）的磷酸化，細(xì)胞通過(guò)G2M關(guān)卡。在G1中期及晚期，Cyclin DCdk4/6和Cyclin ECdk2先后磷酸化RB。P53通過(guò)上述兩種途徑使細(xì)胞周期停滯，起著穩(wěn)定基因組和抑制突變細(xì)胞產(chǎn)生的作用，從而抑制腫瘤的發(fā)生。 16 分子生物學(xué)考試寶典（私房版） 十九、DNA聚合酶的作用 Ⅰ(全酶)：具有5’→3’聚合酶活性、5’→3’外切酶活性、3’→5’外切酶活性（校正活性）。目的基因必需是cDNA，起始密碼子(ATG)上游的非編碼序列或信號(hào)肽序列應(yīng)去除。 二十三、腺相關(guān)病毒載體特性及其應(yīng)用前景 腺相關(guān)病毒是一類單鏈線狀DNA缺陷型病毒。 基因功能研究的工具包括動(dòng)物模型和模式生物。 1）反義RNA抑制基因表達(dá)：反義RNA是能與mRNA互補(bǔ)配對(duì)的RNA分子，可通過(guò)與mRNA結(jié)合而阻礙蛋白質(zhì)合成； 2）RNA干涉是指由短雙鏈RNA誘導(dǎo)的同源mRNA的降解過(guò)程，可使基因表達(dá)受到抑制。 ：通過(guò)導(dǎo)入外源基因使靶細(xì)胞表達(dá)其本身不表達(dá)的基因。 1）通過(guò)基因置換和基因增補(bǔ)，導(dǎo)入多種抑癌基因抑制癌癥的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移； 2）抑制癌基因的活性，通過(guò)干擾癌基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯，發(fā)揮抑癌作用； 3）增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的免疫原性，通過(guò)對(duì)腫瘤組織進(jìn)行細(xì)胞因子修飾，刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生對(duì)腫瘤細(xì)胞的溶解和排斥作用； 4）導(dǎo)入“自殺基因”殺傷癌細(xì)胞； 5）提高化療效果的輔助基因治療：藥物增敏、耐藥基因的相關(guān)治療 6）聯(lián)合基因治療：自殺基因、免疫因子基因、抑癌基因、自殺基因與細(xì)胞因子基因、抑癌基因與免疫因子基因。 ②引物擴(kuò)增跨度：以500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。 3. Mg2+濃度：Mg2+對(duì)PCR擴(kuò)增的特異性和產(chǎn)量有顯著的影響，在一般的 PCR反應(yīng)中，各種dNTP濃度為200umol/L時(shí)，Mg2+～ mmol/L為宜。 ：循環(huán)次數(shù)決定PCR擴(kuò)增程度，取決于模板DNA的濃度 循環(huán)次數(shù)一般在30～40次之間，循環(huán)次數(shù)越多，非特異性產(chǎn)物的量亦隨之增多。分析時(shí)先通過(guò)特異性的一抗與轉(zhuǎn)移膜上的蛋白質(zhì)結(jié)合，再用酶標(biāo)記（辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶）或放射性核素標(biāo)記的二抗與之結(jié)合，反應(yīng)后用底物顯色或放射自顯影檢測(cè)蛋白質(zhì)區(qū)帶的信號(hào)，底物亦可與化學(xué)發(fā)光劑結(jié)合以提高敏感度。將變性DNA分子與這些隨機(jī)引物雜交后，在一種標(biāo)記dNTP和3種未標(biāo)記dNTPs存在下，由klenow聚合酶合成帶有標(biāo)記的DNA探針。缺點(diǎn)：獲得復(fù)雜，含polg dT可產(chǎn)生非特異性雜交。 優(yōu)點(diǎn)：雜交體穩(wěn)定性高，雜交條件嚴(yán)格，特異性更高；不存在互補(bǔ)雙鏈結(jié)合，雜交效率高；不存在高度重復(fù)序列；雜交后可用RNase將未雜交探針消化，本底背景低。 四十二、RNAi的機(jī)制及主要技術(shù)過(guò)程 RNA干涉是指由短雙鏈RNA誘導(dǎo)的同源mRNA的降解過(guò)程，可使基因表達(dá)受到抑制。 27 分子生物學(xué)考試寶典（私房版） 補(bǔ) 充 名詞解釋：基因型、表現(xiàn)型、基因文庫(kù)、GTAG法則、質(zhì)粒、SNP、母系遺傳、不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄、分子伴侶、信號(hào)肽、同裂酶、同尾酶、限制性核酸內(nèi)切酶 問(wèn)答題：基因芯片的基本原理、蛋白質(zhì)芯片的概念和原理、原核生物轉(zhuǎn)錄翻譯的調(diào)控、真核生物翻譯水平的調(diào)控機(jī)制、外源基因?qū)胝婧思?xì)胞的方法、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的原理和步驟、酵母雙雜交的原理（06研考）、酵母雙雜交系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)及應(yīng)用 2816 / 16。 RNAi技術(shù)的主要過(guò)程： 并選擇被干涉靶點(diǎn)：1）避開(kāi)蛋白結(jié)合部位，選擇AUG下游50100bp區(qū)的AA（N19）TT或AA（N21）序列；2）GC比50%左右，長(zhǎng)30nt；3）與其它RNA序列無(wú)同源性； ：1）化學(xué)合成法（價(jià)格較高）；2）體外轉(zhuǎn)錄法（操作難度大）；3）體內(nèi)轉(zhuǎn)錄法（簡(jiǎn)單易行，效果 穩(wěn)定）； 。 四十一、反義RNA用于基因治療必須解決兩個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題，及如何解決？ ：反義RNA進(jìn)行治療時(shí)必須針對(duì)病變的特殊組織、器官或系統(tǒng)特殊細(xì)胞，對(duì)其他正常細(xì)胞影響越小越好，這就必須解決專一性問(wèn)題。 優(yōu)點(diǎn)：獲得方便，純度高。 ：利用T4 DNA聚合酶、末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶等在DNA末端進(jìn)行部分標(biāo)記。這一過(guò)程實(shí)質(zhì)上是核酸分子變性、復(fù)性過(guò)程，是高度特異的過(guò)程。2’,3’ddNTP與普通dNTP不同，它們?cè)诿撗鹾颂堑?’位置缺少一個(gè)羥基。 4. dNTP 的質(zhì)量與濃度：工作濃度為20～200umol/L，濃度過(guò)高可增加反應(yīng)速度，也增加錯(cuò)配率和實(shí)驗(yàn)成本，同時(shí)也可與Mg2+結(jié)合，使游離的Mg2+濃度下降，影響DNA聚合酶的活性。 ⑤引物 3’端的堿基要求嚴(yán)格配對(duì)（不能做任何修飾）,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。） 3. 病毒性疾病的基因治療 1）誘導(dǎo)對(duì)病毒RNA的降解； 2）抑制病毒與宿主細(xì)胞的結(jié)合； 3）干擾病毒基因組的轉(zhuǎn)錄起始和調(diào)控； 4）抑制病毒基因組的復(fù)制和蛋白質(zhì)合成； 5）RNA干擾技術(shù)。 ：將自殺基因轉(zhuǎn)移入宿主細(xì)胞中，該基因編碼的酶能使無(wú)毒性的藥物前體轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒性代謝物，誘導(dǎo)靶細(xì)胞“自殺”，清除腫瘤細(xì)胞。 二十五、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物構(gòu)建外源基因載體的要求和導(dǎo)入方法 ：1）外源基因能夠表達(dá)；2）常需要報(bào)告基因；3）根據(jù)需要，可選用組織特異性啟動(dòng)子、可誘導(dǎo)型啟動(dòng)子等；4）導(dǎo)入前應(yīng)將其線性化；5）純度要高。 采用的技術(shù)有基因轉(zhuǎn)移、基因敲除、RNA干擾等技術(shù)。2）宿主范圍廣，它既能感染分裂細(xì)胞,又能感染非分裂細(xì)胞；3）攜帶的外源基因可長(zhǎng)期存在,穩(wěn)定表達(dá)，且受周圍基因調(diào)控；4）可定點(diǎn)整合在人19號(hào)染色體