【正文】 濃度平均值。7原代培養(yǎng)的概念：取自體內(nèi)新鮮組織并置于體外條件下生長的細(xì)胞在傳代之前稱為原代培養(yǎng) 。（3）機(jī)械，物理等因素（離心：促進(jìn)附著。細(xì)胞株潛伏期一般為6～24小時。pH，Hela：太酸或太堿，成纖維細(xì)胞樣；標(biāo)準(zhǔn)pH，上皮樣細(xì)胞。細(xì)胞的粘附。扁平，不規(guī)則多角形，中有圓形核。1細(xì)胞培養(yǎng)的概念？習(xí)慣上泛指所有的體外培養(yǎng)，即器官培養(yǎng)，組織培養(yǎng)，和細(xì)胞培養(yǎng)的總稱。生長特點(diǎn)：易相連成片，相靠—緊密相連—成薄層—鋪路石狀。培養(yǎng)技術(shù)方法。細(xì)胞密度 3T3：低密度，成纖維細(xì)胞樣，高密度，上皮樣細(xì)胞。對數(shù)生長期：細(xì)胞數(shù)隨時間變化成倍增長，活力最佳，最適合進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。流動：培養(yǎng)液流動可阻止細(xì)胞附著。原代培養(yǎng)與體內(nèi)原組織很相似，具異質(zhì)性，相互依存性強(qiáng)，細(xì)胞克隆形成率低。然后，將細(xì)胞懸液等量加入培養(yǎng)板的每個孔中，培養(yǎng)時間7天。②常用血清有胎牛血清（剖腹產(chǎn)）、新生牛血清（小于24h）、小牛血清（10～30D）、兔血清、馬血清等，其中以胎牛血清質(zhì)量最好。必要時用：2% NaOH浸泡過夜自來水充分沖洗 ，清潔液洗刷 5%鹽酸溶液浸泡30分鐘自來水和蒸餾水沖洗（15－20遍）晾干備用 ,紫外線直接照射或輻照滅菌15．無菌操作的注意事項(xiàng)？、PBS、培養(yǎng)基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％。紫外線燈應(yīng)距地面 ，且消毒的物品不宜相互遮檔，照射不到的地方起不到消毒作用。后者則主要用器械的浸泡及皮膚和操作室壁面的擦試消毒。(2)器材：各種培養(yǎng)器皿及器械清洗消毒不徹底，例如洗刷不干凈．污物殘留及培養(yǎng)用液等滅菌不徹底都可以引入有害物質(zhì)。用濾器過濾除菌。： 細(xì)胞株 密度抑制 接觸抑制 原代培養(yǎng) 傳代1細(xì)胞株（cell strain）：通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志的培養(yǎng)物稱細(xì)胞株。22．凍存液的作用是什么？（1）保存種子細(xì)胞，以便隨時取用。23．為什么細(xì)胞計(jì)數(shù)時，細(xì)胞懸液逸出槽外時要重做？公式中除以4因?yàn)橛?jì)數(shù)了4個大格的細(xì)胞數(shù)。并可根據(jù)不同細(xì)胞對胰蛋白酶的不同耐受時間而分離和純化所需要的細(xì)胞。方式:：離心（1000轉(zhuǎn)/分）去上清，沉淀物加新培養(yǎng)液后 再混勻傳代。原代培養(yǎng)，特別是正常細(xì)胞的培養(yǎng)，應(yīng)采用營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)液。組織塊法（1）取材、修剪、組織剪或切成1mm3左右的小塊。注意事項(xiàng):1組織塊接種后l～3天，由于游出細(xì)胞數(shù)很少．組織塊的粘貼不牢固．在觀察相移動過程中要注意動作輕巧．盡量不要引起液體的振蕩而產(chǎn)生對組織塊的沖擊力使其漂起。流式細(xì)胞術(shù)是二十世紀(jì)七十年代發(fā)展起來的高科學(xué)技術(shù),流式細(xì)胞儀集計(jì)算機(jī)技術(shù)、激光技術(shù)、流體力學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、細(xì)胞免疫學(xué)于一體,在血液學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、藥物學(xué)、分子生物學(xué)等學(xué)科廣泛應(yīng)用。 流式細(xì)胞儀的工作原理是將待測細(xì)胞放入樣品管中，在氣體的壓力下進(jìn)入充滿鞘液的流動室。 這些熒光信號的強(qiáng)度代表了所測細(xì)胞膜表面抗原的強(qiáng)度或其核內(nèi)物質(zhì)的濃度，經(jīng)光電倍增管接收后可轉(zhuǎn)換為電信號，再通過模／數(shù)轉(zhuǎn)換器，將連續(xù)的電信號轉(zhuǎn)換為可被計(jì)算機(jī)識別的數(shù)字信號。1HLAB27分析2細(xì)胞周期分析3凋亡分析4淋巴細(xì)胞亞群分析5白血病分型6細(xì)胞因子分析7血小板分析8干細(xì)胞分析9流式細(xì)胞儀在其它方面的應(yīng)用。（安裝488和635nm激光）能同時檢測到的六大參數(shù)分別是什么？41. 簡述流式細(xì)胞儀的特點(diǎn)和檢測范圍。碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一種核酸染料，它不能透過完整的細(xì)胞膜，但在凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞，PI能夠透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核紅染。由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3’OH形成，很少能夠被染色。50、熒光激發(fā)濾色鏡分哪幾類?各自的激發(fā)波長是多少？激發(fā)濾色鏡為觀察不同性質(zhì)的物體所設(shè)計(jì)的濾色鏡或?yàn)V色鏡組，通常可分為紫外激發(fā)(U激發(fā))、紫色激發(fā)(V激發(fā))、藍(lán)色激發(fā)(B激發(fā))和綠色激發(fā)(G激發(fā))等四種。3)標(biāo)本所發(fā)的熒光較弱，觀察時應(yīng)盡可能在較暗的室內(nèi)條件下進(jìn)行。好的顯微鏡最大可放大2000倍，可分辨相距1X10－6cm的兩點(diǎn)。細(xì)胞凋亡的主要檢查手段。凋亡小體 細(xì)胞凋亡有，被鄰近細(xì)胞或巨噬細(xì)胞吞噬；細(xì)胞壞死無，細(xì)胞自溶。蛋白質(zhì)合成 細(xì)胞凋亡有；細(xì)胞壞死無。TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡細(xì)胞凋亡和細(xì)胞壞死的區(qū)別：起因 細(xì)胞凋亡是生理或病理性的；細(xì)胞壞死是病理性變化或劇烈損傷。正常人眼在照明良好的情況下，若小于這個距離，就分辨不清是兩個物體點(diǎn)，而被誤認(rèn)為是一點(diǎn)。4)熒光顯微照相時，因曝光時間相對較長，可采用感光度較快的膠片 5)避免直視紫外線光源，將紫外線防護(hù)板(黃色)裝在載物臺前以防紫外線損傷視網(wǎng)膜。④核酸內(nèi)切酶活化，導(dǎo)致染色質(zhì)DNA在核小體連接部位斷裂，形成約200bp整數(shù)倍的核酸片段，凝膠電泳圖譜呈梯狀；⑤凋亡通常是生理性變化 5根據(jù)標(biāo)本染色的不同如何選擇濾光片：染成藍(lán)色或綠色的標(biāo)本使用紅色濾光片、染成紅色的標(biāo)本使用綠色濾光片、染成黃色或棕色的標(biāo)本使用藍(lán)色濾光片、染成紫色的標(biāo)本使用綠色濾光片、染成藍(lán)——紫色的標(biāo)本使用黃色濾光片5細(xì)胞凋亡的生物學(xué)意義。由于細(xì)胞周期各時相的DNA含量不同 ,通常正常細(xì)胞的G1 /G0期具有二倍體細(xì)胞的DNA含量 (2N) ,而G2 /M期具有四倍體細(xì)胞的DNA含量 (4N) ,而S期的DNA含量介于二倍體和四倍體之間。亞二倍體峰的出現(xiàn)，實(shí)際上是由于細(xì)胞凋亡時DNA含量低于正常細(xì)胞，使其在直方圖上表現(xiàn)為一個熒光強(qiáng)度比正常細(xì)胞要小的峰（亞二倍體峰），即凋亡細(xì)胞DNA對PI可染性降低。但由于目前所使用的各種熒光染料都是寬發(fā)射譜性質(zhì)，雖然它們之間各自發(fā)射峰值各不相同，但發(fā)射譜范圍有一定的重疊，F(xiàn)ITC探測器會探測到少量的PE光譜，而PE探測器則檢測到較多的FITC光譜。HLAB27軟件首先在FSCFL2的點(diǎn)圖上確定CD3強(qiáng)陽性細(xì)胞群體的位置，設(shè)定一個CD3+T淋巴細(xì)胞門，然后再根據(jù)FSC設(shè)定光散射門，去除FSC過大或過小的細(xì)胞，確保門內(nèi)至少有50%的CD3+T淋巴細(xì)胞，這樣通過二者的結(jié)合，將隨后進(jìn)行的分析嚴(yán)格地定位在T淋巴細(xì)胞上。，鞘液有哪些作用？鞘液的作用有二：一是約束樣品使之在噴嘴中心以提高測量精度；二是防止樣品靠近噴孔壁以避免堵塞噴孔。通過對流動液體中排列成單列的細(xì)胞進(jìn)行逐個檢測，得到該細(xì)胞的光散射和熒光指標(biāo)，分析出其體積、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、DNA、RNA、蛋白質(zhì)、抗原等物理及化學(xué)特征。流式細(xì)胞儀通常以激光作為發(fā)光源。它不僅可測量細(xì)胞大小、內(nèi)部顆粒的性狀, 還可檢測細(xì)胞表面和細(xì)胞漿抗原、細(xì)胞內(nèi)DNA、RNA含量等,可對